Стимуляция вилочковой железы: значение упражнения

Работа тимуса имеет огромное значение для иммунной системы. Поскольку основная деятельность вилочковой железы приходится на детский и подростковый возраст человека, полезно знать, как её можно стимулировать, находясь в более позднем возрасте. Имейте в виду: работа тимуса вполне может повернуть вспять биологические часы организма. Чем дольше будет работать вилочковая железа, тем на больший срок теоретически возможно отодвинуть процесс старения.

Простукивание тимуса

Массаж вилочковой железы выполнять невероятно просто! Для этого нужно просто сжать кулак любой руки и начать простукивать верхний край грудной клетки. Ориентир положения таков: над грудиной, над сердцем, но ниже выемки под горлом.

Не следует этим заниматься фанатично, однако чувство легкого дискомфорта у вас должно присутствовать обязательно. Меняйте для этого силу удара и его частоту.

Внимание! Человеческий организм может приспособиться к любым ощущениям, а приспособившись, начать их игнорировать. Вот почему нужно обязательно давать себе почувствовать немного дискомфорта. Только в этом случае стимуляция тимуса принесет вам пользу. 

Много времени на такое упражнение не требуется: от 1 до 2 минут вполне достаточно, но делать это необходимо каждый день. 

Нужен ли такой массаж детям?

Это зависит от возраста. Активная работа вилочковой железы продолжается до 5 лет, поэтому если ребенок младше этого возраста, подобное простукивание точно не требуется. Если же речь идет о ребенке постарше – приблизительно возраста средних классов школы – тут уже всё зависит от желания. 

Активация вилочковой железы, описанная в этой статье, в любом случае не принесет никакого вреда, но только в том случае, если вы её будете правильно выполнять. Если же такие действия по какой-то причине причиняют ребенку боль (не следует путать с простым дискомфортом), то возможны два варианта:

Пусть покажет взрослый

• Массаж тимуса выполняется неправильно. Решение проблемы состоит в том, чтобы взрослый показал, как правильно нужно выполнять эту процедуру. 

Подумайте от отказа от массажа

• Возможно в наружной области вилочковой железы существуют какие-то повреждения кожи и их дополнительное раздражение не очень приятно. В этом случае просто откажитесь от такого массажа.

Ещё одна ситуация – если ребенок часто болеет. Несмотря на то, что тимус и так выполняет свою работу, его вполне можно стимулировать, и – кто знает! – возможно именно такое простое действие подтолкнет организм в сторону выздоровления.

Беременные: нужно ли им стимулировать вилочковую железу

Иммунитет беременной женщины нужен двоим: матери и ребенку. Соответственно, организм работает за двоих. Конечно, это ещё зависит от триместра, на котором находится беременная. Однако это ей никоим образом не мешает выполнять упражнения для вилочковой железы. Единственное что: нужно их выполнять правильно. Даже если ожидаемого эффекта от такой процедуры не будет, вреда от неё тоже ждать не нужно. 

Что по поводу пожилых людей?

Всё дело в том, что тимус к 40 годам практически сходит “на нет”. Если мы говорим о человеке, которому 70 лет или больше, тимуса у него просто нет и быть не может. Вместо него – жировая прослойка, стимулировать которую бессмысленно.

Таким образом массаж тимуса пожилым людям не имеет смысла, поскольку с высокой степенью вероятности можно утверждать, что у них уже нет такого органа.

Если предположить, что тимус весь заместился жировой составляющей, “стимулируя” её вы не добьетесь ничего, хотя и вреда никакого не будет. Просто будете выполнять не нужное действие.

Как стимулировать вилочковую железу (Видео)

«БАБОЧКА», ПРОДЛЕВАЮЩАЯ МОЛОДОСТЬ и СУП ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ИММУНИ — Здоровье — православная социальная сеть «Елицы»

Есть у нас важный и загадочный орган – тимус, или вилочковая, или зобная железа, которую называют еще и «бабочкой» из-за сходства по форме с этим насекомым. Тимус тесно связан с иммунитетом человека, с кроветворением, а также со щитовидной железой. Гормоны вилочковой железы принимают участие в работе надпочечников и половых органов. В тимусе вырабатываются пептиды-регуляторы, которые обеспечивают размножение и созревание Т-лимфоцитов в центральных и периферийных органах кроветворения; биологически активные вещества: инсулиноподобный фактор, уменьшающий уровень сахара в крови; также фактор, снижающий уровень кальция в крови; и фактор роста, обеспечивающий рост тела.

Расположена вилочковая железа за грудиной. Обнаружить ее можно, приложив два пальца к верхней части грудины ниже ключичной впадины. Расположение тимуса одинаковое у детей и у взрослых, а вот анатомия органа имеет возрастные особенности. Интересно, что у новорожденного ребенка масса тимуса составляет 18-20 г, то есть, младенец обеспечен достаточно мощной иммунной системой, чтобы успешно бороться с микробами, которые набрасываются на человека, когда он появляется на свет.
Но с возрастом человека в вилочковой железе начинается инволюция, она уменьшается, поэтому важно своевременно поддерживать ее функции.

В области тимуса через каждый сантиметр расположены акупунктурные точки, массируя которые, можно избавиться от многих болезней или облегчить их течение, снять боль, например, в желудке. Также массаж этих точек является профилактикой старения, способствует укреплению иммунной системы, имеет еще и противоопухолевый эффект.

Для этой процедуры советую приготовить мазь: взять по 50 г свежесмолотого корня имбиря (способствует кровообращению) и сливочного масла, добавить 1 ст. л. сока алоэ. Мазь втирают массажными движениями в течение дня, при плохом самочувствии, для профилактики новообразований, или если в груди вы нащупали какие-то узелки, и т.п. Такой массаж в области вилочковой железы способствует выведению всякого мусора, накапливаемого организмом. Если у человека крепкая иммунная система (в наше время бывает нечасто), организм сам справляется с болезнью.
Отмечу, что все новообразования имеют «иньский» характер, то есть, это болезни холода, которые вызывает сырая пища, холодная вода и т.п. А если «иньские» болезни побеждают, то надо перейти в энергию ян, отдать предпочтение теплой пище, больше употреблять тушеных, запеченных овощей, блюд, которые согревают. Полезно есть сало с хреном. Чем старше человек, тем больше ему нужно питаться теплой пищей.

К таким «теплым» продуктам относится имбирь – доступное средство для улучшения работы иммунной системы. Отличный иммуномодулятор, который можно использовать как в течение года, так и весной. Рекомендую приготовить суп для иммунной системы с имбирем и курицей, но только с домашней, желтой, можно даже со старой – такую птицу, выращенную на своей кукурузе, пшенице, овощах, в своем хозяйстве, продают на рынках.

СУП ИЗ КУРИЦЫ ДЛЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

Домашняя курица – превосходный иммуномодулятор. Но, прежде чем варить, хорошо вымойте ее, аккуратно разрежьте и выньте мешочек с желчью. Я его отрезаю маленькими ножницами, мою и глотаю. Мой тибетский учитель всегда носил мешочек с желчью медведя. Желчь курицы, гуся, утки и др. служит профилактическим средством против образования камней, дискинезии желчных путей, прекрасно лечит поджелудочную железу, устраняет полипы и т.п. Кстати, аллохол, который употребляют при болезнях желчевыводящих путей, также содержит желчь. Для супа берем третью воду, а первую и вторую сливаем. Лапы можно почистить и сварить. Через 40-60 мин после начала готовки в воду положите две большие луковицы – это мощный природный антибиотик. Лук очень хорош и для поджелудочной железы. Когда суп почти готов, кладете порезанный кусочек имбиря. Это растение улучшает кровообращение, содержит массу полезных веществ, оказывающих противополипозное действие; непосредственно связано с гипофизом и тимусом. Имбирь входит в состав многих препаратов народной медицины, которые рассасывают опухоли, образования, он полезен мужчинам и женщинам.

массаж тимуса — 25 рекомендаций на Babyblog.ru

Не сдаемся и встречаем весну, девочки. Всё получится!

10+1 способов от womanpractice.ru

, которые помогут дожить до весны и встретить ее во всей красе.

Особенность наших рекомендаций в том, что их исполнение зависит только от вас, а не наличия/отсутствия идеального мужчины, личного острова и круглосуточно доступного SPA.

Спасибо, не берём! Глобальные революционные методики типа «завтра навсегда прощаюсь с бутербродами, сливаюсь в экстазе со шпинатом, занимаюсь фитнесом и йогой по два часа в день, и, конечно, ужинаю кефиром, а не конфетами» хороши ровно до тех пор, пока не приходит пора воплощать их в реальность.

А истощенному долгой в наших краях зимой организму нынче меньше всего хочется суровых безжалостных мер и совершения подвигов, а больше всего — заботы. Ее и обеспечим.

1. И все-таки сон. Да-да, некогда, никак невозможно, не успеваете и всё такое прочее… Тем не менее. Если у вас нет грудного ребенка, приучитесь ложиться спать не позже 11. И спать не меньше 8 часов. Придет весна, вернетесь ко всем делам-заботам, поздним засыпаниям и ранним подъемам. А пока — это не баловство, а необходимость. Конец зимы — серьезная нагрузка для организма в нашем климате, поберегите себя.

Результат: посвежевшее лицо и появившиеся силы, которых как раз хватит, чтобы дожить до весны.

2. Воды, еще воды! Обязательно пейте воду. Приучите себя начинать день со стакана воды. Нет, не чая и не кофе, а воды. В воду можно добавить лимонный сок и/или мед — это насытит организм витаминами и усилит очистительные процессы. Попадая утром в желудок, вода «умывает» его, подготавливая к новому дню. Внутренние «водные процедуры» нам нужны ничуть не меньше, чем внешние. Вопрос привычки, и эту привычку стоит завести. В течение дня тоже не забывайте пить воду.

Результат: улучшение обмена веществ, увлажнение кожи, прибавление жизненных сил. А вот лишние сантиметры и килограммы от такой простой и полезной привычки, наоборот, будут уходить, что в ожидании весны для всех нас актуально.

3. Витамин С! Лимоны. Или шиповник. Или клюква. Или гранат, киви, апельсины и квашеная капуста. А лучше без «или». Потребность организма в витамине С в конце зимы серьезно увеличивается, без него мы болеем, чувствуем вялость и упадок сил. Приучите себя ежедневно получать дозу натуральной «аскорбинки».

Результат: бодрость и здоровье, защищенность от простуд и вирусов.

4. Постучи по тимусу! Тимус (вилочковая железа) непосредственным образом влияет на наше самочувствие и уровень энергии. Тимус расположен на центральной телесной оси, ориентировочно — на 4 пальца выше уровня сосков (но для очень большой груди это может быть иначе) и на 2 пальца ниже ключичной ямки.

Как стимулировать: каждое утро 20-10 раз легонько расслабленным кулачком простукивайте эту зону, при этом глубоко дышите. В течение дня можно повторять эту процедуру, но лучше в первой половине дня. Кстати, Кинг-Конг своим фирменным жестом именно тимус стимулировал. А если при простукивании имитировать звук Кинг-Конга, то и непроговоренные эмоции заодно проработать получится.

Результат: стимуляция тимуса укрепляет иммунитет. На энергетическом уровне — повышается ощущение радости жизни, счастья, снимаются сердечные блокировки.
Если область тимуса растирать, это, напротив, вызывает расслабление, снятие напряжений. Такую процедуру полезно делать вечером, перед сном.
Приятный побочный эффект: стимуляция тимуса укрепляет и приподнимает грудь. Не обещаем кардинального увеличения размера, но обещаем повышение упругости и приятную округлость в нужных местах. Честно-честно, мы проверили!

5. Сколько-сколько оттенков серого? Шлепки! Завершив простукивания тимуса, «прошлепайте» всё тело, обходя грудь и интимные органы. Лучше всего делать похлопывания расслабленной ладошкой после утреннего душа.
Порядок: декольте, шея (с боков и под подбородком), лицо, спина — заводя руки назад, ребра, живот.
Руки и ноги начинайте прохлопывать от периферии к центру.

Результат: этот прием активизирует микроциркуляцию крови, тонизирует, согревает, придает сил. Буквально через несколько дней становятся заметны и другие приятные эффекты — в частности, исчезает сухость кожи, повышается упругость, подтягиваются формы, уходит лишний объем.
Можно сделать энергетический массаж для открытия каналов (подробнее).

6. Прогулки. Минимум полчаса в день. Пешком. На свежем воздухе. Обязательно — глубокое дыхание. Без отговорок. Если совсем уж холодно, ограничьтесь качественным проветриванием помещения.

Результат: свежий цвет лица, активизация лимфотока и кровотка, улучшение обмена веществ.

7. О зарядке замолвите слово. Вот он, камень преткновения, о который разбивается столько славных планов «новой жизни». Проблема в том, что мы стремимся нагрузить себя по максимуму, а задачу следует ставить иную: приучить тело к регулярной нагрузке и — ключевое — к удовольствию от нее. Если вы создадите мега-план: подъем в 5 утра, 5 километров пробежки, 45 минут фитнеса, полчаса йоги и контрастный душ (эх, бассейн и ролики еще вместить бы!), то при нарушении одного из пунктов — будильник не услышала, шнурок на кроссовке развязался и вообще из-под одеялка вылезать не пожелала, наверняка отмените всю эту ого-программу.

Решение в том, чтобы подобрать небольшой комплекс, который РЕАЛЬНО выполнять каждое утро. Например, это может быть «живот Тигра и Дракона» из даосских практик, комплекс для красивой талии и шеи (подробнее), суставная гимнастика по Норбекову или другие ее варианты, пара кругов Сурьи-Намаскар, женская славянская гимнастика или любые другие упражнения на растяжку и легкий разогрев.

Результат: улучшается обмен веществ, повышается количество жизненных сил, становится стройнее фигура (5 дней по 15 минут — лучше и эффективнее, чем полтора часа раз в пять дней).
А главное — тело постепенно войдет во вкус физических нагрузок и со временем, когда уровень энергии станет достаточным, запросит «добавки». Добровольно и с удовольствием.

8. Ванна вместо душа. Хотя бы раз в неделю. Да-да, мы в курсе, что душ быстрее, и всем некогда. Тем не менее. Ванна. С солью и апельсиновым, можжевеловым или жасминовым маслом, или с душистой пеной, с большой чашкой чая, маской для лица, бальзамом для волос, скрабом и прочими бесконечно вдохновляющими женскими штучками.
Обязательная часть — лежать и наслаждаться.
Особо трудолюбивые барышни умудряются даже такое времяпровождение превратить в список дел, когда маска для волос сменяют маску для тела, а та уступает дорогу скрабу для пяток. Баночки в данном случае нужны для углубления релаксации, а не в качестве атрибута гонки за красотой.

Результат: расслабление, снятие глубинных и поверхностных напряжений, спокойствие и внутренняя гармония. Ну и, не будем скромничать, сияющий вид!

9. Цветотерапия. Наши глаза очень устают от отсутствия ярких цветов. Скоро все станет зеленым, алым, розовым, сияющим, белым, голубым, солнечным. А пока — только белое в лучшем случае, и серое — если со снегом не сложилось. Хватить плодить пресловутые оттенки серого, разбавьте монохром!
Цветные, яркие сапоги — или хотя бы перчатки, пуховик цвета сочной листы — или просто небесно-голубой шарфик, оранжевый комбинезон или, в конце концов, полосатые разноцветные носки.
Черное, белое, коричневое и серое, не разбавленные яркими штрихами — под запретом!

Результат: «Жизнь заиграла новыми красками» может быть очень буквальным выражением. Попробуйте.

10. Ритуал. Ежедневный. Приятный и исключительно для удовольствия. То ли прогулка в обеденный перерыв, то ли непременный утренний кофе с чем-то вкусным, то ли долгое, прочувствованное расчесывание волос перед сном. А может, вопреки всему взять и выделить 10 минут в середине дня на чтение книжки?

Результат: внесение в обычный распорядок приятных для нас ритуалов позволяет выстраивать день не вокруг обязанностей, а вокруг этих самых приятностей. А параллельно наблюдать, что дни становятся всё длиннее, солнце светит всё ярче, и птицы, цветы и люди вот-вот начнут вести себя соответственно тому, что весна пришла!

10+1. Вечные ценности. Влюбиться. Есть черный шоколад. Заниматься сексом с желанным мужчиной. Комментарии излишни.

Результат: весна!!!

Европейский Институт Здоровья Семьи, г. Павловск | ВНИМАНИЕ!Новая услуга

15.02.2019

Тимус (вилочковая железа) – является центральным органом иммунной системы. В нем происходит созревание и развитие т-лимфоцитов, клеток иммунной системы. Расположенный тимус в верхней части грудной клетки. Состоит из долей, плотно прилегающих друг к другу, иногда сращенных. Нижние части обеих долей широкие, а верхние узкие – поэтому орган напоминает двузубую вилку, отсюда и произошло его название. Тимус растет и формируется до наступления периода полового созревания, потом уменьшается в размерах, и к преклонному возрасту весит всего 6-7 граммов. Отвечает за выработку таких гормонов как тимозин, тимпоэтин, тималин, инсулиноподобный фактор роста.

Его главной функцией является иммунная защита. Поскольку она активна в детском возрасте, обследование этого органа назначают младенцам в качестве плановой процедуры, а деткам постарше – в профилактических целях или при жалобах на снижение иммунитета. 

До недавнего времени самым информативным методом обследования считался рентген грудной клетки. На сегодняшний день самым информативным и безопасным способом исследования этого органа является УЗИ. Это метод позволяет выявить индивидуальные особенности состояния органа у детей, а также в полной мере оценить его структуру. Чаще его назначают в сочетании с анализами крови и мочи. 

Показания к УЗИ вилочковой железы

• частые респираторные заболевания (больше 10 раз в год)
• частые бронхиты, воспаления лёгких, синуситы, как осложнения инфекционных заболеваний
• склонность к дерматитам и аллергическим реакциям
• диатезные проявления даже при соблюдении диеты
• избыточный вес в сочетании с малоподвижностью и раздражительностью
• чётко выраженный сосудистый рисунок в области грудной клетки
• бледность и потливость
• увеличение лимфатических узлов

Что может выявить УЗИ вилочковой железы+

В время исследования врач оценивает в первую очередь размеры. Затем определяется структура органа. Она должна быть в норме эхогенной и однородной.

Основные заболевания и патологии тимуса:

• тимомегалия – выраженное увеличение железы;
• синдром увеличенной вилочковой железы;
• тимома;
• Т-клеточная лимфома;
• миастения;
• синдром MEDAC и др

Самая часто встречающаяся патология тимуса – его увеличение или тимомегалия.

Что это такое и нужно ли это лечить?

До конца этот вопрос остается спорным.На данный момент можно сказать точно – тимус отвечает за иммунитет. Известно, что дети с тимомегалией (увеличенной вилочковой железой) более подвержены респираторным вирусным заболеваниям. Малышам с тимомегалией рекомендована консультация иммунолога для определения тактики поддержания иммунитета.

Но большинство исследований показывают, что у большинства детей тимус приходит в норму к шести годам без дополнительного лечения. В норме после 12 лет тимус на УЗИ не определяется.

В чём особенность детей с тимомегалией? Нужно помнить, что деток с такой патологией нужно больше беречь от различных инфекционных болезней, избегать вместе с ним скоплений людей в период сезонных вспышек заболеваний. Нельзя закаливаться популярными способами типа обливаний или стояния босыми ногами на снегу, также следует избегать стрессов и нервного перенапряжения. Хотя,  даже на кратковременную простуду тимус вполне может ответить увеличением размеров.

Как подготовиться

Специальной подготовки для данного исследования не требуется. Детям в возрасте до 9 месяцев обследование проводят в положении лежа, от 9 месяцев и до полутора лет – в положении сидя, после полутора – стоя.

 

Стоимость УЗИ тимуса в Павловске:

A04.06.003

Ультразвуковое исследование вилочковой железы (тимуса)

1100

Для записи на УЗИ тимуса в Павловске, Пушкине, Коммунаре, Славянке, Фёдоровском, позвоните  по телефону

608-00-66

452-01-01

УЗИ вилочковой железы детям

directions

Вилочковая железа (тимус) — один из важнейших органов иммунной системы, отвечающий за защиту организма от инфекций и вирусов, формирование иммунитета и развитие организма в целом.

Вилочковая железа у детей формируется в утробе матери на шестой неделе беременности и растет вплоть до подросткового возраста. У новорожденных и детей младшего возраста вилочковая железа работает очень активно, вырабатывая Т-лимфоциты, которые, являясь клетками иммунной системы, защищают и оберегают детский организм от заболеваний, бактерий, инфекций. К 12-13 годам функции вилочковой железы у подростков постепенно ослабевают, и организм самостоятельно вырабатывает защиту от болезней.

Врачи-специалисты

Врач ультразвуковой диагностики

В настоящее время на сайте ведутся работы по изменению прайс-листа, актуальную информацию уточняйте по тел: 640-55-25 или оставьте заявку, с Вами свяжется оператор.

Цены на услуги

• Ультразвуковое исследование (УЗИ) вилочковой железы 1100a

Информация и цены, представленные на сайте, являются справочными и не являются публичной офертой.

Наши клиники в Санкт-Петербурге

Получить подробную информацию и записаться на прием Вы можете по телефону +7 (812) 640-55-25

При аномалиях развития, увеличении вилочковой железы у детей, организм становится менее защищенным и восприимчивым к заболеваниям различного характера и аллергиям.

Как правило, нарушения в работе вилочковой железы, патологии ее развития можно выявить во время УЗ диагностики.

Если Вы ищете грамотного детского специалиста и хорошего диагноста, можете обратиться в медицинский центр «Медицентр», где ведут прием квалифицированные детские врачи, имеющие многолетний опыт работы с детьми различных возрастов. В «Медицентр» обращаются с детьми с первых дней рождения.

Изменения в работе вилочковой железы могут возникнуть в любом детском возрасте, начиная с грудничкового периода.

Показания к УЗИ вилочковой железы у детей:

• частые простудные заболевания у ребенка;
• увеличение, воспаление аденоидов, миндалин, лимфатических узлов;
• увеличение веса у ребенка, слишком большой вес при рождении;
• затрудненное дыхание;
• повышенное потоотделение;
• частые срыгивания у младенцев;
• почечная недостаточность;
• бледность кожи;
• нарушения ритма сердца;
• усиливающийся при лежании кашель;
• отеки;
• повышенный/пониженный мышечный тонус;
• аллергия неизвестного происхождения;
• перенесенные тяжелые инфекционные заболевания.

Если Вы заметили схожие симптомы у Вашего ребенка, необходимо срочно обратиться к детскому специалисту, который направит на УЗИ вилочковой железы, а после получения результатов назначит лечение.

Увеличение вилочковой железы у детей важно диагностировать на ранних сроках, т.к. ее изменения влияют на самочувствие ребенка в целом. Он больше устает, невнимателен, чаще и тяжелее других детей болеет, неусидчив и с трудом концентрирует внимание. Как правило, в подобных случаях детский врач назначает прием иммунологических препаратов ребенку, чтобы его организм смог справиться с недугом. Также при этом заболевании ребенку необходим здоровый образ жизни в физическом и эмоциональном плане, минимальное пребывание на солнце, длительный сон, прогулки на свежем воздухе, но не в местах большого скопления людей и во время вспышек ОРВИ и гриппа. В особо тяжелых случаях может понадобиться хирургическое вмешательство.

Подготовка к УЗИ вилочковой железы у ребенка

Обследование не требует специальной подготовке, необходимо только знать вес и рост ребенка на момент проведения процедуры.

834,1423,1398,933,1306,1003

Хочу выразить огромную благодарность врачу-травматологу Джуманову Эзизу! Обращалась в клинику на пр. Маршала Жукова 28к2 с запущенной травмой ноги после кошачьего укуса. Запущенной она стала из-за того, что в районной травме не оказали должной помощи, а сказали мазать мазью и ждать. Когда я заподозрила, что мне назначили неправильное лечение, решила обратиться к вам в клинику. Доктор Джуманов очень внимательно отнёсся к ситуации и незамедлительно оказал мне первую помощь! Наблюдалась у него несколько недель, рана прекрасно зажила, благодаря рекомендациям и прохождению необходимых процедурам врача. Спасибо ему огромное, он настоящий профессионал своего дела!

Уткина Евгения Игоревна 19.06.2021 23:01
medi-center.ru

Хочу сказать, спасибо, Медцентру. Столкнулись, к сожалению, и мы с мужем с ковидом. Однако получилось так, что с нашей поликлиники врачи не то чтобы не ехали на дом, там в принципе колцентр не работает, 25 телефонов и НИ ПО ОДНОМУ нам не ответили. А клиника Медицентр, работает и с пациентами по ДМС и ОМС!!! Не смотря, на всю загруженность с ковидными пациентами в нашем районе, в этом центре всегда ответят и отправят врача! И доктор ОБЯЗАТЕЛЬНО доедет! Ещё раз, спасибо, что в нашем районе есть такой центр, иначе я даже не представляю, как бы мы тут спасались в такой сложной ситуации.

Алферов Петр Леонидович 28.12.2020 20:17
medi-center.ru

Большое спасибо врачу терапевту Дерешовскому Александру Сергеевичу за профессиональное исполнение своей работы, за терпение и человечность. Благодарю сотрудников колцентра клиники и мед брата, который собирает мазки для анализа на корону. Все перечисленные сотрудники оперативно и профессионально помогали побороть вирус. Здоровья Вам и терпения. Молодцы!

Носовец Влада Витальевна 16.09.2020 09:42
medi-center.ru

Хотела бы порекомендовать и выразить благодарность Врачу хирургу Джораеву Агамурату ( охтинская аллея 18) за его профессионализм, чуткий подход к пациентам, всегда боялась хирургов, но после лечения у этого врача все перевернулось. Агамурат, если вы это читаете спасибо Вам большое.

Сайбель Ольга Евгеньевна 27.07.2020 16:07
medi-center.ru

Я, Сайбель Ольга Евгеньевна, 05.04.1976 года рождения, убедительно прошу вознаградить всех врачей, младший медицинский персонал и администраторов клиники ООО «Медицентр ЮЗ», г.Мурино, Охтинская аллея, д.18, за огромный вклад в деле спасении моей жизни. У меня диагностирован рак подъязычной области полости рта. Абсолютно весь медицинский персонал этой клиники оказывали мне не только квалифицированную медицинскую помощь на высочайшем уровне, но и выходили за рамки должностных обязанностей, проявляя ко мне человеческое сочувствие, корректное отношение и искреннюю заинтересованность в оказании мне максимального содействия на пути к моему выздоровлению. Огромное Вам спасибо! Большое человеческое спасибо!!!

Хочу выразить благодарность врачу-терапевту Ковалевскому Владимиру Андреевичу. Была у него на приеме 1 марта 2020 года в клинике на Охтинской аллее, 18 по поводу простудного заболевания. Доктор провел подробный осмотр, назначил рентген носовых пазух. Рентген сделали сразу же с описанием. Владимир Андреевич по результатам осмотра и снимка назначил лечение. Мне стало лучше уже на следующий день! Спасибо огромное таким молодым специалистам, которые знают свое дело! С уважением и благодарностью, Птицына Наталья Юрьевна.

Прейскурант

	I. КОНСУЛЬТАЦИИ ВРАЧЕЙ:
1.01	Консультация врача	1300
1.02	Консультация заведующего отделением	1500
1.03	Консультация педиатра	1300
1.04	Консультация педиатра повторная( до 14 дней по одному случаю)	1100
1.05	Консультация эндокринолога детского, иммунолога-аллерголога	1600
1.06	Консультация на дому (без учета стоимости транспортных расходов)	2500
1.07	Оформление справки через ВК	1200
1.08	Оформление справки 086/У	1300
1.09	Оформление документов в ДДУ	2000
1.10	Оформление документов на медико-социальную экспертную комиссию (МСЭК)	2500
1.11	Оформление приложения к посыльному листу на МСЭК	1300
1.12	Оформление санаторно-курортной карты	1300
1.13	Оформление справки в бассейн, в спортивную секцию.	1000
1.14	Оформление справки в детский сад, школу.	1000
1.15	Прием врача для получения справки на санаторно-курортное лечение (070/У)	1300
1.16	Совместная консультация детских травматолога-ортопеда и хирурга	2400
1.17	Совместная консультация детских хирурга и уролога-андролога	2400
1.18	Совместная консультация невролога-эпилептолога	2400
1.19	Консультация гинеколога-эндокринолога (1 час)	1600
1.20	Консультация психолога (психотерапевта, психиатра, нарколога)	1500
1.21	Составление годовой программы диспансерного наблюдения	2000
1.22	Консультация логопеда(диагностика, составление плана занятий)	1300
1.23	Консультация доктора медицинских наук, профессора	3000
1.24	Групповое занятие по программе «Здоровый образ жизни»	800
1.25	Индивидуальное занятие по программе «Здоровый образ жизни»	1600
1.26	Консультация врача КМН	1800
1.27	Повторная консультация врача КМН	1400
1.28	Консультация детского невролога	1500
1.29	Занятия с логопедом (30 мин.)	1000
1.30	Консультация ревматолога	1500
	II. МЕДИЦИНСКИЕ МАНИПУЛЯЦИИ:
2.01	Измерение давления за наличный расчет	200
2.02	Внутримышечная инъекция (без стоимости медикаментов)	200
2.03	Внутривенная инъекция (без стоимости медикаментов)	250
2.04	Внутрикапельное вливание (без стоимости медикаментов)	500
2.05	Подколка лек.препарата в капельную систему (1 шт)	100
2.06	Взятие крови из вены на исследование с использованием 1 вакуумной пробирки	250
2.07	Использование дополнительной вакуумной пробирки при взятии крови на исследование	50
2.08	Использование стерильного контейнера для забора анализов	50
2.09	Взятие крови из вены на исследование с использованием 1 иглы-бабочки	260
2.10	Взятие биопсийного материала на гистологию, цитологию	300
2.11	Взятие волос (ресницы, ногти, кожа) на исследование	300
2.12	Взятие мочи (1 исследование)	200
2.13	Аллергопроба накожная с использованием прикков (1 аллерген)	250
2.14	Определение Н. руlori дыхательный тест	1200
2.15	Экспресс-анализ глюкозы крови	200
2.16	Взятие материала (зев,нос,уши,глаза,диз.группа,энтеробиоз,кал)	300
2.17	Взятие капиллярной крови с использованием 1 вакуумной пробирки	200
2.18	Вызов медицинской сестры на дом (без учета транспортных расходов)	1000
	III. ГИНЕКОЛОГ:
3.01	Консультация гинеколога	1400
3.02	Взятие гинекологического мазка (на флору, на цитограмму, на урогенитальные инфекции)	300
3.03	Введение (удаление) внутриматочной спирали (без стоимости ВМС)	1400
3.04	Медикаментозное прерывание беременности	12000
3.05	Кольпоскопия	1000
3.06	Диатермокоагуляция шейки матки	1700
3.07	Диатермоэксцизия шейки матки (без гистологии)	3500
3.08	Диатермоконизация шейки матки (без гистологии)	3500
3.09	Удаление кист малых и больших половых губ	3000
3.10	Диатермопунктура наботовых кист шейки матки (за 1 единицу)	700
3.11	Удаление полипа цервикального канала (без гистологии)	2000
3.12	Биопсия шейки матки	2500
3.13	Вскрытие и дренирование абцесса женских половых органов	2500
3.14	Обработка ложа абсцесса после вскрытия	300
3.15	Влагалищные лечебные ванночки	250
3.16	Удаление инородного тела из влагалища	300
3.17	Бужирование цервикального канала	1500
3.18	Выскабливание цервикального канала	1500
3.19	Введение (удаление) акушерского разгрузочного пессария (без пессария)	1000
3.20	Парацервикальная анестезия местная	300
3.21	Медикаментозная обработка шейки матки после оперативного вмешательства	250
3.22	Снятие/наложение швов	500
3.23	Удаление кондилом, папилом половых органов до 5 единиц	2700
3.24	Удаление кондилом, папилом половых органов от 5-10 единиц	3000
3.25	Удаление кондилом, папилом половых органов более 10 единиц	3500
3.26	Гистологическое исследование удаленного материала	1700
3.27	Использование контейнера для гистологического материала	70
3.28	Медикаментозная регуляция менструального цикла	5000
3.29	Видеокольпоскопия с распечаткой снимка	1300
3.30	Видеокольпоскопия без распечатки снимка	1100
	IV. УРОЛОГ:
4.01	Консультация уролога	1400
4.02	Взятие мазка сока простатического+диагностический массаж железы	300
4.03	Катетеризация мочевого пузыря	300
4.04	Инстиляция мочевого пузыря ( 1 процедура)	500
4.05	Массаж лечебный предстательной железы (1 процедура)	600
4.06	Взятие урологического мазка (на флору, на цитограмму, на урогенитальные инфекции)	300
4.07	Пластика уздечки полового члена (операция,анестезия,шовный материал)	5500
4.08	Разделение синехий крайней плоти	1500
4.09	Анестезия (крем эмла)	500
	V. ОТОРИНОЛАРИНГОЛОГ:
5.01	Консультация врача-оториноларинголога	1300
5.02	Промывание серной пробки (1 ухо)	300
5.03	Промывание серной пробки (2 уха)	500
5.04	Вскрытие паратонзилярных абсцессов	2000
5.05	Лечение синус-катетером «ЯМИК» (1 посещение)	3000
5.06	Анемизация слизистой оболочки носа	500
5.07	Анемизация устьев евстахиевых труб	500
5.08	Промывание барабанной полости	600
5.09	Лечение вазомоторных ринитов (блокада)	700
5.10	Промывание лакун миндалин (фурацилин)	700
5.11	Заушные блокады с лекарственными средствами	400
5.12	Сегментарная новокаиновая блокада	400
5.13	Вливание в гортань	400
5.14	Диагностическая пункция паратонзилярного инфильтрата; атером;фурункулов; абсцессов носовой перегородки	500
5.15	Вскрытие нагноившихся кист небных миндалин хирургическим скальпелем	800
5.16	Разведение краев после вскрытия паратонзилярного абсцесса	500
5.17	Сегментарная новокаиновая блокада в зоны Захарьина-Геда (при заболеваниях гортани)	600
5.18	Инъекция лекарственных средств в заднюю стенку глотки (при заболеваниях гортани)	400
5.19	Передняя тампонада носа при носовых кровотечениях	500
5.20	Туалет одного уха при воспалительных заболеваниях наружных слуховых проходов и барабанной полости	300
5.21	Аудиометрия	500
5.22	Взятие мазка из носа, зева, ушей (на флору, на цитограмму)	300
5.23	Удаление инородного тела из уха	250
5.24	Набор инструментов	200
5.25	Продувание по Политцеру евстахиевых труб	400
5.26	Прижигание области Киссельбахова сплетения раствором серебра (при носовых кровотечениях)	500
5.27	Осмотр перед процедурой	400
5.28	Промывание носа методом перемещения жидкости (кукушка)	600
	VI. ОФТАЛЬМОЛОГ:
6.01	Консультация офтальмолога	1300
6.02	Тонометрия глаза по Маклакову (2 глаза)	300
6.03	Периметрия (1 глаз)	250
6.04	Подбор очков простых	300
6.05	Подбор очков сфероцилиндрических	400
6.06	Зондирование носо-слезного протока	1000
6.07	Промывание носо-слезного протока	500
6.08	Проверка остроты зрения	300
6.09	Офтальмоскопия глазного дна (2 глаза)	500
6.10	Компьютерная периметрия (1 глаз)	300
6.11	Исследование цветоощущения по полихроматическим таблицам	200
6.12	Определение рефракции с помощью набора пробных линз	200
6.13	Скиаскопия (2 глаза)	120
6.14	Биомикроскопия конъюктивы с помощью щелевой лампы	150
6.15	Гониоскопия	350
6.16	Канальцевая и носовая проба (1 глаз)	100
6.17	Определение характера зрения	150
6.18	Тонография	1000
6.19	Исследование ресниц на демодекс (микроскопия)	250
6.20	Измерение угла косоглазия	50
6.21	Экзоофтальмометрия	100
6.22	Определение дефектов поверхности роговицы	200
6.23	Инъекция под кожу виска	180
6.24	Парабульбарная инъекция	300
6.25	Ретробульбарная инъекция	350
6.26	Субконьюктивальная инъекция	180
6.27	Мазок с коньюктивы на бак.исследование	250
6.28	Иссечение обызвествленной мейбомиевой железы	1500
6.29	Удаление инородного тела или новообразования век (удаление ксантелазм)	3000
6.30	Экспрессия и выскабливание фолликулов конъюктивы	1500
6.31	Удаление инородного тела (с коньюктивы, роговицы)	1000
6.32	Иссечение халязиона	3000
6.33	Снятие швов	300
6.34	Перевязка,лечение,массаж век.	300
6.35	Операция- активация нижней слезной точки	1500
6.36	Повторный прием офтольмолога (до 14 дней по 1 случаю)	1100
6.37	Рефрактометрия	300
	VII. УЛЬТРАЗВУКОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ:
7.01	Комплексное УЗИ органов брюшной полости (печень, желчный пузырь, поджелудочная железа, селезенка)	1500
7.02	УЗИ печени, желчного пузыря	800
7.03	УЗИ печени, желчного пузыря с доплерографией сосудов	1000
7.04	УЗИ поджелудочной железы	500
7.05	УЗИ желчного пузыря	500
7.06	УЗИ желчного пузыря с функциональными пробами	900
7.07	УЗИ селезенки	500
7.08	УЗИ почек и надпочечников	850
7.09	УЗИ почек	600
7.09.1	УЗИ надпочечников	400
7.10	УЗИ мочевого пузыря (осмотр трансвагинальным/трансректальным и абдоминальным датчиками)	1000
7.11	УЗИ мочевого пузыря с определением остаточной мочи (абдоминальный датчик)	600
7.12	УЗИ матки, придатков (осмотр трансвагинальным и абдоминальным датчиками)	1200
7.13	УЗИ матки, придатков (осмотр трансвагинальным датчиком)	1200
7.14	УЗИ матки, придатков (осмотр абдоминальным датчиком)	800
7.15	Фолликулометрия (первичная)	1000
7.15*	Фолликулометрия (повторная)	700
7.16	УЗИ мошонки	600
7.17	УЗИ предстательной железы (осмотр абдоминальным датчиком)	800
7.18	УЗИ предстательной железы (осмотр трансректальным датчиком)	800
7.19	УЗИ предстательной железы (осмотр трансректальным и абдоминальным датчиками)	1200
7.20	УЗДГ брахиоцефальных сосудов (сосуды шеи)	2000
7.21	УЗДГ интракраниальных сосудов головы	2000
7.22	УЗДГ сосудов различной локализации (плод; мошонка; почки; брюшная аорта и её ветви и пр.)	2000
7.23	УЗДГ артерий верхних конечностей	1900
7.24	УЗДГ артерий нижних конечностей	2200
7.25	УЗДГ вен верхних конечностей	1900
7.26	УЗДГ вен нижних конечностей	2200
7.27	УЗИ молочных желез с исследованием лимфатических узлов одной группы	1000
7.28	УЗИ щитовидной железы	750
7.29	УЗИ лимфоузлов (одна группа)	600
7.30	УЗИ плевральных полостей	600
7.31	УЗИ одного сустава и окружающих мягких тканей	600
7.32	УЗИ парных суставов и окружающих мягких тканей	1100
7.33	УЗИ поверхностных образований (новообразования, мягкие ткани, слюнные железы)	600
7.34	Эхокардиография с цветным допплеровским картированием	1600
7.36	УЗИ вилочковой железы	600
7.37	Нейросонограмма	700
7.38	УЗИ шейного отдела позвоночника (дети)	700
7.39	Ультразвуковое исследование тазобедренных суставов (дети до года)	700
7.40	Скрининг «Дети до года»- нейросонография, исследование вилочковой железы, сердца, печень, желчный пузырь, поджелудочная железа, селезенка, почки, тазобедеренные суставы	4300
7.41	УЗИ мочевого пузыря	500
7.42	Фолликулометрия «окно» имплантации	2000
7.43	Контроль полости матки после м/а	500
7.44	Дубликат фотоснимка по УЗИ	100
	VIII. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА:
8.01	Холтеровское мониторирование 24 часа	2200
8.02	Суточное мониторирование артериального давления	2200
8.03	Электрокардиография с нагрузкой	1000
8.04	Электрокардиография	700
8.05	Спирография (без бронхолитика)	1000
8.06	Спирография (с бронхолитиком сальбутамол)	1400
	IX. МАССАЖ:
9.01	Массаж волосистой части головы (20 мин)	500
9.02	Массаж шейно-воротниковой области с плечевыми суставами (25 мин)	800
9.03	Массаж спины, включая поясничный отдел 30 мин	1000
9.04	Массаж грудного отдела позвоночника и грудной клетки (30 мин)	700
9.05	Массаж живота (20 минут)	600
9.06	Массаж нижних конечностей (30 мин)	800
9.07	Массаж 1 нижней конечности (15 мин)	400
9.08	Массаж стоп ( 30 мин.)	600
9.09	Массаж верхних конечностей (30 мин)	700
9.10	Массаж 1 верхней конечности (15 мин)	400
9.11	Массаж плечевого сустава (10 мин)	400
9.12	Массаж пояснично-крестцового отдела позвоночника (20 мин)	700
9.13	Массаж пояснично-крестцовой области и тазобедренных суставов (30 мин)	900
9.14	Антицеллюлитный массаж ( 1,5 ч)	2200
9.15	Массаж одного сустава- коленный, голеностопный, локтевой, лучезапястный, тазобедренный (15 мин)	500
9.16	Массаж лица при невритах (15 мин)	600
9.17	Массаж комплексный (60 мин)	2000
9.18	Висцеральный массаж внутренних органов (30 мин)	1100
9.19	Общий лимфодренажный (омолаживающий) массаж (100 мин)	2200
9.20	Лимфодренажный массаж по зонам (бедра и ягодичная область или область живота)- 40 мин	1100
9.21	Массаж спины + Шейно воротниковая зона (40 мин)	1500
9.22	Массаж комплексный детский (30 мин) от 0 до 3 лет	750
9.23	Массаж комплексный детский (30 мин) от 3 до 7 лет	750
9.24	Массаж комплексный детский (40 мин) от 7 до 14 лет	850
9.25	Первичная консультация (30 мин)	350
9.26	Массаж стопы и голень (20 мин)	500
9.27	Массаж живота (15 мин) от 3 до 14 лет	400
9.28	Массаж спины (30 мин) от 7 до 14 лет	500
9.29	Массаж спины (20 мин) от 3 до 7 лет	400
	X. ДЕРМАТОВЕНЕРОЛОГ
10.00	Консультация врача-дерматовенеролога	1300
10.01	Взятие волос (ресниц, ногтей, соскоба кожи, слизистых) на исследование	400
10.02	Взятие урологического мазка (на флору, на цитограмму, на урогенитальные инфекции)	300
10.03	Фототерапия (лампа «Дермолайт 80») с подбором стартовой дозы (первичное посещение) за наличный расчет	800
10.04	Фототерапия (лампа «Дермолайт 80») сеанс 8-12 минут(повторное посещение) за наличный расчет	500
	XI. ОНКОЛОГ (МАММОЛОГ)
11.00	Консультация врача-онколога (маммолога)	1300
11.01	Взятие мазка-отпечатка на стекло для цитологического исследования	120
11.02	Взятие соскоба кожи (слизистых) для цитологического исследования	250
11.03	Пункционная биопсия молочных желез, лимфотических узлов	500
11.04	Цитологическое исследование	500
	XII. ХИРУРГ
12.01	Консультация врача -хирурга	1300
12.02	Послеоперационный осмотр врача-хирурга	700
12.03	Местная анестезия	300
12.04	Перевязка при нарушении целостности кожных покровов	350
12.05	Перевязка при гнойных заболеваниях кожи и подкожной клетчатки, ожогах, отморожениях, полежнях, трофических язвах и пр.	500
12.06	Первичная хирургическая обработка ран, наложение швов	800
12.07	Наложение косметического шва	1000
12.08	Снятие швов	500
12.09	Блокада параартикулярная, паравертебральная, внутрисуставная (без стоимости медикаментов)	1200
12.10	Пункционная биопсия ( лимфатических узлов, мягких тканей, кожи и пр)	700
12.11	Хирургическая операция по поводу вросшего ногтя	2000
12.12	Хирургическая операция по поводу удаления доброкачественных новообразований кожи и подкожной клетчатки ( фиброма, липома, атерома, гигрома и др.)	3000
12.13	Хирургическая операция по поводу локального гнойно-воспалительного процесса кожи и мягких тканей, пролежней, трофических язв и пр.	1500
12.14	Удаление инородных тел из мягких тканей	1500
12.15	Склеротерапия ретикулярных вен и телеангиоэктазий (без стоимости Этоксисклерола) 1 сеанс	2000
12.16	Удаление бородавок, пигментных невусов (за 1 единицу без гистологии)	400
12.17	Удаление папиллом (за 1 единицу без гистологии)	150
12.18	Удаление контагиозного моллюска	250
12.19	Гистологическое исследование удаленного материала	3000
12.20	Использование контейнера для гистологического материала	70
12.21	Ревизия раны(дренирование,удаление лигатур,тампонирование,повязка)	800
12.22	Блокада параартикулярная, паравертебральная, внутрисуставная (со стоимостью препарата)	1950
	XIII. ОФОРМЛЕНИЕ МЕДИЦИНСКОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ
13.01	Оформление выписки из медицинской карты	600
13.02	Выдача дубликата медицинской документации	400
13.03	Проведение заседания ВК для продления или выдачи листа нетрудоспособности, оформление заключений и справок	450

Польза массажа и гимнастики. Массаж грудничкам – MD clinic

Массаж грудничкам и гимнастика способствуют развитию ребенка, поэтому они могут быть рекомендованы с самого раннего возраста. Правильная техника выполнения этих процедур позволяет укрепить мышечную систему и закалить организм малыша. Новорожденные с первых дней хаотично двигают рукам и ногами, пытаясь приспособиться к новым условиям жизни вне утробы матери. Гимнастика помогает им ускорить этот процесс и нормализовать сон, который так важен для развития и роста крохи.

 

Массаж и гимнастика – польза для всего организма ребенка

 

Массаж влияет на все органы и системы организма грудничка. Под влиянием этих процедур нормализуется работа нервной системы, стимулируется развитие мышц, а также улучшаются сон и аппетит. Массаж полезен как для здоровых детей, так и для малышей с некоторыми патологическими состояниями. Во втором случае речь идет о лечебном массаже, который назначает врач, поскольку при разных заболеваниях процедура имеет свои особенности. Но даже перед курсом профилактического массажа грудничка нужно показать педиатру, чтобы доктор подтвердил, что ребенок здоров и у него нет противопоказаний.

 

Профессионально выполненный массаж и гимнастика также помогают:

• стимулировать кровообращение и отток лимфы;
• повысить защитные свойства кожных покровов;
• улучшить обмен веществ;
• укрепить иммунитет.

Динамическая зарядка помогает малышу лучше ориентироваться в пространстве и контролировать свои движения. Она нормализует тонус, а также подвижность суставов. Массаж и гимнастика позитивно влияют не только на физическое состояние, но и на психологический настрой малыша. Если процедура проходит в приятной обстановке, это помогает ребенку выстраивать с окружающим миром доверительные отношения.

 

Противопоказания

 

В некоторых ситуациях массаж и гимнастика, несмотря на их пользу, противопоказаны. К ним относятся:

• инфекционные заболевания;
• повышенная температура тела;
• запрет на массаж от невролога или ортопеда;
• сыпь на коже;
• ребенок не проходил полное медицинское обследование согласно возрастным рекомендациям.

Нежелательно делать массаж сразу после того, как ребенок поел или поспал. В этих ситуациях нужно подождать некоторое время, и лишь потом приступать к очередному сеансу процедур. При возникновении любого вида аллергии массаж также лучше отложить до полного выздоровления (даже если она проявляется только со стороны кожи и никак не влияет на общее состояние).

 

Можно ли родителям самостоятельно делать детский массаж или все же лучше довериться профессионалу?

 

Впервые делать массаж грудничкам должен только профессионал – медицинский работник, который дополнительно прошел специализированные курсы. Он может показать родителям, какие движения они смогут повторять самостоятельно в домашних условиях. Как правило, к ним относятся только поглаживания и профилактическая гимнастика. Делать любые массажные движения с прикладыванием усилий родителям нельзя. Чтобы не навредить малышу, нужно знать особенности анатомии и физиологии, поэтому массаж должен выполнять квалифицированный медработник.

 

 

К тому же любой сеанс массажа и гимнастики должен проводиться с улыбкой и в благоприятной эмоциональной атмосфере. Дети очень чуткие к эмоциям взрослых, поэтому умелый подход к маленьким пациентам – немаловажная составляющая. Если Вы ищете именно такого специалиста для детского массажа на Позняках, обратитесь в нашу клинику.

 

В медицинском центре «MD clinic» детский массаж проводит Шаповал Татьяна Евгеньевна. Она детский массажист с опытом работы 30 лет. Кроме того, Татьяна Евгеньевна – патронажная медсестра высшей категории и просто добрый, искренний человек, который по-настоящему любит деток и свою работу. Вы можете записаться на массаж в клинике или заказать проведение курса в домашних условиях с выездом специалиста.

Поглаживание, подобное массажу, укрепляет иммунную систему у мышей

Abstract

Недавние клинические данные свидетельствуют о том, что терапевтический эффект массажа затрагивает иммунную систему и что его можно использовать в качестве дополнительной терапии вместе со стандартными лекарственными средствами. В этом исследовании мы исследовали механизмы, лежащие в основе этих эффектов, исследуя иммуномодулирующую функцию поглаживания как суррогата терапии, подобной массажу, у мышей. Мышей C57 / BL6 гладили ежедневно в течение 8 дней либо мягкой щеткой, либо непосредственно рукой в ​​перчатке, а затем анализировали на различия в их иммунном репертуаре по сравнению с контрольными мышами без поглаживания.Наши результаты показывают, что у мышей, которым поглаживали руки, но не поглаживали кисть, наблюдалось значительное увеличение количества Т-клеток тимуса и селезенки (p <0,05; p <0,01). Эти эффекты не были связаны со значительными изменениями в предопределении линии CD4 / CD8 или профиле активации. Усиливающие эффекты на репертуар Т-клеток массажной терапии были связаны со снижением норадренергической иннервации лимфоидных органов и противодействовали иммуносупрессивному эффекту гидрокортизона in vivo . В совокупности наши результаты на мышах подтверждают гипотезу о том, что массажи могут иметь терапевтическое значение при лечении иммунодефицитов и связанных с ними расстройств, и предполагают снижение тормозящего норадренергического тонуса в лимфоидных органах как одно из возможных объяснений их иммуномодулирующей функции.

Массаж — это одна из многих форм реабилитационной медицины, которая долгое время использовалась в качестве дополнительного лечения различных психических и физических состояний. Действительно, сообщалось, что массаж облегчает мышечную боль и способствует восстановлению ¹ , облегчает симптомы тошноты и усталости у онкологических больных ² , способствует снижению стресса и повышению внимания ^{1 , 3} и способствует росту и развитие ⁴ . В последнее время массаж приобрел еще большую популярность в клинических отделениях, поскольку его можно применять для разного круга пациентов: от детей ⁵ до пожилых ⁶ , профессионалов в области спортивных состязаний ⁷ и «неактивных» людей. из всех слоев общества ⁸ .Несмотря на такой широкий спектр применения, очень мало известно о клеточных и молекулярных механизмах положительного воздействия массажа. В самом деле, отсутствие стандартизации, субъективность получателя и поставщика, вместе с множеством тканей и органов, «активируемых» массажем, сделали эту дополнительную терапию сложной практикой для изучения в экспериментальных условиях.

Лучший способ описать практику массажа — это механическое воздействие на ткани тела с помощью ритмично прикладываемых движений и давления ⁹ .Следуя этому определению, разумно думать, что один механизм, в котором массаж инициирует свои эффекты, заключается в стимуляции нервной системы через различных механорецепторов, обнаруженных в коже (например, тельца Мейснера и Пачини, окончания дисков Меркеля, Руффини и свободные нервные окончания. ) ¹⁰ . Затем давление, оказываемое на эти рецепторы, выражается в различных эффектах. Более конкретно, он может активировать пути, которые передают сигналы по длинным и миелинизированным нервным волокнам в лимфатическую область мозга ¹¹ , или может влиять на высвобождение растворимых мессенджеров, таких как вещество P или серотонин, которые считаются ответственными за опосредование « расслабления ». эффекты массажа ^{12 , 13} .Вместе эти данные свидетельствуют о том, что эмоциональное благополучие и нейронная модуляция являются ключевыми элементами терапевтической эффективности массажа.

Нас особенно интересуют способы, с помощью которых эмоциональное благополучие регулирует иммунный ответ ^{14 , 15} . Заинтригованные недавними клиническими исследованиями, в которых изучалось использование массажа как средства обеспечения комбинированного положительного воздействия на эмоциональное благополучие и иммунный ответ ^{13 , 16 , 17 , 18 , 19} , мы стремились создали экспериментальную систему, которая позволила бы нам исследовать иммуномодулирующие эффекты терапии, подобной массажу, на мышах.С этой целью мы протестировали эффекты поглаживания как суррогата массажа, а также сравнили человеческий (управляемый пальцами) и нечеловеческий (управляемый мазком кисти) подходы, чтобы оценить два разных типа поглаживания. Наши результаты предоставляют экспериментальные доказательства, подтверждающие гипотезу о том, что массажи обладают иммуномодулирующим действием, и предполагают другой возможный клеточный и молекулярный механизм терапевтических эффектов этой терапии.

Материалы и методы

Мыши и химические вещества

Для всех экспериментов мы использовали мышей-самцов C57BL / 6 в возрасте 5 недель, приобретенных у Charles River.Животных содержали группами максимум по 6 мышей в клетке в условиях отсутствия специфических патогенов и со свободным доступом к пище и воде. Мышей содержали в течение 7 дней перед тестированием, в результате чего им было 6 недель, когда началось лечение массажем. Все тесты проводились вслепую и в соответствии с Законом Великобритании о животных (научные процедуры) 1986 года. Все экспериментальные протоколы были одобрены местным отделением биологической службы Лондонского университета королевы Марии. Мыши, получавшие гидрокортизон, получали суспензию 2.5 мг гемисукцината гидрокортизона (Sigma-Aldrich) в 200 мкл PBS.

Поглаживание, напоминающее массаж

Тесты проводились двойным слепым методом во время светлой фазы цикла свет-темнота. Были предприняты все усилия, чтобы свести к минимуму дискомфорт у мышей в этих поведенческих экспериментах. Мышей приводили в комнату для тестирования по крайней мере за 30 минут до начала сеанса тестирования, чтобы они могли привыкнуть к среде тестирования. Если не указано иное, на протяжении каждого эксперимента поддерживались стандартное освещение (~ 50 люкс) и тихие условия.

Мыши были разделены на три группы: 1) контрольные (без инсульта) мыши; 2) гладкие мыши; 3) поглаженных вручную мышей, по 6 мышей в каждой группе за эксперимент. Лечение проводили, помещая одну мышь в новую клетку каждый день, как описано ранее ²⁰ . Эти клетки были идентичны домашней клетке, однако крышка, измельченная бумага, еда и вода были удалены. Для каждой мыши использовали новые клетки, чтобы уменьшить запах от предыдущей мыши. Мышей, которых поглаживали кистью и рукой, поглаживали при давлении 100-150 мм рт. Ст. ₂ O (или 7-11 мм рт. касались (рукой или кистью) в течение 60-минутной обработки.Поглаживание кистью производилось с помощью кисти da Vinci № 5, а поглаживание вручную — тремя пальцами предпочтительной руки исследователя, как описано ранее ²² . Для поглаживания руками экспериментатор носил одноразовые виниловые перчатки Bizzybee (Amazon, Великобритания). Эти перчатки без запаха уменьшали запах человека, но сохраняли контакт с человеком, то есть тепло и давление. Мышей гладили по волосистой коже, обнаруженной на задней спинной грудной и проксимальной части задних конечностей ²² , цефалокаудальным образом (голова к хвосту) ²⁰ .Мыши, которым наносили поглаживание кистью и рукой, получали приблизительно 20 движений каждые 5 минут (0,5-1,0 Гц). Эксперименты проводились 3 разными экспериментаторами, обученными выполнять одну и ту же процедуру. Воспроизводимость ручных стимулов была проверена и подтверждена аналогичным приложением давления к небольшому баллону, подключенному к манометру, как сообщалось ранее ²¹ .

Тест активности в открытом поле

Тест в открытом поле (OFT) — это парадигма, основанная на этологии, которая обеспечивает объективные измерения исследовательского поведения, а также является действительным начальным скринингом для определения тревожного поведения у грызунов.Тест проводился, как описано ранее ²³ . Аппарат состоял из арены из белого ПВХ (50 см × 30 см × 20 см), разделенной на квадраты 10 см × 10 см (n = 15). Три центральных квадрата определяли «центральную» область. Каждую мышь помещали в угловой квадрат лицом к стене, наблюдали и записывали в течение 3 минут. Регистрировали общее количество пересеченных квадратов (все четыре лапы внутрь), общее количество задних лап (определяемое как отрыв обеих передних лап от земли, но не как часть ухода) и количество пересечений центра.Стены и пол арены тщательно очищались между испытаниями.

Светло-темный челночный ящик

В этом тесте исследовательская деятельность отражает сочетание опасности и предотвращения риска ²⁴ . Аппарат состоял из коробки размером 45 см × 20 см × 21 см, разделенной на два отдельных отсека: одна треть (длина 15 см), окрашенная в черный цвет, с черной крышкой наверху, оставшиеся две трети окрашены в белый цвет и не закрыты. Отверстие размером 2,5 × 2,5 см соединяло два отделения. Одна сторона яркого ящика была прозрачной для оценки поведения, а непривлекательность этого отсека была увеличена за счет дополнительного освещения, обеспечиваемого лампой мощностью 50 Вт, расположенной на 45 см выше центра пола ящика.Тест проводился в соответствии с ранее опубликованным протоколом ²⁵ . Каждую мышь помещали в светлый отсек лицом от отверстия и позволяли исследовать коробку в течение 5 минут. Зависимые переменные включали время, проведенное в светлой зоне, задержку перехода в темную зону (все четыре лапы внутри) и общее количество переходов между отсеками. Аппарат очищали после каждого испытания.

Флуоресцентная гистохимия и количественное определение катехоламинсодержащих нервных волокон

Тимус и селезенка вырезали с помощью криостата для получения серийных срезов толщиной 16 мкм и обрабатывали в соответствии с модифицированной версией метода сахарозо-фосфатглиоксиловой кислоты (SPG) ²⁶ to идентифицировать нервные волокна, содержащие катеколамин.Вкратце, срезы сначала погружали в раствор, содержащий 1% глиоксиловой кислоты, 0,2 М сахарозы и 0,236 М одноосновного фосфата калия (pH 7,4), затем сливали и, наконец, покрывали нефлуоресцентным иммерсионным маслом, нагревали при 95 ° C в течение 2,5. мин. Чтобы предотвратить диффузию и фоторазложение флуоресценции, срезы были проанализированы и сфотографированы в тот же день с использованием флуоресцентного фотомикроскопа Olympus BH 2 (Olympus Optical Co. Ltd, Токио, Япония), оснащенного возбудительным фильтром BG 12 и барьерным фильтром Y495, Color View III. цифровая камера (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Мюнстер, Германия) и программное обеспечение AnalySIS FIVE (Olympus Soft Imaging Solutions).Цифровое количественное определение интенсивности флуоресценции было выполнено с использованием программного обеспечения ImageJ, как описано ранее ²⁷ . Микрофотографии 10 случайно выбранных соответствующих тестовых областей (увеличение × 40) были сделаны в каждом из 5 срезов на тимус. После преобразования изображений в режим серой шкалы были отслежены контуры каждого профиля флуоресцентного нерва и записаны интенсивности флуоресцентного сигнала (интенсивность пикселей на единицу площади). Затем для корректировки фоновой флуоресценции контуры наносили на ближайшие соседние области, не содержащие флуоресцентный материал, и полученные значения вычитали из значений, соответствующих профилям нервов.Данные были представлены в виде интенсивности флуоресценции групп, подвергшихся экспериментальной обработке, нормализованной к интенсивности флуоресценции соответствующих контрольных групп.

Концентрация норадреналина

Концентрация норадреналина в селезенке и тимусе определяли с помощью ELISA. Анализ выполняли с использованием коммерческого набора для ELISA (Labor Diagnostika Nord GmbH & Co., Нордхорн, Германия) в соответствии с протоколом производителя.

Количественная оценка плотности нервных волокон

Плотность флуоресцентных нервных волокон на 10 случайно взятых изображениях (увеличение × 40) из 5 срезов тимуса на животное измеряли с использованием подхода подсчета точек стереологической сетки ²⁸ и выражали как процент площади поля заняты флуоресцентными профилями нервов.

Проточный цитометрический анализ

Лимфоциты, собранные из лимфатических органов (например, тимуса, селезенки), окрашивали в 100 мкл буфера FACS (PBS, содержащий 5% FCS и 0,02% NaN ₂ ). Используемые антитела: анти-CD3 PE (клон 145-2C11, eBioscience), анти-CD4 FITC (клон GK 1.5, eBioscience), анти-CD8 Cy5 (клон 53-6.7, eBioscience), анти-CD25 FITC (клон PC61, BioLegend), анти-CD69 PE (клон h2.2F3, eBioscience). Клетки метили соответствующей концентрацией конъюгированных антител в течение 1 ч при 4 ° C, как описано ранее ²⁹ .После маркировки клетки промывали и анализировали. Во всех экспериментах окрашенные клетки получали с помощью проточного цитометра FACScalibur и анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo ^TM (Tree Star, Inc., Oregon Corporation).

Активация Т-клеток и продуцирование цитокинов

Т-клетки селезенки (1 × 10 ⁵ клеток / 200 мкл) инкубировали только с средой или стимулировали указанной концентрацией связанных с планшетом анти-CD3 и анти-CD28 в 96 пробах. планшеты с лунками. Для повышения регуляции CD25 и CD69 Т-клетки лимфатических узлов стимулировали в течение примерно 16 часов, в то время как супернатанты 24-часовой культуры использовали для продукции цитокинов.Производство цитокинов измеряли с помощью цитометрического гранулированного анализа с использованием наборов мышиного Th2 / Th3 10plex (eBioscience). Каждый образец (25 мкл супернатанта клеточной культуры) инкубировали с 50 мкл смеси шариков и 50 мкл смеси антител, конъюгированных с биотином, в течение 2 часов. После двух промывок добавляли стрептавидин, конъюгированный с PE, и оставляли образцы качаться в течение 1 часа в темноте. Наконец, образцы промывали и хранили в течение ночи при 4 ° C. Стандарты, разбавленные серийно в 7 раз, были приготовлены и обработаны одновременно.Образцы анализировали с помощью BD LSR Fortessa и программного обеспечения FlowCytomix (eBioscience).

Статистический анализ

Результаты были проанализированы, как описано ранее ^{30 , 31} с использованием GraphPad. Для сравнения между группами использовали односторонний дисперсионный анализ с последующим пост-тестом Бонферрони или апостериорным сравнением Ньюмана-Кеулса. Статистическая значимость была определена при p <0,05. Результаты выражали как среднее значение ± S.E.M.

Результаты

Терапия, подобная массажу, не вызывает изменений в поведении, похожем на тревожное.

На схеме резюмируется экспериментальный протокол, который мы использовали для этого исследования.Мы решили проводить терапию, подобную массажу, в течение 8 дней в свете предыдущих исследований, в которых мы оценивали влияние «поведенческих модуляторов», таких как обогащенная среда, на иммунную систему (неопубликованные данные). В этой и других подобных экспериментальных условиях мы обнаружили, что изменения начинают происходить и становятся значительными именно в этот момент времени.

Парадигма поглаживания, напоминающая массаж, и связанные с ней процедуры.

Схема на рисунке резюмирует общую экспериментальную процедуру, использованную в этом исследовании.Мышей-самцов C57BL / 6 разделили на 3 группы по 6 мышей и подвергли терапии, аналогичной массажу (поглаживание руками или поглаживанием кисти), или оставили нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, как подробно описано в разделе «Материалы и методы». В конце лечения мышей подвергали поведенческим тестам и анализировали их иммунный репертуар.

В течение 8 дней лечебного массажа мы отслеживали показатели благосостояния (http://www.nc3rs.org.uk/behaviour-laboratory-mice-indicator-welfare-state-genetically-modified-mice), такие как изменение веса, состояние шерсти, пилоэрекция, замораживание, количество фекалий, потребление пищи и воды и социальное агрессивное поведение.Ни одно из этих измерений не привело к какой-либо значительной разнице (данные не показаны) между 3 группами. Мы оценили дальнейшие изменения в поведении и самочувствии, в частности, тревожное поведение, используя два стандартных метода: открытое поле и коробку-челнок между светом и темнотой. В тесте «открытое поле» между тремя группами не наблюдалось различий в количестве квадратов, центральных переходов или задних частей (). Точно так же мыши, поглаживающие кистью и поглаживаемую рукой, не показали значительной разницы по сравнению с контрольной группой в количестве переходов свет / темнота или времени, проведенном в освещенной области, при тестировании с помощью челночного механизма свет / темнота ().Вместе эти результаты показали, что поглаживание, подобное массажу, не вызывало каких-либо значительных изменений в самочувствии, исследовательской активности или тревожном поведении.

Поглаживание, напоминающее массаж, не влияет на тревожное поведение.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками или кистью) или оставляли их нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем тестировали на предмет их уровня тревожного поведения. ( A ) Гистограммы показывают общее количество пересеченных квадратов, пересечений центра и задних частей, зарегистрированных в течение 5-минутной сессии теста в открытом поле.На изображениях (сверху) показаны типичные изображения квадрата, перекрестка в центре и тыла, соответственно. ( B ) Гистограммы показывают время, проведенное на свету, количество пересечений и время ожидания до первого пересечения, записанное во время 5-минутного испытания в тесте «свет-темнота». На изображениях (сверху) показаны репрезентативные изображения мыши в светлой области, полностью скрещенной (когда четыре полные лапы находятся на темной стороне коробки) и в первом кресте, соответственно. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представитель четырех экспериментов, в каждом из которых участвовало по 6 мышей на группу.

Терапия, подобная массажу, увеличивает клеточность тимуса и усиливает репертуар Т-клеток.

Чтобы оценить возможное влияние терапии, подобной массажу, на иммунный ответ, мы сначала проверили ее влияние на развитие Т-клеток в тимусе. Результаты показали увеличение количества тимоцитов у массированных мышей по сравнению с контрольными мышами без поглаживания (). Интересно, что достоверные различия были получены только с мышами, которых поглаживали вручную (p <0.01), но не мазками кистью. Это увеличение клеточности не было специфичным для Т-клеточного клона, поскольку анализ FACS тимоцитов на их профиль CD4 / CD8 показал лишь небольшую разницу между процентным содержанием клеток CD4 ⁺ / CD8 ⁺ между контрольными мышами и мышами, поглаживающими кисть или поглаживаемую рукой. (). При рассмотрении общего количества каждой субпопуляции тимоцитов только у мышей, подвергнутых поглаживанию вручную, наблюдалось значительное увеличение CD4 ⁺ CD8 ⁺ двойных положительных (DP) (p <0,001), CD4 ⁺ одиночных положительных (SP) (p <0.01), CD8 ⁺ SP клеток (p <0,001) по сравнению с контролем (), что свидетельствует о возможном влиянии массажной терапии на отрицательный отбор. Поскольку мыши, которым наносили мазок кистью, не показали значительных различий по сравнению с контрольной группой по любым из упомянутых выше показателей, мы продолжили наши тесты, сосредоточив внимание на эффектах мышей, которым массировали руки.

Поглаживание, подобное массажу, ускоряет развитие Т-клеток. Самцов мышей

C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживания руками или кистями) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их репертуар Т-клеток в тимусе.( A ) Гистограмма показывает общее количество тимоцитов, извлеченных в конце лечения, в то время как ( B ) показывает репрезентативные точечные графики различных субпопуляций тимоцитов: двойные отрицательные CD4 ^— CD8 ^— (DN; нижний левый квадрант), двойной положительный CD4 ⁺ CD8 ⁺ (DP; верхний правый квадрант), одиночный положительный CD4 ⁺ (CD4SP; нижний правый квадрант), одиночный положительный CD8 ⁺ (CD8SP; верхний левый квадрант) . ( C ) Показывает абсолютное количество каждой субпопуляции, упомянутой выше.Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представляют четыре эксперимента, каждый с участием 6 мышей на группу. ** р <0,01; *** р <0,001.

Выполняя такой же фенотипический анализ тимуса на популяциях клеток селезенки, мы наблюдали аналогичное усиливающее действие массажа на клеточность Т-клеток. Общее количество пост-фиколл-клеток (в основном мононуклеарных клеток) не показало каких-либо значительных различий между поглаживанием вручную и контролем (верхняя панель). Однако стробирование клеток CD3 ⁺ () и преобразование процентов в абсолютные числа (нижняя панель) выявили почти 100% -ное увеличение (p <0.001) Т-клеток в поглаживании руки по сравнению с контролем, соответственно. Что касается вилочковой железы, увеличение популяции Т-клеток не было искажено ни в сторону линий клеток CD4 ⁺ , ни в сторону линий CD8 ⁺ ().

Поглаживание, подобное массажу, увеличивает репертуар зрелых Т-клеток.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их репертуар Т-клеток в селезенке. ( A ) Верхняя гистограмма показывает общее количество спленоцитов, восстановленных в конце лечения, а нижняя показывает количество CD3 ⁺ Т-клеток, полученных после стробирования в спленоцитах для этой популяции.Две панели в ( B ) представляют собой репрезентативные гистограммы селективной популяции CD3 ⁺ , тогда как панели в ( C ) показывают их соответствующий профиль CD4 / CD8. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представляют четыре эксперимента, каждый с участием 6 мышей на группу. *** р <0,001.

Подобная массажу терапия снижает норадренергический тонус вилочковой железы и селезенки

Катехоламины, высвобождаемые в лимфоидных органах под контролем центральной нервной системы, являются известными регуляторами иммунного репертуара ^{32 , 33} .Чтобы проверить возможность того, что катеколамины опосредуют усиливающий эффект терапии, подобной массажу, в наших тестах мы измерили концентрацию норадреналина, а также интенсивность и плотность норадренергических нервных волокон в тимусе и селезенке.

Иммунофлуоресцентный анализ срезов тимуса для катехоламинсодержащих нервных волокон показал значительное снижение интенсивности флуоресценции как в области кортикального, так и в кортико-медуллярном соединении у мышей, которых поглаживали вручную, по сравнению с контролем (правая и левая панели соответственно).Это согласуется с тем фактом, что большие норадренергические нервные сплетения преобладают в субкапсулярной коре и кортикомедуллярном соединении, где находятся более зрелые тимоциты ^{34 , 35} . Отдельные варикозные нервные волокна, ответвляющиеся от этих сплетений, оканчиваются в кортикальной, реже медуллярной паренхиме ^{34 , 35} . Количественный анализ интенсивности флуоресценции и плотности нервов подтвердил эти наблюдения и показал снижение примерно на 40% (p <0.01) и 60% (p <0,001), соответственно, в тканях, подвергнутых поглаживанию вручную, по сравнению с контролем (верхняя и средняя панели соответственно). Наконец, анализ содержания норадреналина в гомогенатах тканей отразил результаты иммунофлуоресценции и показал общее снижение примерно на 50% (p <0,01) уровней норадреналина у массированных мышей по сравнению с контролем (нижняя панель).

Поглаживание, напоминающее массаж, снижает норадренергический тонус тимуса.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их норадренергическую иннервацию и тонус в тимусе.Микрофотографии иммунофлуоресценции в ( A ) показывают репрезентативные изображения норадренергических нервов, присутствующих в различных участках тимуса: C = кора; Т = трабекулы; M = продолговатый мозг; CMJ = кортикомедуллярное соединение. Гистограммы на ( B ) показывают (сверху) интенсивность флуоресценции нервных волокон, плотность нервных волокон (%) и концентрацию норадреналина (пг / мг) в гомогенатах тканей. Значения каждого столбца столбца выражены как среднее ± S.E.M. из n = 6 мышей. ** р <0.01; *** р <0,001.

Мы провели такой же анализ селезенки и получили аналогичные результаты, например снижение интенсивности флуоресценции норадренергических волокон (p <0,01) и плотности (p <0,01) (микрофотографии на верхней и средней панелях в 6B) и значительное снижение уровней норадреналина в гомогенатах селезенки мышей, поглаженных вручную, по сравнению с контролем (p <0,05) (, нижняя панель).

Поглаживание, напоминающее массаж, снижает норадренергический тонус селезенки.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их норадренергическую иннервацию и тонус в селезенке.Микрофотографии иммунофлуоресценции в ( A ) показывают репрезентативные изображения норадренергических нервов, присутствующих в различных участках селезенки. Гистограммы на ( B ) показывают (сверху) интенсивность флуоресценции нервных волокон, плотность нервных волокон (%) и концентрацию норадреналина (пг / мг) в гомогенатах тканей. Значения каждого столбца столбца выражены как среднее ± S.E.M. из n = 6 мышей. * р <0,05; ** р <0,01.

Терапия, подобная массажу, не изменяет профиль активации зрелых Т-клеток

Чтобы оценить, сопровождались ли повышающие эффекты массажной терапии на количество Т-клеток также изменениями их функции, мы провели несколько основных тестов на Т-клетках. активация с использованием связанных с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 (анти-CD3 / CD28) в качестве стимула.Стимуляция Т-клеток от поглаженных вручную мышей субоптимальным (0,1 мкг / мл) или оптимальным (0,5 мкг / мл) анти-CD3 / CD28 вызывала зависимое от концентрации увеличение экспрессии CD25 и CD69 (маркеры активации Т-клеток), которое было сравнимо с наблюдаемым в контрольных клетках (). Кроме того, анализ уровней цитокинов в супернатантах стимулированных Т-клеток не показал существенной разницы в уровнях классического Th2 (IFN-γ, IL-2 и GM-CSF), Th3 (IL-10 и IL-13) или Цитокины Th27 (IL-17) между двумя группами ().

Поглаживание, подобное массажу, не влияет на профиль активации зрелых Т-клеток.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их профиль активации Т-клеток in vitro . ( A ) Т-клетки стимулировали указанными концентрациями связанных с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 в течение 16-18 часов, а затем окрашивали и анализировали их экспрессию CD25 и CD69 с помощью FACS.( B ) Графики показывают уровни указанных цитокинов, присутствующих в супернатантах Т-клеток, стимулированных 0,5 мкг / мл связанного с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 в течение 22-24 часов. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и репрезентативны 2 эксперимента, в каждом из которых участвует 6 мышей на группу.

Подобная массажу терапия обращает вспять иммуносупрессивные эффекты гидрокортизона на тимоциты

Клинические данные свидетельствуют о том, что массаж полезен для лечения иммунодефицита после химиотерапии ³⁶ или у пациентов, страдающих иммунодефицитными расстройствами ³ .Чтобы резюмировать эти результаты, мы лечили мышей гидрокортизоном. Известно, что этот стероид вызывает временную иммуносупрессию за счет индукции апоптоза тимоцитов DP (максимум на 3/4 день после инъекции) с последующим восстановлением до нормального размера и субпопуляции через неделю после лечения ^{37 , 38} . На 4-й день после лечения около 30% тимоцитов DP выжили в контрольной группе, получавшей гидрокортизон (). Напротив, у мышей, получавших гидрокортизон и массаж, подобный терапии, наблюдалось снижение только до 60% (p <0.05 против контрольных мышей, получавших гидрокортизон). Подобные различия, хотя и незначительные, наблюдались на 8-й день, когда вилочковая железа полностью восстановилась (данные не показаны).

Поглаживание, подобное массажу, восстанавливает иммуносупрессивный эффект гидрокортизона на CD4 + CD8 + двойные положительные Т-клетки.

Самцов мышей C57BL / 6 получали внутрибрюшинную инъекцию гидрокортизона (2,5 мг / мышь) или носителя, а затем подвергали массажной терапии (поглаживание вручную) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, как показано на рисунке.На 4-й день после провокации гидрокортизоном анализировали репертуар Т-клеток в тимусе. Панели в ( A ) показывают репрезентативные точечные графики различных субпопуляций тимоцитов, а ( B ) показывают общее (левая панель) или CD4 ⁺ CD8 ⁺ двойных положительных (правая панель) количества тимоцитов. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и репрезентативны 2 эксперимента, в каждом из которых участвует 6 мышей на группу. * р <0,05; ** р <0,01; *** p <0,001 по сравнению с контрольным средством .§ p <0,05 против гидрокортизона.

Обсуждение

Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы изучить влияние поглаживания, напоминающего массаж, на иммунную систему на экспериментальной модели. Как человеческое (управляемое пальцами), так и нечеловеческое (управляемое мазком кисти) поглаживание показало тенденцию к увеличению количества Т-клеток в лимфоидных органах. Однако только поглаживание вручную показало статистически значимую разницу по сравнению с контролем, что подтверждает гипотезу о том, что приложение контролируемого давления может быть не единственным параметром, который способствует терапевтическому эффекту массажа ¹⁷ .Другие факторы, такие как тепло или консистенция области контакта (в нашем случае пальцы), могут играть роль.

Стремясь лучше понять возможный механизм наблюдаемых различий в Т-клеточности, мы сначала попытались исследовать, было ли это стимулирующее действие массажа на Т-клетки каким-либо образом связано с гедонистическим значением поглаживания и массажа для настроения, как это часто описывается для человек ¹⁷ . Наши результаты показали, что это не было связано со значительной разницей в уровнях тревожного поведения.Есть много возможных объяснений этого несоответствия, например, продолжительность самого лечения недостаточна для «трансформации» в существенные изменения тревожного поведения (8 дней вместо недель) или, что наиболее вероятно, отсутствие модулирующего воздействия. влияние нашей массажной парадигмы на тревожность. В связи с этим интересно отметить, что исследования, посвященные обращению с мышами с помощью туннелей, сообщили об аналогичных результатах, например, это обращение не всегда имеет анксиолитический эффект, поскольку это, по-видимому, зависит от линии мышей, используемого экспериментального теста и, что не менее важно, социального взаимодействия с другими мышами ^{39 , 40} .

Эти удивительные результаты противоречат нашей первоначальной гипотезе о том, что положительный эмоциональный ответ, вызванный массажем, в конечном итоге будет связан с его иммуномодулирующим действием, и побудили нас изучить другие возможные механизмы. Предыдущие исследования, проведенные на людях, показали, что массаж может либо усилить вагусную активность за счет стимуляции рецепторов давления, которые в конечном итоге сигнализируют лимбической системе ^{41 , 42} , либо уменьшить высвобождение норадреналина в кровоток, вызывая общее подавление регуляции симпатическая активность ^{43 , 44} .Интересно, что исследования нашей собственной лаборатории и других исследовательских групп показали, что симпатические нервы, которые иннервируют лимфоидные ткани, являются одним из основных путей взаимодействия нейронов и иммунной системы для поддержания гомеостаза тела ^{35 , 45 , 46 , 47 , 48} . Что наиболее важно, данные свидетельствуют о том, что этот гомеостатический перекрестный разговор ответственен за «обработку информации», такой как поведенческие условия или изменения внешних факторов окружающей среды, и ее перевод в специфические иммунные ответы ^{32 , 49} .

Наш анализ норадренергического тонуса, присутствующего в тимусе и селезенке мышей, подвергшихся поглаживанию, подтвердил эти результаты и показал резкое снижение плотности нервов и содержания норадреналина по сравнению с контрольными мышами. Норадренергические нервы тимуса берут начало в основном из верхних шейных и звездчатых ганглиев и входят в тимус с крупными кровеносными сосудами, заканчиваясь капсулой и междольковыми перегородками. От этих сосудистых нервных сплетений более мелкие сосудистые сплетения расходятся в кору.Вместо этого селезенка получает богатый запас симпатических нервов в основном из верхних брыжеечных и чревных ганглиозных сплетений, а ее норадренергическая иннервация широко распространяется на различные части селезенки, включая капсулу, трабекулы, красную пульпу и белую пульпу ^{47 , 50 , 51} . Функциональное значение этой сложной сети состоит в том, чтобы обеспечивать как усиление, так и подавление иммунных функций. В наших исследованиях снижение норадренергического тонуса как тимуса, так и селезенки вызвало значительное увеличение клеточности Т-клеток, как это наблюдалось в других условиях, посредством фармакологического или хирургического снижения норадренергического тонуса ³⁵ .Это повышение количества Т-клеток не сопровождалось изменениями в ответе TCR in vitro , как показали наши тесты по активации зрелых Т-клеток, подтверждающие идею о том, что иммуномодулирующие эффекты, которые мы наблюдали in vivo , могут быть связаны с лимфоидным органом. микроокружение, а не прямой эффект на уровне экспрессии гена Т-лимфоцитов, например их способности расширяться и распространяться.

Как массажные поглаживания снижают норадренергический тонус? Хотя мы не полностью рассмотрели этот вопрос, в литературе появляется все больше доказательств, подтверждающих концепцию интерактивной сети между кожными нервами, нейроэндокринной осью и иммунной системой.Основываясь на этих теориях, кожу действительно можно считать нейроиммуноэндокринным органом, который контролирует широкий спектр функций через периферическую сенсорную нервную систему, автономную нервную систему, а также центральную нервную систему (более подробный обзор этой темы см. ⁵² ). Эта идея была дополнительно подтверждена недавним новым исследованием Vrontou et al. ²² , который идентифицировал немиелинизированные сенсорные нейроны С-типа, которые обнаруживают массажные поглаживания на волосатой коже у мышей.Эти нейроны, названные MRGPRB4 +, иннервируют исключительно волосатую кожу и, как было показано, тесно связаны с C-LTMRs, обнаруженными у людей ²² . Наиболее поразительно то, что эти волокна оканчиваются в субстанции дорсального рога спинного мозга нейронами ⁵³ , которые проектируют островную кору ⁵⁴ , область мозга, отвечающую за благополучие и эмоции ⁵⁵ , но также показанную для игры. решающая роль в центральной автономной сети ⁹⁰ . Ответы симпатических нервов на стимуляцию островковой коры опосредуются синапсами в латеральной области гипоталамуса и вентролатеральном мозговом веществе ⁹¹ , структурами мозга, связанными с иммуномодуляцией ⁹² .

Несмотря на важность полного исследования клеточных и молекулярных механизмов, лежащих в основе иммуномодулирующей функции массажа, одним из основных результатов этого исследования является подтверждение на экспериментальных животных наблюдений, проведенных на людях, в отношении эффективности массажа в лечении иммунодефицитов ^{3 , 56 , 57 , 58} . Концепция, согласно которой массаж обладает «восстанавливающими» свойствами, хорошо известна в области спортивной медицины, где было показано, что массаж имеет важную иммунорегуляторную функцию после физических нагрузок ^{59 , 60} .В частности, было показано, что массаж способствует восстановлению от временного иммуносупрессивного состояния, вызванного физическими упражнениями, посредством высвобождения большего количества клеток в кровоток и контроля инфильтрации воспалительных клеток в мышцы ^{61 , 62} . Аналогичным образом, есть некоторые свидетельства того, что массаж может поддерживать восстановление иммунной функции в периоды иммуносупрессии, противодействуя потере Т-клеток у пациентов, страдающих от рака и ВИЧ-инфекции ^{3 , 16 , 19 , 58} .Хотя наши результаты внешне сопоставимы с этими исследованиями, наши результаты подтверждают эти выводы и позволяют предположить, что массаж способствует поддержанию иммунокомпетентности.

Требуются дополнительные исследования как на экспериментальном, так и на клиническом уровне, чтобы полностью оценить потенциальное терапевтическое применение массажной терапии, используемой в качестве вспомогательного средства к стандартной терапии. Тем не менее, мы думаем, что наши исследования поддерживают новаторские научные взгляды, подчеркивающие важность учета множества систем (системная биология), которые гомеостатически регулируют то, что обычно известно как «благополучие» ⁶³ .Действительно, наши результаты подтверждают концепцию о том, что механизмы, регулирующие гомеостаз ^{64 , 65} , имеют фундаментальное значение для лучшего понимания причин иммунного и воспалительного «недомогания» — от старофранцузского «aise» до латинского. «Adjacens» (живущий рядом).

Поглаживание, подобное массажу, укрепляет иммунную систему у мышей

Abstract

Недавние клинические данные свидетельствуют о том, что терапевтический эффект массажа затрагивает иммунную систему и что его можно использовать в качестве дополнительной терапии вместе со стандартными лекарственными средствами.В этом исследовании мы исследовали механизмы, лежащие в основе этих эффектов, исследуя иммуномодулирующую функцию поглаживания как суррогата терапии, подобной массажу, у мышей. Мышей C57 / BL6 гладили ежедневно в течение 8 дней либо мягкой щеткой, либо непосредственно рукой в ​​перчатке, а затем анализировали на различия в их иммунном репертуаре по сравнению с контрольными мышами без поглаживания. Наши результаты показывают, что у мышей, которым поглаживали руки, но не поглаживали кисть, наблюдалось значительное увеличение количества Т-клеток тимуса и селезенки (p <0.05; р <0,01). Эти эффекты не были связаны со значительными изменениями в предопределении линии CD4 / CD8 или профиле активации. Усиливающие эффекты на репертуар Т-клеток массажной терапии были связаны со снижением норадренергической иннервации лимфоидных органов и противодействовали иммуносупрессивному эффекту гидрокортизона in vivo . В совокупности наши результаты на мышах подтверждают гипотезу о том, что массажи могут иметь терапевтическое значение при лечении иммунодефицитов и связанных с ними расстройств, и предполагают снижение тормозящего норадренергического тонуса в лимфоидных органах как одно из возможных объяснений их иммуномодулирующей функции.

Массаж — это одна из многих форм реабилитационной медицины, которая долгое время использовалась в качестве дополнительного лечения различных психических и физических состояний. Действительно, сообщалось, что массаж облегчает мышечную боль и способствует восстановлению ¹ , облегчает симптомы тошноты и усталости у онкологических больных ² , способствует снижению стресса и повышению внимания ^{1 , 3} и способствует росту и развитие ⁴ . В последнее время массаж приобрел еще большую популярность в клинических отделениях, поскольку его можно применять для разного круга пациентов: от детей ⁵ до пожилых ⁶ , профессионалов в области спортивных состязаний ⁷ и «неактивных» людей. из всех слоев общества ⁸ .Несмотря на такой широкий спектр применения, очень мало известно о клеточных и молекулярных механизмах положительного воздействия массажа. В самом деле, отсутствие стандартизации, субъективность получателя и поставщика, вместе с множеством тканей и органов, «активируемых» массажем, сделали эту дополнительную терапию сложной практикой для изучения в экспериментальных условиях.

Лучший способ описать практику массажа — это механическое воздействие на ткани тела с помощью ритмично прикладываемых движений и давления ⁹ .Следуя этому определению, разумно думать, что один механизм, в котором массаж инициирует свои эффекты, заключается в стимуляции нервной системы через различных механорецепторов, обнаруженных в коже (например, тельца Мейснера и Пачини, окончания дисков Меркеля, Руффини и свободные нервные окончания. ) ¹⁰ . Затем давление, оказываемое на эти рецепторы, выражается в различных эффектах. Более конкретно, он может активировать пути, которые передают сигналы по длинным и миелинизированным нервным волокнам в лимфатическую область мозга ¹¹ , или может влиять на высвобождение растворимых мессенджеров, таких как вещество P или серотонин, которые считаются ответственными за опосредование « расслабления ». эффекты массажа ^{12 , 13} .Вместе эти данные свидетельствуют о том, что эмоциональное благополучие и нейронная модуляция являются ключевыми элементами терапевтической эффективности массажа.

Нас особенно интересуют способы, с помощью которых эмоциональное благополучие регулирует иммунный ответ ^{14 , 15} . Заинтригованные недавними клиническими исследованиями, в которых изучалось использование массажа как средства обеспечения комбинированного положительного воздействия на эмоциональное благополучие и иммунный ответ ^{13 , 16 , 17 , 18 , 19} , мы стремились создали экспериментальную систему, которая позволила бы нам исследовать иммуномодулирующие эффекты терапии, подобной массажу, на мышах.С этой целью мы протестировали эффекты поглаживания как суррогата массажа, а также сравнили человеческий (управляемый пальцами) и нечеловеческий (управляемый мазком кисти) подходы, чтобы оценить два разных типа поглаживания. Наши результаты предоставляют экспериментальные доказательства, подтверждающие гипотезу о том, что массажи обладают иммуномодулирующим действием, и предполагают другой возможный клеточный и молекулярный механизм терапевтических эффектов этой терапии.

Материалы и методы

Мыши и химические вещества

Для всех экспериментов мы использовали мышей-самцов C57BL / 6 в возрасте 5 недель, приобретенных у Charles River.Животных содержали группами максимум по 6 мышей в клетке в условиях отсутствия специфических патогенов и со свободным доступом к пище и воде. Мышей содержали в течение 7 дней перед тестированием, в результате чего им было 6 недель, когда началось лечение массажем. Все тесты проводились вслепую и в соответствии с Законом Великобритании о животных (научные процедуры) 1986 года. Все экспериментальные протоколы были одобрены местным отделением биологической службы Лондонского университета королевы Марии. Мыши, получавшие гидрокортизон, получали суспензию 2.5 мг гемисукцината гидрокортизона (Sigma-Aldrich) в 200 мкл PBS.

Поглаживание, напоминающее массаж

Тесты проводились двойным слепым методом во время светлой фазы цикла свет-темнота. Были предприняты все усилия, чтобы свести к минимуму дискомфорт у мышей в этих поведенческих экспериментах. Мышей приводили в комнату для тестирования по крайней мере за 30 минут до начала сеанса тестирования, чтобы они могли привыкнуть к среде тестирования. Если не указано иное, на протяжении каждого эксперимента поддерживались стандартное освещение (~ 50 люкс) и тихие условия.

Мыши были разделены на три группы: 1) контрольные (без инсульта) мыши; 2) гладкие мыши; 3) поглаженных вручную мышей, по 6 мышей в каждой группе за эксперимент. Лечение проводили, помещая одну мышь в новую клетку каждый день, как описано ранее ²⁰ . Эти клетки были идентичны домашней клетке, однако крышка, измельченная бумага, еда и вода были удалены. Для каждой мыши использовали новые клетки, чтобы уменьшить запах от предыдущей мыши. Мышей, которых поглаживали кистью и рукой, поглаживали при давлении 100-150 мм рт. Ст. ₂ O (или 7-11 мм рт. касались (рукой или кистью) в течение 60-минутной обработки.Поглаживание кистью производилось с помощью кисти da Vinci № 5, а поглаживание вручную — тремя пальцами предпочтительной руки исследователя, как описано ранее ²² . Для поглаживания руками экспериментатор носил одноразовые виниловые перчатки Bizzybee (Amazon, Великобритания). Эти перчатки без запаха уменьшали запах человека, но сохраняли контакт с человеком, то есть тепло и давление. Мышей гладили по волосистой коже, обнаруженной на задней спинной грудной и проксимальной части задних конечностей ²² , цефалокаудальным образом (голова к хвосту) ²⁰ .Мыши, которым наносили поглаживание кистью и рукой, получали приблизительно 20 движений каждые 5 минут (0,5-1,0 Гц). Эксперименты проводились 3 разными экспериментаторами, обученными выполнять одну и ту же процедуру. Воспроизводимость ручных стимулов была проверена и подтверждена аналогичным приложением давления к небольшому баллону, подключенному к манометру, как сообщалось ранее ²¹ .

Тест активности в открытом поле

Тест в открытом поле (OFT) — это парадигма, основанная на этологии, которая обеспечивает объективные измерения исследовательского поведения, а также является действительным начальным скринингом для определения тревожного поведения у грызунов.Тест проводился, как описано ранее ²³ . Аппарат состоял из арены из белого ПВХ (50 см × 30 см × 20 см), разделенной на квадраты 10 см × 10 см (n = 15). Три центральных квадрата определяли «центральную» область. Каждую мышь помещали в угловой квадрат лицом к стене, наблюдали и записывали в течение 3 минут. Регистрировали общее количество пересеченных квадратов (все четыре лапы внутрь), общее количество задних лап (определяемое как отрыв обеих передних лап от земли, но не как часть ухода) и количество пересечений центра.Стены и пол арены тщательно очищались между испытаниями.

Светло-темный челночный ящик

В этом тесте исследовательская деятельность отражает сочетание опасности и предотвращения риска ²⁴ . Аппарат состоял из коробки размером 45 см × 20 см × 21 см, разделенной на два отдельных отсека: одна треть (длина 15 см), окрашенная в черный цвет, с черной крышкой наверху, оставшиеся две трети окрашены в белый цвет и не закрыты. Отверстие размером 2,5 × 2,5 см соединяло два отделения. Одна сторона яркого ящика была прозрачной для оценки поведения, а непривлекательность этого отсека была увеличена за счет дополнительного освещения, обеспечиваемого лампой мощностью 50 Вт, расположенной на 45 см выше центра пола ящика.Тест проводился в соответствии с ранее опубликованным протоколом ²⁵ . Каждую мышь помещали в светлый отсек лицом от отверстия и позволяли исследовать коробку в течение 5 минут. Зависимые переменные включали время, проведенное в светлой зоне, задержку перехода в темную зону (все четыре лапы внутри) и общее количество переходов между отсеками. Аппарат очищали после каждого испытания.

Флуоресцентная гистохимия и количественное определение катехоламинсодержащих нервных волокон

Тимус и селезенка вырезали с помощью криостата для получения серийных срезов толщиной 16 мкм и обрабатывали в соответствии с модифицированной версией метода сахарозо-фосфатглиоксиловой кислоты (SPG) ²⁶ to идентифицировать нервные волокна, содержащие катеколамин.Вкратце, срезы сначала погружали в раствор, содержащий 1% глиоксиловой кислоты, 0,2 М сахарозы и 0,236 М одноосновного фосфата калия (pH 7,4), затем сливали и, наконец, покрывали нефлуоресцентным иммерсионным маслом, нагревали при 95 ° C в течение 2,5. мин. Чтобы предотвратить диффузию и фоторазложение флуоресценции, срезы были проанализированы и сфотографированы в тот же день с использованием флуоресцентного фотомикроскопа Olympus BH 2 (Olympus Optical Co. Ltd, Токио, Япония), оснащенного возбудительным фильтром BG 12 и барьерным фильтром Y495, Color View III. цифровая камера (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Мюнстер, Германия) и программное обеспечение AnalySIS FIVE (Olympus Soft Imaging Solutions).Цифровое количественное определение интенсивности флуоресценции было выполнено с использованием программного обеспечения ImageJ, как описано ранее ²⁷ . Микрофотографии 10 случайно выбранных соответствующих тестовых областей (увеличение × 40) были сделаны в каждом из 5 срезов на тимус. После преобразования изображений в режим серой шкалы были отслежены контуры каждого профиля флуоресцентного нерва и записаны интенсивности флуоресцентного сигнала (интенсивность пикселей на единицу площади). Затем для корректировки фоновой флуоресценции контуры наносили на ближайшие соседние области, не содержащие флуоресцентный материал, и полученные значения вычитали из значений, соответствующих профилям нервов.Данные были представлены в виде интенсивности флуоресценции групп, подвергшихся экспериментальной обработке, нормализованной к интенсивности флуоресценции соответствующих контрольных групп.

Концентрация норадреналина

Концентрация норадреналина в селезенке и тимусе определяли с помощью ELISA. Анализ выполняли с использованием коммерческого набора для ELISA (Labor Diagnostika Nord GmbH & Co., Нордхорн, Германия) в соответствии с протоколом производителя.

Количественная оценка плотности нервных волокон

Плотность флуоресцентных нервных волокон на 10 случайно взятых изображениях (увеличение × 40) из 5 срезов тимуса на животное измеряли с использованием подхода подсчета точек стереологической сетки ²⁸ и выражали как процент площади поля заняты флуоресцентными профилями нервов.

Проточный цитометрический анализ

Лимфоциты, собранные из лимфатических органов (например, тимуса, селезенки), окрашивали в 100 мкл буфера FACS (PBS, содержащий 5% FCS и 0,02% NaN ₂ ). Используемые антитела: анти-CD3 PE (клон 145-2C11, eBioscience), анти-CD4 FITC (клон GK 1.5, eBioscience), анти-CD8 Cy5 (клон 53-6.7, eBioscience), анти-CD25 FITC (клон PC61, BioLegend), анти-CD69 PE (клон h2.2F3, eBioscience). Клетки метили соответствующей концентрацией конъюгированных антител в течение 1 ч при 4 ° C, как описано ранее ²⁹ .После маркировки клетки промывали и анализировали. Во всех экспериментах окрашенные клетки получали с помощью проточного цитометра FACScalibur и анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo ^TM (Tree Star, Inc., Oregon Corporation).

Активация Т-клеток и продуцирование цитокинов

Т-клетки селезенки (1 × 10 ⁵ клеток / 200 мкл) инкубировали только с средой или стимулировали указанной концентрацией связанных с планшетом анти-CD3 и анти-CD28 в 96 пробах. планшеты с лунками. Для повышения регуляции CD25 и CD69 Т-клетки лимфатических узлов стимулировали в течение примерно 16 часов, в то время как супернатанты 24-часовой культуры использовали для продукции цитокинов.Производство цитокинов измеряли с помощью цитометрического гранулированного анализа с использованием наборов мышиного Th2 / Th3 10plex (eBioscience). Каждый образец (25 мкл супернатанта клеточной культуры) инкубировали с 50 мкл смеси шариков и 50 мкл смеси антител, конъюгированных с биотином, в течение 2 часов. После двух промывок добавляли стрептавидин, конъюгированный с PE, и оставляли образцы качаться в течение 1 часа в темноте. Наконец, образцы промывали и хранили в течение ночи при 4 ° C. Стандарты, разбавленные серийно в 7 раз, были приготовлены и обработаны одновременно.Образцы анализировали с помощью BD LSR Fortessa и программного обеспечения FlowCytomix (eBioscience).

Статистический анализ

Результаты были проанализированы, как описано ранее ^{30 , 31} с использованием GraphPad. Для сравнения между группами использовали односторонний дисперсионный анализ с последующим пост-тестом Бонферрони или апостериорным сравнением Ньюмана-Кеулса. Статистическая значимость была определена при p <0,05. Результаты выражали как среднее значение ± S.E.M.

Результаты

Терапия, подобная массажу, не вызывает изменений в поведении, похожем на тревожное.

На схеме резюмируется экспериментальный протокол, который мы использовали для этого исследования.Мы решили проводить терапию, подобную массажу, в течение 8 дней в свете предыдущих исследований, в которых мы оценивали влияние «поведенческих модуляторов», таких как обогащенная среда, на иммунную систему (неопубликованные данные). В этой и других подобных экспериментальных условиях мы обнаружили, что изменения начинают происходить и становятся значительными именно в этот момент времени.

Парадигма поглаживания, напоминающая массаж, и связанные с ней процедуры.

Схема на рисунке резюмирует общую экспериментальную процедуру, использованную в этом исследовании.Мышей-самцов C57BL / 6 разделили на 3 группы по 6 мышей и подвергли терапии, аналогичной массажу (поглаживание руками или поглаживанием кисти), или оставили нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, как подробно описано в разделе «Материалы и методы». В конце лечения мышей подвергали поведенческим тестам и анализировали их иммунный репертуар.

В течение 8 дней лечебного массажа мы отслеживали показатели благосостояния (http://www.nc3rs.org.uk/behaviour-laboratory-mice-indicator-welfare-state-genetically-modified-mice), такие как изменение веса, состояние шерсти, пилоэрекция, замораживание, количество фекалий, потребление пищи и воды и социальное агрессивное поведение.Ни одно из этих измерений не привело к какой-либо значительной разнице (данные не показаны) между 3 группами. Мы оценили дальнейшие изменения в поведении и самочувствии, в частности, тревожное поведение, используя два стандартных метода: открытое поле и коробку-челнок между светом и темнотой. В тесте «открытое поле» между тремя группами не наблюдалось различий в количестве квадратов, центральных переходов или задних частей (). Точно так же мыши, поглаживающие кистью и поглаживаемую рукой, не показали значительной разницы по сравнению с контрольной группой в количестве переходов свет / темнота или времени, проведенном в освещенной области, при тестировании с помощью челночного механизма свет / темнота ().Вместе эти результаты показали, что поглаживание, подобное массажу, не вызывало каких-либо значительных изменений в самочувствии, исследовательской активности или тревожном поведении.

Поглаживание, напоминающее массаж, не влияет на тревожное поведение.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками или кистью) или оставляли их нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем тестировали на предмет их уровня тревожного поведения. ( A ) Гистограммы показывают общее количество пересеченных квадратов, пересечений центра и задних частей, зарегистрированных в течение 5-минутной сессии теста в открытом поле.На изображениях (сверху) показаны типичные изображения квадрата, перекрестка в центре и тыла, соответственно. ( B ) Гистограммы показывают время, проведенное на свету, количество пересечений и время ожидания до первого пересечения, записанное во время 5-минутного испытания в тесте «свет-темнота». На изображениях (сверху) показаны репрезентативные изображения мыши в светлой области, полностью скрещенной (когда четыре полные лапы находятся на темной стороне коробки) и в первом кресте, соответственно. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представитель четырех экспериментов, в каждом из которых участвовало по 6 мышей на группу.

Терапия, подобная массажу, увеличивает клеточность тимуса и усиливает репертуар Т-клеток.

Чтобы оценить возможное влияние терапии, подобной массажу, на иммунный ответ, мы сначала проверили ее влияние на развитие Т-клеток в тимусе. Результаты показали увеличение количества тимоцитов у массированных мышей по сравнению с контрольными мышами без поглаживания (). Интересно, что достоверные различия были получены только с мышами, которых поглаживали вручную (p <0.01), но не мазками кистью. Это увеличение клеточности не было специфичным для Т-клеточного клона, поскольку анализ FACS тимоцитов на их профиль CD4 / CD8 показал лишь небольшую разницу между процентным содержанием клеток CD4 ⁺ / CD8 ⁺ между контрольными мышами и мышами, поглаживающими кисть или поглаживаемую рукой. (). При рассмотрении общего количества каждой субпопуляции тимоцитов только у мышей, подвергнутых поглаживанию вручную, наблюдалось значительное увеличение CD4 ⁺ CD8 ⁺ двойных положительных (DP) (p <0,001), CD4 ⁺ одиночных положительных (SP) (p <0.01), CD8 ⁺ SP клеток (p <0,001) по сравнению с контролем (), что свидетельствует о возможном влиянии массажной терапии на отрицательный отбор. Поскольку мыши, которым наносили мазок кистью, не показали значительных различий по сравнению с контрольной группой по любым из упомянутых выше показателей, мы продолжили наши тесты, сосредоточив внимание на эффектах мышей, которым массировали руки.

Поглаживание, подобное массажу, ускоряет развитие Т-клеток. Самцов мышей

C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживания руками или кистями) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их репертуар Т-клеток в тимусе.( A ) Гистограмма показывает общее количество тимоцитов, извлеченных в конце лечения, в то время как ( B ) показывает репрезентативные точечные графики различных субпопуляций тимоцитов: двойные отрицательные CD4 ^— CD8 ^— (DN; нижний левый квадрант), двойной положительный CD4 ⁺ CD8 ⁺ (DP; верхний правый квадрант), одиночный положительный CD4 ⁺ (CD4SP; нижний правый квадрант), одиночный положительный CD8 ⁺ (CD8SP; верхний левый квадрант) . ( C ) Показывает абсолютное количество каждой субпопуляции, упомянутой выше.Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представляют четыре эксперимента, каждый с участием 6 мышей на группу. ** р <0,01; *** р <0,001.

Выполняя такой же фенотипический анализ тимуса на популяциях клеток селезенки, мы наблюдали аналогичное усиливающее действие массажа на клеточность Т-клеток. Общее количество пост-фиколл-клеток (в основном мононуклеарных клеток) не показало каких-либо значительных различий между поглаживанием вручную и контролем (верхняя панель). Однако стробирование клеток CD3 ⁺ () и преобразование процентов в абсолютные числа (нижняя панель) выявили почти 100% -ное увеличение (p <0.001) Т-клеток в поглаживании руки по сравнению с контролем, соответственно. Что касается вилочковой железы, увеличение популяции Т-клеток не было искажено ни в сторону линий клеток CD4 ⁺ , ни в сторону линий CD8 ⁺ ().

Поглаживание, подобное массажу, увеличивает репертуар зрелых Т-клеток.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их репертуар Т-клеток в селезенке. ( A ) Верхняя гистограмма показывает общее количество спленоцитов, восстановленных в конце лечения, а нижняя показывает количество CD3 ⁺ Т-клеток, полученных после стробирования в спленоцитах для этой популяции.Две панели в ( B ) представляют собой репрезентативные гистограммы селективной популяции CD3 ⁺ , тогда как панели в ( C ) показывают их соответствующий профиль CD4 / CD8. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представляют четыре эксперимента, каждый с участием 6 мышей на группу. *** р <0,001.

Подобная массажу терапия снижает норадренергический тонус вилочковой железы и селезенки

Катехоламины, высвобождаемые в лимфоидных органах под контролем центральной нервной системы, являются известными регуляторами иммунного репертуара ^{32 , 33} .Чтобы проверить возможность того, что катеколамины опосредуют усиливающий эффект терапии, подобной массажу, в наших тестах мы измерили концентрацию норадреналина, а также интенсивность и плотность норадренергических нервных волокон в тимусе и селезенке.

Иммунофлуоресцентный анализ срезов тимуса для катехоламинсодержащих нервных волокон показал значительное снижение интенсивности флуоресценции как в области кортикального, так и в кортико-медуллярном соединении у мышей, которых поглаживали вручную, по сравнению с контролем (правая и левая панели соответственно).Это согласуется с тем фактом, что большие норадренергические нервные сплетения преобладают в субкапсулярной коре и кортикомедуллярном соединении, где находятся более зрелые тимоциты ^{34 , 35} . Отдельные варикозные нервные волокна, ответвляющиеся от этих сплетений, оканчиваются в кортикальной, реже медуллярной паренхиме ^{34 , 35} . Количественный анализ интенсивности флуоресценции и плотности нервов подтвердил эти наблюдения и показал снижение примерно на 40% (p <0.01) и 60% (p <0,001), соответственно, в тканях, подвергнутых поглаживанию вручную, по сравнению с контролем (верхняя и средняя панели соответственно). Наконец, анализ содержания норадреналина в гомогенатах тканей отразил результаты иммунофлуоресценции и показал общее снижение примерно на 50% (p <0,01) уровней норадреналина у массированных мышей по сравнению с контролем (нижняя панель).

Поглаживание, напоминающее массаж, снижает норадренергический тонус тимуса.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их норадренергическую иннервацию и тонус в тимусе.Микрофотографии иммунофлуоресценции в ( A ) показывают репрезентативные изображения норадренергических нервов, присутствующих в различных участках тимуса: C = кора; Т = трабекулы; M = продолговатый мозг; CMJ = кортикомедуллярное соединение. Гистограммы на ( B ) показывают (сверху) интенсивность флуоресценции нервных волокон, плотность нервных волокон (%) и концентрацию норадреналина (пг / мг) в гомогенатах тканей. Значения каждого столбца столбца выражены как среднее ± S.E.M. из n = 6 мышей. ** р <0.01; *** р <0,001.

Мы провели такой же анализ селезенки и получили аналогичные результаты, например снижение интенсивности флуоресценции норадренергических волокон (p <0,01) и плотности (p <0,01) (микрофотографии на верхней и средней панелях в 6B) и значительное снижение уровней норадреналина в гомогенатах селезенки мышей, поглаженных вручную, по сравнению с контролем (p <0,05) (, нижняя панель).

Поглаживание, напоминающее массаж, снижает норадренергический тонус селезенки.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их норадренергическую иннервацию и тонус в селезенке.Микрофотографии иммунофлуоресценции в ( A ) показывают репрезентативные изображения норадренергических нервов, присутствующих в различных участках селезенки. Гистограммы на ( B ) показывают (сверху) интенсивность флуоресценции нервных волокон, плотность нервных волокон (%) и концентрацию норадреналина (пг / мг) в гомогенатах тканей. Значения каждого столбца столбца выражены как среднее ± S.E.M. из n = 6 мышей. * р <0,05; ** р <0,01.

Терапия, подобная массажу, не изменяет профиль активации зрелых Т-клеток

Чтобы оценить, сопровождались ли повышающие эффекты массажной терапии на количество Т-клеток также изменениями их функции, мы провели несколько основных тестов на Т-клетках. активация с использованием связанных с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 (анти-CD3 / CD28) в качестве стимула.Стимуляция Т-клеток от поглаженных вручную мышей субоптимальным (0,1 мкг / мл) или оптимальным (0,5 мкг / мл) анти-CD3 / CD28 вызывала зависимое от концентрации увеличение экспрессии CD25 и CD69 (маркеры активации Т-клеток), которое было сравнимо с наблюдаемым в контрольных клетках (). Кроме того, анализ уровней цитокинов в супернатантах стимулированных Т-клеток не показал существенной разницы в уровнях классического Th2 (IFN-γ, IL-2 и GM-CSF), Th3 (IL-10 и IL-13) или Цитокины Th27 (IL-17) между двумя группами ().

Поглаживание, подобное массажу, не влияет на профиль активации зрелых Т-клеток.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их профиль активации Т-клеток in vitro . ( A ) Т-клетки стимулировали указанными концентрациями связанных с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 в течение 16-18 часов, а затем окрашивали и анализировали их экспрессию CD25 и CD69 с помощью FACS.( B ) Графики показывают уровни указанных цитокинов, присутствующих в супернатантах Т-клеток, стимулированных 0,5 мкг / мл связанного с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 в течение 22-24 часов. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и репрезентативны 2 эксперимента, в каждом из которых участвует 6 мышей на группу.

Подобная массажу терапия обращает вспять иммуносупрессивные эффекты гидрокортизона на тимоциты

Клинические данные свидетельствуют о том, что массаж полезен для лечения иммунодефицита после химиотерапии ³⁶ или у пациентов, страдающих иммунодефицитными расстройствами ³ .Чтобы резюмировать эти результаты, мы лечили мышей гидрокортизоном. Известно, что этот стероид вызывает временную иммуносупрессию за счет индукции апоптоза тимоцитов DP (максимум на 3/4 день после инъекции) с последующим восстановлением до нормального размера и субпопуляции через неделю после лечения ^{37 , 38} . На 4-й день после лечения около 30% тимоцитов DP выжили в контрольной группе, получавшей гидрокортизон (). Напротив, у мышей, получавших гидрокортизон и массаж, подобный терапии, наблюдалось снижение только до 60% (p <0.05 против контрольных мышей, получавших гидрокортизон). Подобные различия, хотя и незначительные, наблюдались на 8-й день, когда вилочковая железа полностью восстановилась (данные не показаны).

Поглаживание, подобное массажу, восстанавливает иммуносупрессивный эффект гидрокортизона на CD4 + CD8 + двойные положительные Т-клетки.

Самцов мышей C57BL / 6 получали внутрибрюшинную инъекцию гидрокортизона (2,5 мг / мышь) или носителя, а затем подвергали массажной терапии (поглаживание вручную) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, как показано на рисунке.На 4-й день после провокации гидрокортизоном анализировали репертуар Т-клеток в тимусе. Панели в ( A ) показывают репрезентативные точечные графики различных субпопуляций тимоцитов, а ( B ) показывают общее (левая панель) или CD4 ⁺ CD8 ⁺ двойных положительных (правая панель) количества тимоцитов. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и репрезентативны 2 эксперимента, в каждом из которых участвует 6 мышей на группу. * р <0,05; ** р <0,01; *** p <0,001 по сравнению с контрольным средством .§ p <0,05 против гидрокортизона.

Обсуждение

Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы изучить влияние поглаживания, напоминающего массаж, на иммунную систему на экспериментальной модели. Как человеческое (управляемое пальцами), так и нечеловеческое (управляемое мазком кисти) поглаживание показало тенденцию к увеличению количества Т-клеток в лимфоидных органах. Однако только поглаживание вручную показало статистически значимую разницу по сравнению с контролем, что подтверждает гипотезу о том, что приложение контролируемого давления может быть не единственным параметром, который способствует терапевтическому эффекту массажа ¹⁷ .Другие факторы, такие как тепло или консистенция области контакта (в нашем случае пальцы), могут играть роль.

Стремясь лучше понять возможный механизм наблюдаемых различий в Т-клеточности, мы сначала попытались исследовать, было ли это стимулирующее действие массажа на Т-клетки каким-либо образом связано с гедонистическим значением поглаживания и массажа для настроения, как это часто описывается для человек ¹⁷ . Наши результаты показали, что это не было связано со значительной разницей в уровнях тревожного поведения.Есть много возможных объяснений этого несоответствия, например, продолжительность самого лечения недостаточна для «трансформации» в существенные изменения тревожного поведения (8 дней вместо недель) или, что наиболее вероятно, отсутствие модулирующего воздействия. влияние нашей массажной парадигмы на тревожность. В связи с этим интересно отметить, что исследования, посвященные обращению с мышами с помощью туннелей, сообщили об аналогичных результатах, например, это обращение не всегда имеет анксиолитический эффект, поскольку это, по-видимому, зависит от линии мышей, используемого экспериментального теста и, что не менее важно, социального взаимодействия с другими мышами ^{39 , 40} .

Эти удивительные результаты противоречат нашей первоначальной гипотезе о том, что положительный эмоциональный ответ, вызванный массажем, в конечном итоге будет связан с его иммуномодулирующим действием, и побудили нас изучить другие возможные механизмы. Предыдущие исследования, проведенные на людях, показали, что массаж может либо усилить вагусную активность за счет стимуляции рецепторов давления, которые в конечном итоге сигнализируют лимбической системе ^{41 , 42} , либо уменьшить высвобождение норадреналина в кровоток, вызывая общее подавление регуляции симпатическая активность ^{43 , 44} .Интересно, что исследования нашей собственной лаборатории и других исследовательских групп показали, что симпатические нервы, которые иннервируют лимфоидные ткани, являются одним из основных путей взаимодействия нейронов и иммунной системы для поддержания гомеостаза тела ^{35 , 45 , 46 , 47 , 48} . Что наиболее важно, данные свидетельствуют о том, что этот гомеостатический перекрестный разговор ответственен за «обработку информации», такой как поведенческие условия или изменения внешних факторов окружающей среды, и ее перевод в специфические иммунные ответы ^{32 , 49} .

Наш анализ норадренергического тонуса, присутствующего в тимусе и селезенке мышей, подвергшихся поглаживанию, подтвердил эти результаты и показал резкое снижение плотности нервов и содержания норадреналина по сравнению с контрольными мышами. Норадренергические нервы тимуса берут начало в основном из верхних шейных и звездчатых ганглиев и входят в тимус с крупными кровеносными сосудами, заканчиваясь капсулой и междольковыми перегородками. От этих сосудистых нервных сплетений более мелкие сосудистые сплетения расходятся в кору.Вместо этого селезенка получает богатый запас симпатических нервов в основном из верхних брыжеечных и чревных ганглиозных сплетений, а ее норадренергическая иннервация широко распространяется на различные части селезенки, включая капсулу, трабекулы, красную пульпу и белую пульпу ^{47 , 50 , 51} . Функциональное значение этой сложной сети состоит в том, чтобы обеспечивать как усиление, так и подавление иммунных функций. В наших исследованиях снижение норадренергического тонуса как тимуса, так и селезенки вызвало значительное увеличение клеточности Т-клеток, как это наблюдалось в других условиях, посредством фармакологического или хирургического снижения норадренергического тонуса ³⁵ .Это повышение количества Т-клеток не сопровождалось изменениями в ответе TCR in vitro , как показали наши тесты по активации зрелых Т-клеток, подтверждающие идею о том, что иммуномодулирующие эффекты, которые мы наблюдали in vivo , могут быть связаны с лимфоидным органом. микроокружение, а не прямой эффект на уровне экспрессии гена Т-лимфоцитов, например их способности расширяться и распространяться.

Как массажные поглаживания снижают норадренергический тонус? Хотя мы не полностью рассмотрели этот вопрос, в литературе появляется все больше доказательств, подтверждающих концепцию интерактивной сети между кожными нервами, нейроэндокринной осью и иммунной системой.Основываясь на этих теориях, кожу действительно можно считать нейроиммуноэндокринным органом, который контролирует широкий спектр функций через периферическую сенсорную нервную систему, автономную нервную систему, а также центральную нервную систему (более подробный обзор этой темы см. ⁵² ). Эта идея была дополнительно подтверждена недавним новым исследованием Vrontou et al. ²² , который идентифицировал немиелинизированные сенсорные нейроны С-типа, которые обнаруживают массажные поглаживания на волосатой коже у мышей.Эти нейроны, названные MRGPRB4 +, иннервируют исключительно волосатую кожу и, как было показано, тесно связаны с C-LTMRs, обнаруженными у людей ²² . Наиболее поразительно то, что эти волокна оканчиваются в субстанции дорсального рога спинного мозга нейронами ⁵³ , которые проектируют островную кору ⁵⁴ , область мозга, отвечающую за благополучие и эмоции ⁵⁵ , но также показанную для игры. решающая роль в центральной автономной сети ⁹⁰ . Ответы симпатических нервов на стимуляцию островковой коры опосредуются синапсами в латеральной области гипоталамуса и вентролатеральном мозговом веществе ⁹¹ , структурами мозга, связанными с иммуномодуляцией ⁹² .

Несмотря на важность полного исследования клеточных и молекулярных механизмов, лежащих в основе иммуномодулирующей функции массажа, одним из основных результатов этого исследования является подтверждение на экспериментальных животных наблюдений, проведенных на людях, в отношении эффективности массажа в лечении иммунодефицитов ^{3 , 56 , 57 , 58} . Концепция, согласно которой массаж обладает «восстанавливающими» свойствами, хорошо известна в области спортивной медицины, где было показано, что массаж имеет важную иммунорегуляторную функцию после физических нагрузок ^{59 , 60} .В частности, было показано, что массаж способствует восстановлению от временного иммуносупрессивного состояния, вызванного физическими упражнениями, посредством высвобождения большего количества клеток в кровоток и контроля инфильтрации воспалительных клеток в мышцы ^{61 , 62} . Аналогичным образом, есть некоторые свидетельства того, что массаж может поддерживать восстановление иммунной функции в периоды иммуносупрессии, противодействуя потере Т-клеток у пациентов, страдающих от рака и ВИЧ-инфекции ^{3 , 16 , 19 , 58} .Хотя наши результаты внешне сопоставимы с этими исследованиями, наши результаты подтверждают эти выводы и позволяют предположить, что массаж способствует поддержанию иммунокомпетентности.

Требуются дополнительные исследования как на экспериментальном, так и на клиническом уровне, чтобы полностью оценить потенциальное терапевтическое применение массажной терапии, используемой в качестве вспомогательного средства к стандартной терапии. Тем не менее, мы думаем, что наши исследования поддерживают новаторские научные взгляды, подчеркивающие важность учета множества систем (системная биология), которые гомеостатически регулируют то, что обычно известно как «благополучие» ⁶³ .Действительно, наши результаты подтверждают концепцию о том, что механизмы, регулирующие гомеостаз ^{64 , 65} , имеют фундаментальное значение для лучшего понимания причин иммунного и воспалительного «недомогания» — от старофранцузского «aise» до латинского. «Adjacens» (живущий рядом).

Поглаживание, подобное массажу, укрепляет иммунную систему у мышей

Abstract

Недавние клинические данные свидетельствуют о том, что терапевтический эффект массажа затрагивает иммунную систему и что его можно использовать в качестве дополнительной терапии вместе со стандартными лекарственными средствами.В этом исследовании мы исследовали механизмы, лежащие в основе этих эффектов, исследуя иммуномодулирующую функцию поглаживания как суррогата терапии, подобной массажу, у мышей. Мышей C57 / BL6 гладили ежедневно в течение 8 дней либо мягкой щеткой, либо непосредственно рукой в ​​перчатке, а затем анализировали на различия в их иммунном репертуаре по сравнению с контрольными мышами без поглаживания. Наши результаты показывают, что у мышей, которым поглаживали руки, но не поглаживали кисть, наблюдалось значительное увеличение количества Т-клеток тимуса и селезенки (p <0.05; р <0,01). Эти эффекты не были связаны со значительными изменениями в предопределении линии CD4 / CD8 или профиле активации. Усиливающие эффекты на репертуар Т-клеток массажной терапии были связаны со снижением норадренергической иннервации лимфоидных органов и противодействовали иммуносупрессивному эффекту гидрокортизона in vivo . В совокупности наши результаты на мышах подтверждают гипотезу о том, что массажи могут иметь терапевтическое значение при лечении иммунодефицитов и связанных с ними расстройств, и предполагают снижение тормозящего норадренергического тонуса в лимфоидных органах как одно из возможных объяснений их иммуномодулирующей функции.

Массаж — это одна из многих форм реабилитационной медицины, которая долгое время использовалась в качестве дополнительного лечения различных психических и физических состояний. Действительно, сообщалось, что массаж облегчает мышечную боль и способствует восстановлению ¹ , облегчает симптомы тошноты и усталости у онкологических больных ² , способствует снижению стресса и повышению внимания ^{1 , 3} и способствует росту и развитие ⁴ . В последнее время массаж приобрел еще большую популярность в клинических отделениях, поскольку его можно применять для разного круга пациентов: от детей ⁵ до пожилых ⁶ , профессионалов в области спортивных состязаний ⁷ и «неактивных» людей. из всех слоев общества ⁸ .Несмотря на такой широкий спектр применения, очень мало известно о клеточных и молекулярных механизмах положительного воздействия массажа. В самом деле, отсутствие стандартизации, субъективность получателя и поставщика, вместе с множеством тканей и органов, «активируемых» массажем, сделали эту дополнительную терапию сложной практикой для изучения в экспериментальных условиях.

Лучший способ описать практику массажа — это механическое воздействие на ткани тела с помощью ритмично прикладываемых движений и давления ⁹ .Следуя этому определению, разумно думать, что один механизм, в котором массаж инициирует свои эффекты, заключается в стимуляции нервной системы через различных механорецепторов, обнаруженных в коже (например, тельца Мейснера и Пачини, окончания дисков Меркеля, Руффини и свободные нервные окончания. ) ¹⁰ . Затем давление, оказываемое на эти рецепторы, выражается в различных эффектах. Более конкретно, он может активировать пути, которые передают сигналы по длинным и миелинизированным нервным волокнам в лимфатическую область мозга ¹¹ , или может влиять на высвобождение растворимых мессенджеров, таких как вещество P или серотонин, которые считаются ответственными за опосредование « расслабления ». эффекты массажа ^{12 , 13} .Вместе эти данные свидетельствуют о том, что эмоциональное благополучие и нейронная модуляция являются ключевыми элементами терапевтической эффективности массажа.

Нас особенно интересуют способы, с помощью которых эмоциональное благополучие регулирует иммунный ответ ^{14 , 15} . Заинтригованные недавними клиническими исследованиями, в которых изучалось использование массажа как средства обеспечения комбинированного положительного воздействия на эмоциональное благополучие и иммунный ответ ^{13 , 16 , 17 , 18 , 19} , мы стремились создали экспериментальную систему, которая позволила бы нам исследовать иммуномодулирующие эффекты терапии, подобной массажу, на мышах.С этой целью мы протестировали эффекты поглаживания как суррогата массажа, а также сравнили человеческий (управляемый пальцами) и нечеловеческий (управляемый мазком кисти) подходы, чтобы оценить два разных типа поглаживания. Наши результаты предоставляют экспериментальные доказательства, подтверждающие гипотезу о том, что массажи обладают иммуномодулирующим действием, и предполагают другой возможный клеточный и молекулярный механизм терапевтических эффектов этой терапии.

Материалы и методы

Мыши и химические вещества

Для всех экспериментов мы использовали мышей-самцов C57BL / 6 в возрасте 5 недель, приобретенных у Charles River.Животных содержали группами максимум по 6 мышей в клетке в условиях отсутствия специфических патогенов и со свободным доступом к пище и воде. Мышей содержали в течение 7 дней перед тестированием, в результате чего им было 6 недель, когда началось лечение массажем. Все тесты проводились вслепую и в соответствии с Законом Великобритании о животных (научные процедуры) 1986 года. Все экспериментальные протоколы были одобрены местным отделением биологической службы Лондонского университета королевы Марии. Мыши, получавшие гидрокортизон, получали суспензию 2.5 мг гемисукцината гидрокортизона (Sigma-Aldrich) в 200 мкл PBS.

Поглаживание, напоминающее массаж

Тесты проводились двойным слепым методом во время светлой фазы цикла свет-темнота. Были предприняты все усилия, чтобы свести к минимуму дискомфорт у мышей в этих поведенческих экспериментах. Мышей приводили в комнату для тестирования по крайней мере за 30 минут до начала сеанса тестирования, чтобы они могли привыкнуть к среде тестирования. Если не указано иное, на протяжении каждого эксперимента поддерживались стандартное освещение (~ 50 люкс) и тихие условия.

Мыши были разделены на три группы: 1) контрольные (без инсульта) мыши; 2) гладкие мыши; 3) поглаженных вручную мышей, по 6 мышей в каждой группе за эксперимент. Лечение проводили, помещая одну мышь в новую клетку каждый день, как описано ранее ²⁰ . Эти клетки были идентичны домашней клетке, однако крышка, измельченная бумага, еда и вода были удалены. Для каждой мыши использовали новые клетки, чтобы уменьшить запах от предыдущей мыши. Мышей, которых поглаживали кистью и рукой, поглаживали при давлении 100-150 мм рт. Ст. ₂ O (или 7-11 мм рт. касались (рукой или кистью) в течение 60-минутной обработки.Поглаживание кистью производилось с помощью кисти da Vinci № 5, а поглаживание вручную — тремя пальцами предпочтительной руки исследователя, как описано ранее ²² . Для поглаживания руками экспериментатор носил одноразовые виниловые перчатки Bizzybee (Amazon, Великобритания). Эти перчатки без запаха уменьшали запах человека, но сохраняли контакт с человеком, то есть тепло и давление. Мышей гладили по волосистой коже, обнаруженной на задней спинной грудной и проксимальной части задних конечностей ²² , цефалокаудальным образом (голова к хвосту) ²⁰ .Мыши, которым наносили поглаживание кистью и рукой, получали приблизительно 20 движений каждые 5 минут (0,5-1,0 Гц). Эксперименты проводились 3 разными экспериментаторами, обученными выполнять одну и ту же процедуру. Воспроизводимость ручных стимулов была проверена и подтверждена аналогичным приложением давления к небольшому баллону, подключенному к манометру, как сообщалось ранее ²¹ .

Тест активности в открытом поле

Тест в открытом поле (OFT) — это парадигма, основанная на этологии, которая обеспечивает объективные измерения исследовательского поведения, а также является действительным начальным скринингом для определения тревожного поведения у грызунов.Тест проводился, как описано ранее ²³ . Аппарат состоял из арены из белого ПВХ (50 см × 30 см × 20 см), разделенной на квадраты 10 см × 10 см (n = 15). Три центральных квадрата определяли «центральную» область. Каждую мышь помещали в угловой квадрат лицом к стене, наблюдали и записывали в течение 3 минут. Регистрировали общее количество пересеченных квадратов (все четыре лапы внутрь), общее количество задних лап (определяемое как отрыв обеих передних лап от земли, но не как часть ухода) и количество пересечений центра.Стены и пол арены тщательно очищались между испытаниями.

Светло-темный челночный ящик

В этом тесте исследовательская деятельность отражает сочетание опасности и предотвращения риска ²⁴ . Аппарат состоял из коробки размером 45 см × 20 см × 21 см, разделенной на два отдельных отсека: одна треть (длина 15 см), окрашенная в черный цвет, с черной крышкой наверху, оставшиеся две трети окрашены в белый цвет и не закрыты. Отверстие размером 2,5 × 2,5 см соединяло два отделения. Одна сторона яркого ящика была прозрачной для оценки поведения, а непривлекательность этого отсека была увеличена за счет дополнительного освещения, обеспечиваемого лампой мощностью 50 Вт, расположенной на 45 см выше центра пола ящика.Тест проводился в соответствии с ранее опубликованным протоколом ²⁵ . Каждую мышь помещали в светлый отсек лицом от отверстия и позволяли исследовать коробку в течение 5 минут. Зависимые переменные включали время, проведенное в светлой зоне, задержку перехода в темную зону (все четыре лапы внутри) и общее количество переходов между отсеками. Аппарат очищали после каждого испытания.

Флуоресцентная гистохимия и количественное определение катехоламинсодержащих нервных волокон

Тимус и селезенка вырезали с помощью криостата для получения серийных срезов толщиной 16 мкм и обрабатывали в соответствии с модифицированной версией метода сахарозо-фосфатглиоксиловой кислоты (SPG) ²⁶ to идентифицировать нервные волокна, содержащие катеколамин.Вкратце, срезы сначала погружали в раствор, содержащий 1% глиоксиловой кислоты, 0,2 М сахарозы и 0,236 М одноосновного фосфата калия (pH 7,4), затем сливали и, наконец, покрывали нефлуоресцентным иммерсионным маслом, нагревали при 95 ° C в течение 2,5. мин. Чтобы предотвратить диффузию и фоторазложение флуоресценции, срезы были проанализированы и сфотографированы в тот же день с использованием флуоресцентного фотомикроскопа Olympus BH 2 (Olympus Optical Co. Ltd, Токио, Япония), оснащенного возбудительным фильтром BG 12 и барьерным фильтром Y495, Color View III. цифровая камера (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Мюнстер, Германия) и программное обеспечение AnalySIS FIVE (Olympus Soft Imaging Solutions).Цифровое количественное определение интенсивности флуоресценции было выполнено с использованием программного обеспечения ImageJ, как описано ранее ²⁷ . Микрофотографии 10 случайно выбранных соответствующих тестовых областей (увеличение × 40) были сделаны в каждом из 5 срезов на тимус. После преобразования изображений в режим серой шкалы были отслежены контуры каждого профиля флуоресцентного нерва и записаны интенсивности флуоресцентного сигнала (интенсивность пикселей на единицу площади). Затем для корректировки фоновой флуоресценции контуры наносили на ближайшие соседние области, не содержащие флуоресцентный материал, и полученные значения вычитали из значений, соответствующих профилям нервов.Данные были представлены в виде интенсивности флуоресценции групп, подвергшихся экспериментальной обработке, нормализованной к интенсивности флуоресценции соответствующих контрольных групп.

Концентрация норадреналина

Концентрация норадреналина в селезенке и тимусе определяли с помощью ELISA. Анализ выполняли с использованием коммерческого набора для ELISA (Labor Diagnostika Nord GmbH & Co., Нордхорн, Германия) в соответствии с протоколом производителя.

Количественная оценка плотности нервных волокон

Плотность флуоресцентных нервных волокон на 10 случайно взятых изображениях (увеличение × 40) из 5 срезов тимуса на животное измеряли с использованием подхода подсчета точек стереологической сетки ²⁸ и выражали как процент площади поля заняты флуоресцентными профилями нервов.

Проточный цитометрический анализ

Лимфоциты, собранные из лимфатических органов (например, тимуса, селезенки), окрашивали в 100 мкл буфера FACS (PBS, содержащий 5% FCS и 0,02% NaN ₂ ). Используемые антитела: анти-CD3 PE (клон 145-2C11, eBioscience), анти-CD4 FITC (клон GK 1.5, eBioscience), анти-CD8 Cy5 (клон 53-6.7, eBioscience), анти-CD25 FITC (клон PC61, BioLegend), анти-CD69 PE (клон h2.2F3, eBioscience). Клетки метили соответствующей концентрацией конъюгированных антител в течение 1 ч при 4 ° C, как описано ранее ²⁹ .После маркировки клетки промывали и анализировали. Во всех экспериментах окрашенные клетки получали с помощью проточного цитометра FACScalibur и анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo ^TM (Tree Star, Inc., Oregon Corporation).

Активация Т-клеток и продуцирование цитокинов

Т-клетки селезенки (1 × 10 ⁵ клеток / 200 мкл) инкубировали только с средой или стимулировали указанной концентрацией связанных с планшетом анти-CD3 и анти-CD28 в 96 пробах. планшеты с лунками. Для повышения регуляции CD25 и CD69 Т-клетки лимфатических узлов стимулировали в течение примерно 16 часов, в то время как супернатанты 24-часовой культуры использовали для продукции цитокинов.Производство цитокинов измеряли с помощью цитометрического гранулированного анализа с использованием наборов мышиного Th2 / Th3 10plex (eBioscience). Каждый образец (25 мкл супернатанта клеточной культуры) инкубировали с 50 мкл смеси шариков и 50 мкл смеси антител, конъюгированных с биотином, в течение 2 часов. После двух промывок добавляли стрептавидин, конъюгированный с PE, и оставляли образцы качаться в течение 1 часа в темноте. Наконец, образцы промывали и хранили в течение ночи при 4 ° C. Стандарты, разбавленные серийно в 7 раз, были приготовлены и обработаны одновременно.Образцы анализировали с помощью BD LSR Fortessa и программного обеспечения FlowCytomix (eBioscience).

Статистический анализ

Результаты были проанализированы, как описано ранее ^{30 , 31} с использованием GraphPad. Для сравнения между группами использовали односторонний дисперсионный анализ с последующим пост-тестом Бонферрони или апостериорным сравнением Ньюмана-Кеулса. Статистическая значимость была определена при p <0,05. Результаты выражали как среднее значение ± S.E.M.

Результаты

Терапия, подобная массажу, не вызывает изменений в поведении, похожем на тревожное.

На схеме резюмируется экспериментальный протокол, который мы использовали для этого исследования.Мы решили проводить терапию, подобную массажу, в течение 8 дней в свете предыдущих исследований, в которых мы оценивали влияние «поведенческих модуляторов», таких как обогащенная среда, на иммунную систему (неопубликованные данные). В этой и других подобных экспериментальных условиях мы обнаружили, что изменения начинают происходить и становятся значительными именно в этот момент времени.

Парадигма поглаживания, напоминающая массаж, и связанные с ней процедуры.

Схема на рисунке резюмирует общую экспериментальную процедуру, использованную в этом исследовании.Мышей-самцов C57BL / 6 разделили на 3 группы по 6 мышей и подвергли терапии, аналогичной массажу (поглаживание руками или поглаживанием кисти), или оставили нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, как подробно описано в разделе «Материалы и методы». В конце лечения мышей подвергали поведенческим тестам и анализировали их иммунный репертуар.

В течение 8 дней лечебного массажа мы отслеживали показатели благосостояния (http://www.nc3rs.org.uk/behaviour-laboratory-mice-indicator-welfare-state-genetically-modified-mice), такие как изменение веса, состояние шерсти, пилоэрекция, замораживание, количество фекалий, потребление пищи и воды и социальное агрессивное поведение.Ни одно из этих измерений не привело к какой-либо значительной разнице (данные не показаны) между 3 группами. Мы оценили дальнейшие изменения в поведении и самочувствии, в частности, тревожное поведение, используя два стандартных метода: открытое поле и коробку-челнок между светом и темнотой. В тесте «открытое поле» между тремя группами не наблюдалось различий в количестве квадратов, центральных переходов или задних частей (). Точно так же мыши, поглаживающие кистью и поглаживаемую рукой, не показали значительной разницы по сравнению с контрольной группой в количестве переходов свет / темнота или времени, проведенном в освещенной области, при тестировании с помощью челночного механизма свет / темнота ().Вместе эти результаты показали, что поглаживание, подобное массажу, не вызывало каких-либо значительных изменений в самочувствии, исследовательской активности или тревожном поведении.

Поглаживание, напоминающее массаж, не влияет на тревожное поведение.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками или кистью) или оставляли их нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем тестировали на предмет их уровня тревожного поведения. ( A ) Гистограммы показывают общее количество пересеченных квадратов, пересечений центра и задних частей, зарегистрированных в течение 5-минутной сессии теста в открытом поле.На изображениях (сверху) показаны типичные изображения квадрата, перекрестка в центре и тыла, соответственно. ( B ) Гистограммы показывают время, проведенное на свету, количество пересечений и время ожидания до первого пересечения, записанное во время 5-минутного испытания в тесте «свет-темнота». На изображениях (сверху) показаны репрезентативные изображения мыши в светлой области, полностью скрещенной (когда четыре полные лапы находятся на темной стороне коробки) и в первом кресте, соответственно. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представитель четырех экспериментов, в каждом из которых участвовало по 6 мышей на группу.

Терапия, подобная массажу, увеличивает клеточность тимуса и усиливает репертуар Т-клеток.

Чтобы оценить возможное влияние терапии, подобной массажу, на иммунный ответ, мы сначала проверили ее влияние на развитие Т-клеток в тимусе. Результаты показали увеличение количества тимоцитов у массированных мышей по сравнению с контрольными мышами без поглаживания (). Интересно, что достоверные различия были получены только с мышами, которых поглаживали вручную (p <0.01), но не мазками кистью. Это увеличение клеточности не было специфичным для Т-клеточного клона, поскольку анализ FACS тимоцитов на их профиль CD4 / CD8 показал лишь небольшую разницу между процентным содержанием клеток CD4 ⁺ / CD8 ⁺ между контрольными мышами и мышами, поглаживающими кисть или поглаживаемую рукой. (). При рассмотрении общего количества каждой субпопуляции тимоцитов только у мышей, подвергнутых поглаживанию вручную, наблюдалось значительное увеличение CD4 ⁺ CD8 ⁺ двойных положительных (DP) (p <0,001), CD4 ⁺ одиночных положительных (SP) (p <0.01), CD8 ⁺ SP клеток (p <0,001) по сравнению с контролем (), что свидетельствует о возможном влиянии массажной терапии на отрицательный отбор. Поскольку мыши, которым наносили мазок кистью, не показали значительных различий по сравнению с контрольной группой по любым из упомянутых выше показателей, мы продолжили наши тесты, сосредоточив внимание на эффектах мышей, которым массировали руки.

Поглаживание, подобное массажу, ускоряет развитие Т-клеток. Самцов мышей

C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживания руками или кистями) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их репертуар Т-клеток в тимусе.( A ) Гистограмма показывает общее количество тимоцитов, извлеченных в конце лечения, в то время как ( B ) показывает репрезентативные точечные графики различных субпопуляций тимоцитов: двойные отрицательные CD4 ^— CD8 ^— (DN; нижний левый квадрант), двойной положительный CD4 ⁺ CD8 ⁺ (DP; верхний правый квадрант), одиночный положительный CD4 ⁺ (CD4SP; нижний правый квадрант), одиночный положительный CD8 ⁺ (CD8SP; верхний левый квадрант) . ( C ) Показывает абсолютное количество каждой субпопуляции, упомянутой выше.Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представляют четыре эксперимента, каждый с участием 6 мышей на группу. ** р <0,01; *** р <0,001.

Выполняя такой же фенотипический анализ тимуса на популяциях клеток селезенки, мы наблюдали аналогичное усиливающее действие массажа на клеточность Т-клеток. Общее количество пост-фиколл-клеток (в основном мононуклеарных клеток) не показало каких-либо значительных различий между поглаживанием вручную и контролем (верхняя панель). Однако стробирование клеток CD3 ⁺ () и преобразование процентов в абсолютные числа (нижняя панель) выявили почти 100% -ное увеличение (p <0.001) Т-клеток в поглаживании руки по сравнению с контролем, соответственно. Что касается вилочковой железы, увеличение популяции Т-клеток не было искажено ни в сторону линий клеток CD4 ⁺ , ни в сторону линий CD8 ⁺ ().

Поглаживание, подобное массажу, увеличивает репертуар зрелых Т-клеток.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их репертуар Т-клеток в селезенке. ( A ) Верхняя гистограмма показывает общее количество спленоцитов, восстановленных в конце лечения, а нижняя показывает количество CD3 ⁺ Т-клеток, полученных после стробирования в спленоцитах для этой популяции.Две панели в ( B ) представляют собой репрезентативные гистограммы селективной популяции CD3 ⁺ , тогда как панели в ( C ) показывают их соответствующий профиль CD4 / CD8. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и представляют четыре эксперимента, каждый с участием 6 мышей на группу. *** р <0,001.

Подобная массажу терапия снижает норадренергический тонус вилочковой железы и селезенки

Катехоламины, высвобождаемые в лимфоидных органах под контролем центральной нервной системы, являются известными регуляторами иммунного репертуара ^{32 , 33} .Чтобы проверить возможность того, что катеколамины опосредуют усиливающий эффект терапии, подобной массажу, в наших тестах мы измерили концентрацию норадреналина, а также интенсивность и плотность норадренергических нервных волокон в тимусе и селезенке.

Иммунофлуоресцентный анализ срезов тимуса для катехоламинсодержащих нервных волокон показал значительное снижение интенсивности флуоресценции как в области кортикального, так и в кортико-медуллярном соединении у мышей, которых поглаживали вручную, по сравнению с контролем (правая и левая панели соответственно).Это согласуется с тем фактом, что большие норадренергические нервные сплетения преобладают в субкапсулярной коре и кортикомедуллярном соединении, где находятся более зрелые тимоциты ^{34 , 35} . Отдельные варикозные нервные волокна, ответвляющиеся от этих сплетений, оканчиваются в кортикальной, реже медуллярной паренхиме ^{34 , 35} . Количественный анализ интенсивности флуоресценции и плотности нервов подтвердил эти наблюдения и показал снижение примерно на 40% (p <0.01) и 60% (p <0,001), соответственно, в тканях, подвергнутых поглаживанию вручную, по сравнению с контролем (верхняя и средняя панели соответственно). Наконец, анализ содержания норадреналина в гомогенатах тканей отразил результаты иммунофлуоресценции и показал общее снижение примерно на 50% (p <0,01) уровней норадреналина у массированных мышей по сравнению с контролем (нижняя панель).

Поглаживание, напоминающее массаж, снижает норадренергический тонус тимуса.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их норадренергическую иннервацию и тонус в тимусе.Микрофотографии иммунофлуоресценции в ( A ) показывают репрезентативные изображения норадренергических нервов, присутствующих в различных участках тимуса: C = кора; Т = трабекулы; M = продолговатый мозг; CMJ = кортикомедуллярное соединение. Гистограммы на ( B ) показывают (сверху) интенсивность флуоресценции нервных волокон, плотность нервных волокон (%) и концентрацию норадреналина (пг / мг) в гомогенатах тканей. Значения каждого столбца столбца выражены как среднее ± S.E.M. из n = 6 мышей. ** р <0.01; *** р <0,001.

Мы провели такой же анализ селезенки и получили аналогичные результаты, например снижение интенсивности флуоресценции норадренергических волокон (p <0,01) и плотности (p <0,01) (микрофотографии на верхней и средней панелях в 6B) и значительное снижение уровней норадреналина в гомогенатах селезенки мышей, поглаженных вручную, по сравнению с контролем (p <0,05) (, нижняя панель).

Поглаживание, напоминающее массаж, снижает норадренергический тонус селезенки.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их норадренергическую иннервацию и тонус в селезенке.Микрофотографии иммунофлуоресценции в ( A ) показывают репрезентативные изображения норадренергических нервов, присутствующих в различных участках селезенки. Гистограммы на ( B ) показывают (сверху) интенсивность флуоресценции нервных волокон, плотность нервных волокон (%) и концентрацию норадреналина (пг / мг) в гомогенатах тканей. Значения каждого столбца столбца выражены как среднее ± S.E.M. из n = 6 мышей. * р <0,05; ** р <0,01.

Терапия, подобная массажу, не изменяет профиль активации зрелых Т-клеток

Чтобы оценить, сопровождались ли повышающие эффекты массажной терапии на количество Т-клеток также изменениями их функции, мы провели несколько основных тестов на Т-клетках. активация с использованием связанных с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 (анти-CD3 / CD28) в качестве стимула.Стимуляция Т-клеток от поглаженных вручную мышей субоптимальным (0,1 мкг / мл) или оптимальным (0,5 мкг / мл) анти-CD3 / CD28 вызывала зависимое от концентрации увеличение экспрессии CD25 и CD69 (маркеры активации Т-клеток), которое было сравнимо с наблюдаемым в контрольных клетках (). Кроме того, анализ уровней цитокинов в супернатантах стимулированных Т-клеток не показал существенной разницы в уровнях классического Th2 (IFN-γ, IL-2 и GM-CSF), Th3 (IL-10 и IL-13) или Цитокины Th27 (IL-17) между двумя группами ().

Поглаживание, подобное массажу, не влияет на профиль активации зрелых Т-клеток.

Самцов мышей C57BL / 6 подвергали массажной терапии (поглаживание руками) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, а затем анализировали их профиль активации Т-клеток in vitro . ( A ) Т-клетки стимулировали указанными концентрациями связанных с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 в течение 16-18 часов, а затем окрашивали и анализировали их экспрессию CD25 и CD69 с помощью FACS.( B ) Графики показывают уровни указанных цитокинов, присутствующих в супернатантах Т-клеток, стимулированных 0,5 мкг / мл связанного с планшетом анти-CD3 плюс анти-CD28 в течение 22-24 часов. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и репрезентативны 2 эксперимента, в каждом из которых участвует 6 мышей на группу.

Подобная массажу терапия обращает вспять иммуносупрессивные эффекты гидрокортизона на тимоциты

Клинические данные свидетельствуют о том, что массаж полезен для лечения иммунодефицита после химиотерапии ³⁶ или у пациентов, страдающих иммунодефицитными расстройствами ³ .Чтобы резюмировать эти результаты, мы лечили мышей гидрокортизоном. Известно, что этот стероид вызывает временную иммуносупрессию за счет индукции апоптоза тимоцитов DP (максимум на 3/4 день после инъекции) с последующим восстановлением до нормального размера и субпопуляции через неделю после лечения ^{37 , 38} . На 4-й день после лечения около 30% тимоцитов DP выжили в контрольной группе, получавшей гидрокортизон (). Напротив, у мышей, получавших гидрокортизон и массаж, подобный терапии, наблюдалось снижение только до 60% (p <0.05 против контрольных мышей, получавших гидрокортизон). Подобные различия, хотя и незначительные, наблюдались на 8-й день, когда вилочковая железа полностью восстановилась (данные не показаны).

Поглаживание, подобное массажу, восстанавливает иммуносупрессивный эффект гидрокортизона на CD4 + CD8 + двойные положительные Т-клетки.

Самцов мышей C57BL / 6 получали внутрибрюшинную инъекцию гидрокортизона (2,5 мг / мышь) или носителя, а затем подвергали массажной терапии (поглаживание вручную) или оставляли нетронутыми (контроль) в течение 7 дней, как показано на рисунке.На 4-й день после провокации гидрокортизоном анализировали репертуар Т-клеток в тимусе. Панели в ( A ) показывают репрезентативные точечные графики различных субпопуляций тимоцитов, а ( B ) показывают общее (левая панель) или CD4 ⁺ CD8 ⁺ двойных положительных (правая панель) количества тимоцитов. Значения выражены как среднее ± S.E.M. и репрезентативны 2 эксперимента, в каждом из которых участвует 6 мышей на группу. * р <0,05; ** р <0,01; *** p <0,001 по сравнению с контрольным средством .§ p <0,05 против гидрокортизона.

Обсуждение

Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы изучить влияние поглаживания, напоминающего массаж, на иммунную систему на экспериментальной модели. Как человеческое (управляемое пальцами), так и нечеловеческое (управляемое мазком кисти) поглаживание показало тенденцию к увеличению количества Т-клеток в лимфоидных органах. Однако только поглаживание вручную показало статистически значимую разницу по сравнению с контролем, что подтверждает гипотезу о том, что приложение контролируемого давления может быть не единственным параметром, который способствует терапевтическому эффекту массажа ¹⁷ .Другие факторы, такие как тепло или консистенция области контакта (в нашем случае пальцы), могут играть роль.

Стремясь лучше понять возможный механизм наблюдаемых различий в Т-клеточности, мы сначала попытались исследовать, было ли это стимулирующее действие массажа на Т-клетки каким-либо образом связано с гедонистическим значением поглаживания и массажа для настроения, как это часто описывается для человек ¹⁷ . Наши результаты показали, что это не было связано со значительной разницей в уровнях тревожного поведения.Есть много возможных объяснений этого несоответствия, например, продолжительность самого лечения недостаточна для «трансформации» в существенные изменения тревожного поведения (8 дней вместо недель) или, что наиболее вероятно, отсутствие модулирующего воздействия. влияние нашей массажной парадигмы на тревожность. В связи с этим интересно отметить, что исследования, посвященные обращению с мышами с помощью туннелей, сообщили об аналогичных результатах, например, это обращение не всегда имеет анксиолитический эффект, поскольку это, по-видимому, зависит от линии мышей, используемого экспериментального теста и, что не менее важно, социального взаимодействия с другими мышами ^{39 , 40} .

Эти удивительные результаты противоречат нашей первоначальной гипотезе о том, что положительный эмоциональный ответ, вызванный массажем, в конечном итоге будет связан с его иммуномодулирующим действием, и побудили нас изучить другие возможные механизмы. Предыдущие исследования, проведенные на людях, показали, что массаж может либо усилить вагусную активность за счет стимуляции рецепторов давления, которые в конечном итоге сигнализируют лимбической системе ^{41 , 42} , либо уменьшить высвобождение норадреналина в кровоток, вызывая общее подавление регуляции симпатическая активность ^{43 , 44} .Интересно, что исследования нашей собственной лаборатории и других исследовательских групп показали, что симпатические нервы, которые иннервируют лимфоидные ткани, являются одним из основных путей взаимодействия нейронов и иммунной системы для поддержания гомеостаза тела ^{35 , 45 , 46 , 47 , 48} . Что наиболее важно, данные свидетельствуют о том, что этот гомеостатический перекрестный разговор ответственен за «обработку информации», такой как поведенческие условия или изменения внешних факторов окружающей среды, и ее перевод в специфические иммунные ответы ^{32 , 49} .

Наш анализ норадренергического тонуса, присутствующего в тимусе и селезенке мышей, подвергшихся поглаживанию, подтвердил эти результаты и показал резкое снижение плотности нервов и содержания норадреналина по сравнению с контрольными мышами. Норадренергические нервы тимуса берут начало в основном из верхних шейных и звездчатых ганглиев и входят в тимус с крупными кровеносными сосудами, заканчиваясь капсулой и междольковыми перегородками. От этих сосудистых нервных сплетений более мелкие сосудистые сплетения расходятся в кору.Вместо этого селезенка получает богатый запас симпатических нервов в основном из верхних брыжеечных и чревных ганглиозных сплетений, а ее норадренергическая иннервация широко распространяется на различные части селезенки, включая капсулу, трабекулы, красную пульпу и белую пульпу ^{47 , 50 , 51} . Функциональное значение этой сложной сети состоит в том, чтобы обеспечивать как усиление, так и подавление иммунных функций. В наших исследованиях снижение норадренергического тонуса как тимуса, так и селезенки вызвало значительное увеличение клеточности Т-клеток, как это наблюдалось в других условиях, посредством фармакологического или хирургического снижения норадренергического тонуса ³⁵ .Это повышение количества Т-клеток не сопровождалось изменениями в ответе TCR in vitro , как показали наши тесты по активации зрелых Т-клеток, подтверждающие идею о том, что иммуномодулирующие эффекты, которые мы наблюдали in vivo , могут быть связаны с лимфоидным органом. микроокружение, а не прямой эффект на уровне экспрессии гена Т-лимфоцитов, например их способности расширяться и распространяться.

Как массажные поглаживания снижают норадренергический тонус? Хотя мы не полностью рассмотрели этот вопрос, в литературе появляется все больше доказательств, подтверждающих концепцию интерактивной сети между кожными нервами, нейроэндокринной осью и иммунной системой.Основываясь на этих теориях, кожу действительно можно считать нейроиммуноэндокринным органом, который контролирует широкий спектр функций через периферическую сенсорную нервную систему, автономную нервную систему, а также центральную нервную систему (более подробный обзор этой темы см. ⁵² ). Эта идея была дополнительно подтверждена недавним новым исследованием Vrontou et al. ²² , который идентифицировал немиелинизированные сенсорные нейроны С-типа, которые обнаруживают массажные поглаживания на волосатой коже у мышей.Эти нейроны, названные MRGPRB4 +, иннервируют исключительно волосатую кожу и, как было показано, тесно связаны с C-LTMRs, обнаруженными у людей ²² . Наиболее поразительно то, что эти волокна оканчиваются в субстанции дорсального рога спинного мозга нейронами ⁵³ , которые проектируют островную кору ⁵⁴ , область мозга, отвечающую за благополучие и эмоции ⁵⁵ , но также показанную для игры. решающая роль в центральной автономной сети ⁹⁰ . Ответы симпатических нервов на стимуляцию островковой коры опосредуются синапсами в латеральной области гипоталамуса и вентролатеральном мозговом веществе ⁹¹ , структурами мозга, связанными с иммуномодуляцией ⁹² .

Несмотря на важность полного исследования клеточных и молекулярных механизмов, лежащих в основе иммуномодулирующей функции массажа, одним из основных результатов этого исследования является подтверждение на экспериментальных животных наблюдений, проведенных на людях, в отношении эффективности массажа в лечении иммунодефицитов ^{3 , 56 , 57 , 58} . Концепция, согласно которой массаж обладает «восстанавливающими» свойствами, хорошо известна в области спортивной медицины, где было показано, что массаж имеет важную иммунорегуляторную функцию после физических нагрузок ^{59 , 60} .В частности, было показано, что массаж способствует восстановлению от временного иммуносупрессивного состояния, вызванного физическими упражнениями, посредством высвобождения большего количества клеток в кровоток и контроля инфильтрации воспалительных клеток в мышцы ^{61 , 62} . Аналогичным образом, есть некоторые свидетельства того, что массаж может поддерживать восстановление иммунной функции в периоды иммуносупрессии, противодействуя потере Т-клеток у пациентов, страдающих от рака и ВИЧ-инфекции ^{3 , 16 , 19 , 58} .Хотя наши результаты внешне сопоставимы с этими исследованиями, наши результаты подтверждают эти выводы и позволяют предположить, что массаж способствует поддержанию иммунокомпетентности.

Требуются дополнительные исследования как на экспериментальном, так и на клиническом уровне, чтобы полностью оценить потенциальное терапевтическое применение массажной терапии, используемой в качестве вспомогательного средства к стандартной терапии. Тем не менее, мы думаем, что наши исследования поддерживают новаторские научные взгляды, подчеркивающие важность учета множества систем (системная биология), которые гомеостатически регулируют то, что обычно известно как «благополучие» ⁶³ .Действительно, наши результаты подтверждают концепцию о том, что механизмы, регулирующие гомеостаз ^{64 , 65} , имеют фундаментальное значение для лучшего понимания причин иммунного и воспалительного «недомогания» — от старофранцузского «aise» до латинского. «Adjacens» (живущий рядом).

Клиника сбалансированного здоровья — Thymus Thump

Многие из моих клиентов видели, как я проделываю с ними эту удивительную технику …

Thymus Thump (также известный как точка счастья) может помочь нейтрализовать негативную энергию, излучать спокойствие, восстановить энергию, поддержать исцеление и яркое здоровье, а также укрепить вашу иммунную систему.

Простая, но очень эффективная энергетическая техника включает постукивание, удары руками или царапинами по точке вилочковой железы. Слово тимус происходит от греческого слова «тимос», что означает «жизненная энергия». Вилочковая железа расположена прямо под верхней частью грудины посередине грудной клетки. Он контролирует систему меридианов тела. Его роль заключается в поддержании высокой частоты вибрации вашей собственной жизненной энергии. Когда вилочковая железа находится в гармонии, это может увеличить вашу силу и жизнеспособность. ДокторДжон Даймонд, автор книги «Энергия жизни», поддерживает, что вилочковая железа контролирует и регулирует поток энергии в организме.

Таким образом, когда есть дисбаланс в потоке энергии, Thymus Thump может помочь исправить его.

Вилочковая железа связана между разумом и телом, поэтому при эмоциональном или физическом расстройстве вилочковая железа может сокращаться и вызывать истощение этой жизненной энергии.

Как это сделать:

• Вы можете ударить кулаком в середину груди (вспомните Тарзана) по точке, показанной на схеме.Ритмично постучите по этой области несколько раз, думая о чем-то чудесном. Сделайте это примерно 20 секунд и глубоко вдохните и выдохните. При каждом ударе произносите « Ха-ха-ха »
• Когда вы активируете вилочковую железу, вы узнаете, что почувствуете легкое покалывание или легкое чувство «радости» или «счастья». Еще один совет — делать по три удара за раз, но более четко выделять первый удар. Некоторым людям может пройти некоторое время, прежде чем вы что-нибудь «почувствуете».Будьте настойчивы, и вы получите это, и оно того стоит.
• Делайте это каждый день, чтобы активировать свою жизненную энергию и вилочковую железу, но делайте это несколько раз в день, если вы страдаете от беспокойства, панических атак или стресса, и позволяете своей жизненной энергии ожить.

Регенерация тимуса | Eurostemcell

Исследователи обнаружили в тимусе мыши стволовые клетки или клетки-предшественники (клетки, подобные стволовым клеткам), которые могут образовывать тимус при трансплантации.Исследования также изучают стратегии, способствующие лучшей регенерации нативного тимуса (в организме) и инженерии ткани тимуса для трансплантации. Существуют различные источники стволовых клеток и подходы, которые используются для этого:

1. Использование тканевых стволовых клеток

Если клетки тимуса одной мыши трансплантируются другой мыши, они создают функциональный тимус, который может продуцировать Т-клетки. Необходима дальнейшая работа, чтобы увидеть, верно ли то же самое для клеток-предшественников тимуса человека.Кроме того, прежде чем этот подход станет клинически полезным, ученым необходимо выяснить, как вырастить эти стволовые клетки тимуса в лаборатории, чтобы получить количество, необходимое для трансплантации.

2. Использование плюрипотентных стволовых клеток

Исследователям удалось получить тимусоподобные клетки из плюрипотентных стволовых клеток в лаборатории. Эта работа была проведена как с мышиными, так и с человеческими плюрипотентными клетками. Если эти результаты можно улучшить так, чтобы выращенные в лаборатории клетки были идентичны клеткам тимуса в организме, это проложит путь для производства ткани тимуса человека в лаборатории для трансплантации.Создание индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из собственных клеток пациента и их использование для создания клеток тимуса может стать способом преодоления проблемы иммунного отторжения.

Изображение органоида вилочковой железы, окрашенного красителями гемотоксилин и эозин. Клетки тимуса окрашены в темно-фиолетовый цвет, тогда как более светлые розовые клетки — это клетки почек. Изображение любезно предоставлено Ником Бреденкампом.

3. Перепрограммирование клеток других тканей

Исследователи смогли создать человеческие «пре-Т-клетки» (клетки, которые будут производить и стать Т-клетками) из клеток-предшественников крови человека в лаборатории и трансплантировать эти клетки на мышах показал многообещающие результаты для ускорения восстановления иммунной системы после трансплантации костного мозга.Пре-Т-клетки трансплантируются во время терапии и созревают в Т-клетки в организме пациента.

В ходе текущих исследований был найден способ превращения клеток соединительной ткани, называемых фибробластами, в клетки-предшественники тимуса в лаборатории с помощью процесса, называемого перепрограммированием. При трансплантации мышам эти клетки создают функционирующую вилочковую железу, которая поддерживает нормальное производство Т-клеток. Если этот подход также работает с клетками человека, эти выращенные в лаборатории клетки могут стать альтернативным источником клеток для трансплантации тимуса.Ученые также используют эти производимые в лаборатории клетки тимуса для изучения функции тимуса и для тестирования улучшенных способов создания тимуса или мини-тимуса (называемого органоидом) в лаборатории, которые можно было бы использовать для трансплантации и для тестирования новых лекарств.

Надеемся, что при наличии дополнительного времени и ресурсов исследователи смогут разработать способы восстановления функции тимуса, которые помогут ряду пациентов.

(PDF) Поглаживание, напоминающее массаж, укрепляет иммунную систему мышей

www.nature.com / scientificreports /

12

! «# $% & # ‘#» (RepoRts () (* +, -., / () (01 # + (, -2, — / 345678, -., /

28. Вернли, Г., Хасан, В., Бхаттахерджи, А., ван Ройен, Н. и Смит, П.Г. Истощение макрофагов подавляет симпатическую

гипериннервацию после инфаркта миокарда. Фундаментальные исследования в области кардиологии 104, 681–693, DOI : 10.1007 / s00395-009-0033-3

(2009)

29. Paschalidis, N. и др. Роль эндогенного аннексина-A1 в регуляции положительного и отрицательного отбора тимоцитов.Cell Cycle

9, 784–793, DOI: 10673.

30. Бейли, К. Р. и Кроули, Дж. Н. в «Методы анализа поведения на границах неврологии в неврологии» (изд. Дж. Дж. Буккафуско)

(2009).

31. Paschalidis, N. et al. Роль эндогенного аннексина-A1 в регуляции положительного и отрицательного отбора тимоцитов. Cell Cycle

9, 784–793 (2010).

32. Дхабхар, Ф. С., Маларки, В. Б., Нери, Э. и МакИвен, Б.S. Стресс-индуцированное перераспределение иммунных клеток — от бараков до

бульваров

до полей сражений: сказка о трех гормонах — лауреат премии Курта Рихтера. Психонейроэндокринология 37, 1345–1368,

DOI: 10.1016 / j.psyneuen.2012.05.008 (2012).

33. Миннини Ф., Стреччони В. и Амента Ф. Вегетативная иннервация иммунных органов и нейроиммунная модуляция. Auton

Autacoid Pharmacol 23, 1-25 (2003).

34. Лепосавич, Г., Пилипович, И. и Перишич, М. Клеточная и нервная катехоламинергическая сеть тимуса: активность

, зависящая от стероидных гормонов. Physiol Res 60 (Дополнение 1), S71–82 (2011).

35. Leposavic, G. et al. Катехоламины как иммуномодуляторы: роль адренорецепторно-опосредованных механизмов в одной настройке развития Т-клеток

. Auton Neurosci 144, 1–12, DOI: 10.1016 / j.autneu.2008.09.003 (2008).

36. Мански П. Дж. И Валлерстедт Д. Б. Дополнительная медицина в паллиативной помощи и лечении онкологических симптомов.Cancer J 12,

425–431 (2006).

37. Hager-eodorides, AL, Rowbotham, NJ, Outram, SV, Dessens, JT & Crompton, T. Бета-отбор: изобилие

TCRbeta- / gammadelta- CD44- CD25- (DN4) клеток в вилочковая железа плода. Eur J Immunol 37, 487–500, DOI: 10.1002 / eji.200636503

(2007).

38. Crompton, T., Ohashi, P., Schneider, S.D., Pircher, H. & MacDonald, H.R. Чувствительная к кортизону CD3low субпопуляция CD4 + CD8-

тимоцитов представляет собой промежуточную стадию в интратимическом выборе репертуара.Int Immunol. 4, 153–161 (1992).

39. Гувейя, К. и Херст, Дж. Л. Снижение беспокойства мышей во время манипуляции: влияние опыта работы с туннелями. PLoS One 8,

e66401, DOI: 10.1371 / journal.pone.0066401 (2013).

40. Херст, Дж. Л. и Уэст, Р. С. Укрощение тревожности у лабораторных мышей. Nat. Методы 7, 825–826, DOI: 10.1038 / nmeth.1500 (2010).

41. Диего, М. А. и Филд, Т. Массаж с умеренным давлением вызывает реакцию парасимпатической нервной системы.Int J Neurosci 119,

630–638, DOI: 10.1080 / 00207450802329605 (2009).

42. Филд, Т. и Диего, М. Блуждающая активность, ранний рост и эмоциональное развитие. Младенческое поведение Дев 31, 361–373, DOI: 10.1016 / j.

дюйм.2007.12.008 (2008).

43. Acolet, D. et al. Изменения концентрации кортизола и катехоламинов в плазме в ответ на массаж у недоношенных детей. Arch

Dis Child 68, 29–31 (1993).

44. Field, T. et al.Беременные женщины получают пользу от массажа. J. Psychosom Obstet Gynaecol 20, 31–38 (1999).

45. Radojevic, K. et al. Влияние катехоламинов на апоптоз и пролиферацию тимоцитов зависит от микроокружения тимоцитов.

J Neuroimmunol 272, 16–28, DOI: 10.1016 / j.jneuroim.2014.04.010 (2014).

46. Pilipovic, I. et al. Передача катехоламинергических сигналов через волокна тимуса, тимоциты и стромальные клетки зависит как от

циркулирующих, так и от локально синтезируемых глюкокортикоидов.Exp Physiol 97, 1211–1223, DOI: 10.1113 / expphysiol.2012.064899 (2012).

47. Лепосавич Г., Пилипович И. и Перишич М. Возрастное ремоделирование нейронной и неневральной катехоламинергической сети тимуса

влияет на продуктивность тимопоэза. Нейроиммуномодуляция 18, 290–308, DOI: 10.1159 / 000329499 (2011).

48. Leposavic, G. & Perisic, M. Возрастное ремоделирование тимопоэза: роль гонадных гормонов и катехоламинов.

Нейроиммуномодуляция 15, 290–322, DOI: 10.1159/000156473 (2008).

49. Коста-Пинто, Ф. А. и Палермо-Нето, Дж. Нейроиммунные взаимодействия при стрессе. Нейроиммуномодуляция 17, 196–199,

DOI: 10.1159 / 000258722 (2010).

50. Хори, Т., Катафучи, Т., Таке, С., Симидзу, Н., Нийдзима, А. Автономная нервная система как канал связи между

мозгом и иммунной системой. Нейроиммуномодуляция 2, 203–215 (1995).

51. Беллинджер, Д. Л., Лортон, Д., Фелтен, С.Y. & Felten, D. L. Иннервация лимфоидных органов и ее влияние на развитие, старение,

и аутоиммунитет. Int J Immunopharmacol 14, 329–344 (1992).

52. Roosterman, D., Goerge, T., Schneider, S. W., Bunnett, N. W., Steinho, M. Нейрональный контроль функции кожи: кожа как нейроиммуноэндокринный орган

. Physiol Rev 86, 1309–1379, DOI: 10.1152 / Physrev.00026.2005 (2006).

53. Wang, H. & Zylka, M. J. Полимодальные ноцицептивные нейроны, экспрессирующие Mrgprd, иннервируют большинство известных классов желатинового вещества

нейронов.Журнал нейробиологии: официальный журнал Общества нейробиологии 29, 13202–13209, DOI: 10.1523 /

JNEUROSCI.3248-09.2009 (2009).

54. Бьорнсдоттер, М., Локен, Л., Олауссон, Х., Валлбо, А. и Вессберг, Дж. Соматотопическая организация обработки мягкого прикосновения в задней части коры островка

. Журнал неврологии: официальный журнал Общества нейробиологии 29, 9314–9320, DOI: 10.1523 /

JNEUROSCI.0400-09.2009 (2009).

55. Макглоун, Ф., Валлбо, А. Б., Олауссон, Х., Локен, Л. и Вессберг, Дж. Дискриминационное прикосновение и эмоциональное прикосновение. Канадский журнал экспериментальной психологии

= Revue canadienne de Psyologie Experimentale 61, 173–183 (2007).

56. Освальт, К. и Биазини, Ф. Воздействие детского массажа на ВИЧ-инфицированных матерей и их младенцев. J Spec Pediatr Nurs 16, 169–178,

DOI: 10.1111 / j.1744-6155.2011.00291.x (2011).

57.Hernandez-Reif, M. et al. Доминиканские дети с ВИЧ, не получающие антиретровирусные препараты: лечебный массаж влияет на их поведение и развитие. Доказанное дополнение, Альтернативная медицина 5, 345–354, DOI: 10.1093 / ecam / nem032 (2008).

58. Шор-Познер, Г., Мигес, М.Дж., Эрнандес-Рейф, М., Перес-Шен, Э. и Флетчер, М. Массажное лечение ВИЧ-1 инфицированных

Доминиканские дети: предварительный отчет о эффективность лечебного массажа для сохранения иммунной системы у детей, не принимающих

антиретровирусных препаратов.J Altern Complement Med 10, 1093–1095, DOI: 10.1089 / acm.2004.10 .1093 (2004).

59. Arroyo-Morales, M. et al. Массаж после тренировки — ответы иммунологических и эндокринных маркеров: рандомизированное слепое исследование

с плацебо-контролем. J Strength Cond Res 23, 638–644, DOI: 10.1519 / JSC.0b013e318196b6a6 (2009).

60. Рейли Т. и Экблом Б. Использование методов восстановления после тренировки. J Sports Sci 23, 619–627, DOI: 10.1080 / 02640410400021302

(2005).

61. Haas, C. et al. Время массажа влияет на восстановление мышц после тренировки и воспаление на модели кролика. Med Sci Sports Exerc

45, 1105–1112, DOI: 10.1249 / MSS.0b013e31827fdf18 (2013).

62. Crane, J. D. et al. Массажная терапия ослабляет воспалительные сигналы, возникающие при повреждении мышц, вызванном физической нагрузкой. Sci Transl Med 4,

119ra113, DOI: 10.1126 / scitranslmed.3002882 (2012).

63. МакГарти, А. М., Пенпраз, В. и Мелвилл, К. А.Использование акселерометра во время исследования физической активности на основе eld у детей и

подростков с ограниченными интеллектуальными возможностями: систематический обзор. Res Dev Disabil 35, 973–981, DOI: 10.1016 / j.ridd.2014.02.009 (2014).

64. Човатия Р. и Меджитов Р. Стресс, воспаление и защита гомеостаза. Mol Cell 54, 281–288, DOI: 10,1016 / j.

molcel.2014.03.030 (2014).

Омолаживайте вилочковую железу — доктор Дж. Э. Уильямс

Здоровая вилочковая железа повышает иммунитет к борьбе с инфекциями, предотвращает рак и увеличивает продолжительность жизни.

Д-р Дж. Э. Уильямс | 8 июня 2020 года

Представьте себе, что в центре галактики есть небольшой, но важный астероид, который звездолеты, возвращаясь на Землю, должны посетить, чтобы получить жизненно важное питательное вещество, добытое внутри астероида. Это вещество бодрит пассажиров и экипаж, поэтому они чувствуют себя достаточно хорошо, чтобы завершить путешествие домой. И это гарантирует, что они обладают иммунитетом против многих инфекционных микроорганизмов Земли.

Самым странным в этом астероиде является то, что немногие на Земле знают о его существовании.И те, кто это делает, — например, капитаны трансокеанских путешествий по старому пополнению запасов воды с удаленных островов — принимают это как должное. Десятилетиями астрономы думали, что это кусок мертвой планеты, лишний камень в космосе. Но галактические путешественники в конце концов узнали, что игнорирование последствий огромно.

Такой эликсир существует в нашем организме, который необходим для регулирования иммунитета и поддержки здорового старения. В некотором смысле вилочковая железа и производимые ею гормоны являются эликсиром жизни на Земле.Он не только обеспечивает иммунный баланс, чтобы выжить в детских инфекциях и предотвратить рак в более позднем возрасте, но также является стимулятором продолжительности жизни человека.

Мы плохо живем и нездоровы без тимусного эликсира, который уравновешивает наш иммунитет с биологической жизнью на этой планете.

Как и безымянный астероид, исследователи игнорировали тимус, пока Жак Миллер не обнаружил его функцию в начале 1960-х годов. [1] Еще в 1963 году лауреат Нобелевской премии сэр Питер Медавар назвал вилочковую железу «эволюционной случайностью, не имеющей большого значения.«Как ошибался выдающийся ученый, ставший рыцарем!

Подобно межгалактическому веществу, трансформирующий тимический эликсир вашего тела усиливает системы жизнеобеспечения организма, поддерживая вас в живых и функционирующих до конца вашего жизненного пути. Этого не избежать: вилочковая железа жизненно важна для здоровья и долголетия.

Вилочковая железа — главный иммунный орган

Вилочковая железа расположена в центре грудной клетки за грудиной, на равном расстоянии между легкими чуть выше сердца.Он состоит из двух долей. Каждая доля имеет более мелкие участки, называемые дольками, что придает вилочковой железе неровный вид. Эта небольшая бугристая железа обеспечивает микросреду, своего рода инкубатор, для развития Т-клеток, критически важных для поддержания иммунитета. Т-клетки — это своего рода лимфоциты, которые играют важную роль в формировании иммунного ответа.

Никто не знает, почему тимус функционирует на пике своей активности, когда мы молоды, и ослабевает с возрастом. Можно подумать, что он будет оставаться сильным на протяжении всей жизни или даже адаптироваться и укрепиться с возрастом.Но эта ослабленная характеристика может объяснить, почему COVID-19 меньше влияет на детей, чья вилочковая железа полностью функциональна, и почему пожилые люди легче умирают. С возрастом вилочковая железа атрофируется, и ее функции иммунологически ослабляются.

Основная функция вилочковой железы — способствовать развитию Т-лимфоцитов («Т» означает вилочковая железа). Костный мозг производит незрелые Т-клетки, которые проходят через кровоток в тимус, где они созревают в функциональные Т-клетки, необходимые для иммунитета первой линии против чужеродных клеток, включая вирусы.

Т-клетки играют жизненно важную роль во всем спектре иммунитета. Они участвуют в воспалительном каскаде, реакции на вакцинацию, а также в аллергиях и аутоиммунных заболеваниях. Т-клетки также участвуют в дисбактериозе кишечника, нарушении обмена веществ, восстановлении тканей и поддержании здоровой беременности.

Вилочковая железа может выглядеть простой, но очень сложной. Внутри долек тимуса новобранцы Т-лимфоцитов отбираются на предмет компетентности и становятся лимфоцитами-помощниками CD4 + или лимфоцитами-убийцами CD8 + [2]. Баланс между CD4 и CD8 имеет решающее значение для устойчивости к вирусным инфекциям.

Помимо Т-клеток, тимус вырабатывает гормоны и иммунорегулирующие соединения, называемые цитокинами. Но слишком много цитокинов вызывают иммунный шторм, вызывая гиперактивный ответ, который может привести к смерти. Так было при первых заражениях коронавирусом SARS. Пациенты были поражены вирусом, и их иммунная система была чрезмерно агрессивной. Цитокиновые бури часто встречаются у пожилых пациентов с коронавирусной инфекцией COVID-19. Но здоровый, хорошо функционирующий тимус поддерживает иммунную систему в равновесии.

Функция тимуса не ограничивается иммунными клетками и цитокинами. Клетки вилочковой железы вырабатывают биологически активные вещества, в том числе гормоны, три основных из которых: тимозин, тимопоитен и тимулин. Он также производит пептиды и интерлейкины, класс иммуномодулирующих молекул, таких как IL-6, которые влияют на воспалительный ответ на инфекцию. И помогите победить рак.

Здоровая и компетентная вилочковая железа необходима для выживания при инфекциях, предотвращения рака и для продления здоровья в период старения.Но если вам 45 или 65 лет, как узнать, достаточно ли хорошо функционирует вилочковая железа? К сожалению, нет прямого способа оценить функцию тимуса. Для моих пациентов с хроническими заболеваниями и в период старения я заказываю лабораторный тест на Т- и В-лимфоциты для оценки иммунного статуса. Недостаток этих первичных иммунных клеток указывает на то, что ваш тимус не работает. [3]

Тимус как кардиостимулятор продолжительности жизни

Исследователи и врачи, занимающиеся проблемами старения, знали о важности вилочковой железы еще до доктора Др.Миллер идентифицировал Т-клетки. В 1930-х годах швейцарский врач доктор Пауль Ниханс был одним из первых, кто вводил пациентам препараты, изготовленные из вилочковой железы животных. В 1955 году другой швейцарский врач и ученик Ниханса, доктор Альфред Пфистер, разработал метод стабилизации обработанных клеток тимуса, так что врачам не нужно было вводить свежие экстракты. А в 1970-х годах шведский врач доктор Элис Сандберг разработала высокомолекулярный экстракт тимуса, который до сих пор используется для восстановительной терапии тимуса.

Помимо тренировки Т-клеток, вилочковая железа также вырабатывает гормоны, необходимые для иммунорегуляции во время старения. Одним из таких иммунных агентов являются тимозины, группа гормоноподобных веществ, важных для поддержания иммунного баланса, а также играющих роль в регулировании старения.

Даже при здоровом старении иммунная функция ухудшается. Это потому, что у людей вилочковая железа стареет быстрее, чем остальная часть тела. Он достигает своего пика в подростковом возрасте и начинает атрофироваться со значительным уменьшением размеров и функций к среднему возрасту.К 75 годам вилочковая железа весит только 1/6 от максимального веса в 37 граммов в молодости.

Старение неизбежно и необратимо. Некоторые стареют медленнее и живут дольше, чем другие. Но рано или поздно вилочковая железа сокращается. Снижение функции тимуса с сопутствующей атрофией желез повышает восприимчивость к инфекции, аутоиммунитет и повышенный риск рака.

Мы не знаем, почему атрофия вилочковой железы атрофируется с такой угрожающей скоростью, но исследователи старения считают предотвращение атропии тимуса ключевым фактором в продлении здоровья во время старения.Итак, есть смысл защищать вилочковую железу примерно с 35 лет. И становится очень активным к 45-55 годам.

Я удивлен, что все больше врачей функциональной медицины и врачей, занимающихся проблемами старения, не осознают важность тимуса как стимулятора старения. В недавно вышедшем бестселлере известного гарвардского исследователя о долголетии нет упоминания о вилочковой железе, даже в указателе!

По мере ослабления функции тимуса вы становитесь восприимчивыми к распространенным инфекциям, таким как простуда и грипп.Стойкие хронические заболевания с неспецифическими симптомами, такие как синдром хронической усталости, которые не поддаются выздоровлению, являются еще одним признаком недостаточной работы вилочковой железы. Так же происходит медленное заживление ран и другие неспецифические симптомы.

Поскольку не существует классической картины симптомов или лабораторных тестов, указывающих на ослабление вилочковой железы, не существует медицинского диагноза дефицита вилочковой железы, основанного на клинических признаках и симптомах, как при гипотиреозе. Это одна из причин, по которой я написал эту статью: разработать модель дефицита тимуса и способы восстановления функции тимуса.

Но исследователи уверены в одном: размер вилочковой железы влияет на количество Т-клеток в крови. Тимус меньшего размера производит меньше Т-клеток, что приводит к снижению иммунного ответа.

Например, большинство смертей от COVID-19, а также от сезонного гриппа происходит из-за осложнений со стороны дыхательных путей, приводящих к пневмонии, особенно у лиц старше 65 лет. А у людей старше 65 лет онкологические заболевания в одиннадцать раз больше, чем у молодых людей. Вы могли бы сказать, что повышенная восприимчивость к заболеваниям у пожилых людей связана с ослабленным иммунным гомеостазом из-за меньшего размера, недостаточно функционирующего тимуса.

Стратегии восстановления функции тимуса

Когда дело доходит до естественного здоровья, мы игнорируем тимус. Это нужно изменить. Восстановление вилочковой железы необходимо для выживания при инфекциях, предотвращения рака и борьбы с ним, а также для продления здоровья в период старения.

К счастью для нас, европейцы больше уважают здоровую функцию тимуса, чем американцы. В начале своей клинической карьеры я работал с немецкими натуропатами. Я обнаружил, что их клинические навыки и понимание того, как функционирует организм, на десятилетия опережают наши собственные.Например, они научили меня нескольким способам поддержки вилочковой железы и восстановления функции тимуса. Эти методы включали инъекции вилочковой железы, пищевые добавки и лекарственные травы для регенерации вилочковой железы.

Согласно американской философии натуральной медицины, все начинается с диеты и образа жизни. Но даже несмотря на то, что улучшение диеты поддерживает общее состояние здоровья и предотвращает дегенеративные состояния, такие как сердечно-сосудистые заболевания, сама по себе пища не всегда лечит болезнь, не лечит инфекции и не может восстановить вилочковую железу.В этих случаях вашему организму требуются лекарства. Лучшая стратегия — это комплексный подход: здоровый образ жизни и здоровая диета в сочетании с

Дружественная к тимусу диета и образ жизни

Не существует специальных продуктов для оптимальной функции тимуса. Тем не менее, имеет смысл, что здоровая диета на основе растений с высоким содержанием питательных микроэлементов и достаточным количеством белка может поддерживать здоровый иммунитет и продлевать здоровье в период старения.

Кроме того, достаточно спокойного сна, необходимого для хорошо настроенной иммунной сети, включая компетентную функцию тимуса.Прием мелатонина улучшает качество сна и поддерживает иммунитет. Исследования на животных показывают, что мелатонин обращает вспять возрастную инволюцию тимуса и улучшает иммунную функцию селезенки.

Питательные вещества и соединения растений

Цинк играет важную роль в росте и развитии и необходим для здоровой иммунной системы. Дефицит цинка вызывает снижение функции Т-клеток, замедление заживления ран и другие дефекты иммунной системы. [4] Цинк — это терапия первой линии для восстановления вилочковой железы.

Витамин А поддерживает тимус и стимулирует иммунный ответ. Ежедневный прием высоких доз витамина С поддерживает размер и вес тимуса и увеличивает количество Т-клеток. Вам также нужно достаточно селена для иммунитета против вирусов и рака.

Астрагалозид IV представляет собой экстракт традиционной китайской медицины Хуанци ( Астрагал перепончатый ). Традиционно хуанци используется для повышения энергии, повышения выносливости и предотвращения распространенных заболеваний, таких как простуда или грипп, а также для замедления старения.

Астрагал содержит множество биохимически активных соединений, включая полисахариды, флавоноиды и сапонины. Эти соединения повышают активность теломеразы, обладают антиоксидантным, противовоспалительным и иммунорегуляторным действием. Исследования с использованием запатентованного экстракта астрагалозида IV (TA-65) показали, что иммунная система оказывает существенное воздействие на обратный возраст. И TA-65, и дженерик астрагалозида IV доступны в виде пищевых добавок.

Экстракты вилочковой железы

Экстракты желез имеют долгую историю использования в Европе, а также в традиционной китайской медицине.Хотя биологические механизмы того, как они работают в организме, не очень хорошо известны, есть клинические доказательства того, что экстракты тимуса и селезенки уменьшают воспаление, ускоряют заживление ран, помогают устранить вирусы и подавляют раковые клетки. [5]

Thymic Protein A (TPA) — это пероральная пищевая добавка из тимуса теленка, обладающая иммуномодулирующими и противовирусными свойствами. Хотя исследования ограничены, было обнаружено, что TPA поддерживает CD4 + хелперные Т-лимфоциты и устраняет атрофию тимуса, усиливая роль тимуса в программировании Т-клеток.[6]

Коктейль с добавками для иммунной поддержки

Одной инъекции тимуса недостаточно для восстановления тимуса. Лучше всего работает комплексный подход, включающий инъекции живых клеток вилочковой железы и оральных экстрактов. Immuno Caps от Priority One содержат питательные вещества, траву эхинацеи, экстракты органов и полипептидные фракции фермента тимуса. Я считаю, что наряду с экстрактами лекарственных грибов и бета-глюканом он неоценим для предотвращения инфекций. Подобные формулы служат краеугольным камнем для восстановления интегративного иммунитета.

В своей практике я выхожу за рамки основ и разрабатываю индивидуальные рецепты для пациентов, которым необходимо оживить тимус. Вы также можете обнаружить, что индивидуальная дозировка — лучший выбор для вас. Основное правило: чем старше вы становитесь, тем выше потенция и дозировка, необходимая для восстановления функции тимуса.

Увеличьте вашу функцию тимуса

До сих пор я описал естественные способы поддержания и восстановления вашей функции тимуса. Эти способы являются основополагающими и полезными в качестве отправной точки.Следующая информация предназначена для тех, кто хочет максимизировать функцию тимуса для оптимального старения, лечения хронических заболеваний и дополнительной терапии рака. Вам необходимо проконсультироваться с врачом, который назначит вам одно или несколько из этих лекарств.

Инъекции живых клеток тимуса

Так называемая «терапия живыми клетками» — это фармацевтически приготовленные экстракты тимуса и других желез животных для инъекций. Терапевтическая цель — восстановить иммунный гомеостаз, естественное сбалансированное состояние защиты организма от болезней и их предотвращения.

Стандартный курс включает внутримышечные инъекции, которые вводятся ежедневно в течение десяти дней для активации иммунной системы. Комбинация тимуса и клеточной терапии селезенки используется вместе для восстановления иммунной системы. Еженедельные или ежемесячные инъекции могут следовать за начальным курсом. [7]

Европейские лаборатории следуют жестким стандартам производства препаратов живых клеток в Германии и Швейцарии. Они считаются безопасными, и реакции возникают редко. Они не одобрены FDA для использования в США; однако вы можете найти врачей-натуропатов, которые предоставят вам эти методы лечения.

Пептиды тимуса и инъекции гормонов

Пептиды тимуса — фармацевтические препараты, синтезируемые E. coli. Они помогают восстановить и сбалансировать иммунный ответ.

Тималин — синтетическая версия тимулина. Он был впервые выделен из вилочковой железы в 1977 году. Тималин регулирует иммунную функцию, включая снижение воспаления, увеличивает активность Т-клеток и повышает уровень иммуноглобулина А, а также обладает нейропротекторным действием. К 60 годам вилочковая железа почти не производит.Врачи против старения используют комбинации тималина и пептидов шишковидной железы для продления жизни.

Тимозин бета 4 (TB-500) защищает от вирусных инфекций и используется для улучшения регенерации тканей для заживления ран. Он также способствует ремоделированию костей после переломов, в том числе стрессовых переломов позвоночника из-за остеопороза.

Тимозин альфа-1 считается мощным иммунным регулятором. Он поддерживает иммунную функцию против хронических вирусов и грибковых инфекций.

Гормон роста человека (HGH) и инсулиноподобный фактор роста (IGF-1) улучшают функцию клеток тимуса и могут влиять на размер вилочковой железы.Во время старения продукция HGH и IGF-1 снижается, а иммунитет ослабевает. Исследования на животных показывают, что повышение уровня IGF-1 восстанавливает размер и функцию тимуса и может увеличить количество Т-клеток. [8]

Обновлено 26.06.2020 18:20

INSTAGRAM LIVE Q&A

РЕЗЮМЕ

Здоровая, хорошо функционирующая вилочковая железа необходима для защиты от инфекций и предотвращения рака . Он также задает темп старения. В молодости вилочковая железа процветает.По мере взросления поддержание нормального тимуса и предотвращение сжатия желез защищает от рака и вирусных инфекций, таких как грипп и коронавирусы. Хотя цинк является краеугольным веществом для здорового тимуса, дополнительные питательные вещества, экстракты оральных и инъекционных органов, пептиды и гормоны составляют комплексный план регенерации вилочковой железы. Правительства и исследователи тратят так много времени и денег на методы уничтожения вирусов, в том числе нового коронавируса, но большинство из этих усилий терпят неудачу.Вакцинация имеет больше иммунологического смысла, но лучшее решение — поддержание собственного иммунитета. Восстановление иммунного гомеостаза — это незаменимый ключ к продлению здоровья во время старения.

ПРИМЕЧАНИЯ

[1] В 2019 году заслуженный профессор Жак Миллер получил премию Ласкера, одно из высших достижений в медицинских исследованиях, за определение Т- и В-клеток, которые играют критически важную роль в нашей иммунной системе.

[2] CD8 Т-клетки также называют цитотоксическими или супрессорными клетками.

[3] Профиль Т- и В-лимфоцитов и естественных киллерных клеток от LabCorp.

[4] Диапазон LabCorp для цинка в плазме или сыворотке составляет 56–134 мкг / дл. Однако для поддержания оптимального иммунитета во время старения я стремлюсь к желательному нижнему пределу 70 мкг / дл с оптимальным более 85 мкг / дл.

[5] Покупая экстракты желез, обращайте внимание на выращенные на траве, органические растения, предпочтительно выращенные и произведенные в Новой Зеландии.

[6] Тимусный протеин А был исследован и сформулирован Терри Бердсли, доктором философии, выдающимся исследователем тимуса из Медицинского колледжа Бейлора, Калифорнийского университета в Сан-Диего и других ведущих университетов.Я был очень взволнован этим продуктом, когда он впервые стал доступен в конце 1990-х годов. Его используют и одобряют многие ведущие врачи функциональной медицины.

[7] Поищите в Интернете клиники по тимусу в Германии и Швейцарии.

[8] Вы можете проверить уровень гормона роста и IGF-1 в любой крупной медицинской лаборатории. Если низкий, обсудите с врачом заместительную терапию. И HGH, и IGF-1 представляют собой ежедневные инъекции, как и пептиды, которые вводятся под кожу.

ИЗБРАННАЯ БИБЛИОГРАФИЯ

Csaba, G.(2016). Иммуноэндокринный тимус как стимулятор продолжительности жизни. Acta Microbiologica et Immunologica Hungarica , 63 (2), 139–158. https://doi.org/10.1556/030.63.2016.2.1

Haase, H., & Rink, L. (2009). Иммунная система и влияние цинка при старении. Иммунитет и старение , 6 , 1–17. https://doi.org/10.1186/1742-4933-6-9

Харун, Х. С. (2018). Старение вилочковой железы и иммунной системы. Минюст Анатомия и физиология , 5 (2), 178–181.https://doi.org/10.15406/mojap.2018.05.00186

Холландер, Г. А., Кренгер, В., и Блазар, Б. Р. (2010). Новые стратегии для улучшения функции тимуса. Текущее мнение по фармакологии , 10 (4), 443–453. https://doi.org/10.1016/j.coph.2010.04.008

Li, ZX, Zhao, GD, Xiong, W., Linghu, KG, Ma, QS, Cheang, WS, Yu, H., & Ван, Ю. (2019). Иммуномодулирующие эффекты нового целого экстракта ингредиентов из астрагала: комбинированная оценка по химии и фармакологии. Китайская медицина (Великобритания) , 14 (1), 1–10. https://doi.org/10.1186/s13020-019-0234-0

Лю П., Чжао Х. и Луо Ю. (2017). Антивозрастное действие астрагала перепончатого (Хуанци): хорошо известное китайское тонизирующее средство. Старение и болезни , 8 (6), 868–886. https://doi.org/10.14336/AD.2017.0816

Танака, Т., Наразаки, М., и Кишимото, Т. (2014). IL-6 при воспалении, иммунитете и болезнях. Колд-Спринг-Харбор: перспективы в биологии , 6 (10), a016295 – a016295.https://doi.org/10.1101/cshperspect.a016295

Тиан, Ю.-М., Чжан, Г.-Й., и Дай, Ю.-Р. (2003). Мелатонин омолаживает дегенерированный тимус и восстанавливает периферические иммунные функции у старых мышей.

No related posts.