IS — 10

ER —

Как спланировать и провести простой эксперимент на себе, испытание на одном человеке с кандидатами на химиотерапевтические сенолитические препараты — борьба со старением!

В этом длинном посте рассматривается процесс настройки и проведения эксперимента на себе — испытания одного — с кандидатными сенолитическими препаратами, способными удалять некоторую часть стареющих клеток, которые накапливаются с возрастом, вызывая старение и возрастные заболевания.Показатели оцениваются заранее и после этого, чтобы пролить свет на то, сработало это или нет, в смысле достижения некоторой степени омоложения, отмены конкретных показателей возрастного спада.

Схема здесь оптимизирована для простоты, стоимости и возможности проведения эксперимента без особой внешней помощи, а не для максимальной эффективности. Существуют лучшие лекарственные препараты-кандидаты и лучшие показатели, на которых остановились здесь, по крайней мере, с точки зрения вероятной эффективности, меньшего количества побочных эффектов и соответствия поставленной задаче, но они требуют больше работы, больше средств, более сложная логистика , а также помощь лабораторий и врачей.Принимая во внимание эти наложенные на себя ограничения, это действительно означает, что план здесь в конечном итоге сосредоточен на перепрофилированных химиотерапевтических препаратах, которые составляют большинство нынешних кандидатов в сенолитические препараты. Это, в свою очередь, означает, что побочные эффекты и связанные с ними риски для здоровья являются важным фактором.

Цель публикации этого плана не в том, чтобы побудить людей немедленно следовать ему. Если вы уходите, думая, что вам следует сделать именно это и как можно скорее, значит, вы не смогли понять прочитанное.Этот пост предназначен для того, чтобы проиллюстрировать, как следует относиться к экспериментам над собой в этой области: установите ограничения; определить вероятные подходы; проведите исследование, чтобы заполнить необходимые детали; составить план действий; возможно, опробуйте некоторые его части заранее, например, части измерения, поскольку они никогда не работают должным образом; и, что наиболее важно, определить, стоит ли на самом деле опробовать весь план, учитывая все, что известно о сопутствующих рисках. В конечном итоге это должен быть личный выбор.

Содержание

Зачем экспериментировать с сенолитиками?

Сенолитические методы лечения — это методы, избирательно разрушающие стареющие клетки. Накопление стареющих клеток — одна из причин старения. Таким образом, очевидно, что одна надежда состоит в том, чтобы получить личную пользу от такой терапии раньше, чем это могло бы быть в противном случае, уравновешивая это с некоторой неизвестной степенью риска неудачи или вреда. Первые испытания на людях, те, которые устанавливают цифры для этого риска, потребуют еще нескольких лет, чтобы прийти к убедительным выводам, и еще несколько лет потребуются, чтобы медицинское сообщество захотело прописывать сенолитики в целом.Кроме того, почти все эти испытания будут проверять только один кандидат на терапию, и имеющиеся на сегодняшний день данные на мышах свидетельствуют о том, что разные сенолитики с разными механизмами тканеспецифичны в своем влиянии на стареющие клетки. Несколько разных соединений могут быть более эффективными, чем одно, но это не будет обнаружено в ходе формального процесса испытаний. Наконец, хорошо проведенные эксперименты на себе, проведенные рядом людей и результаты которых публикуются, могут помочь направить направление дальнейших формальных исследований.

Все эти причины должны быть сбалансированы с трезвой оценкой рисков, связанных с получением и использованием фармацевтических соединений, и принятием личной ответственности за последствия, если кто-то решит пойти на такой риск.

Более подробно

Здесь необходимо учитывать две области личной ответственности. Во-первых, это прием химиотерапевтических препаратов с известными побочными эффектами. Следует прочитать соответствующие статьи об их эффектах, побочных эффектах и ​​дозировках и принять индивидуальное решение о риске и уровне комфорта на основе этой информации.Это верно для любого фармацевтического препарата, одобренного для использования или нет. Не доверяйте другим мнениям, которые вы можете прочитать в Интернете: обратитесь к первоисточникам, научным статьям и прочтите их. Поймите, что там, где первичные данные немногочисленны, они вполне могут быть неправильными или неполными, что может оказаться вредным. Также следует понимать, что физиология пожилых людей может быть хрупкой и уязвимой к побочным эффектам определенных химиотерапевтических препаратов, чего не происходит у молодых людей и которые не охвачены исследованиями; Фармакокинетические исследования, необходимые для установления побочных эффектов и переносимости, обычно не проводятся на очень старых людях, и в большинстве исследований рака есть участники, которые почти полностью относятся к возрастной группе 50-80 лет.

Во-вторых, получение и использование фармацевтических препаратов описанным здесь образом является незаконным: выбор в пользу этого был бы вопросом гражданского неповиновения, как и в случае с любым, кто получает лекарства вне установленной национальной системы рецептов и правил. Людей в США редко просят делать это для личного пользования — подумайте о легионах тех, кто покупает лекарства за границей по соображениям стоимости, несмотря на то, что это незаконно, — но «редко» не означает «никогда».»Если вы считаете, что закон несправедлив, то всеми средствами выступите против него, но примите тот факт, что это влечет за собой очевидный риск ареста, осуждения, потери средств к существованию и всех других способов, которыми винтики современного общества сокрушают те, кто не согласен с власть имущими.

Наконец, сенолитики — быстро меняющаяся область. Этот пост довольно быстро устареет в деталях, касающихся лекарственных препаратов-кандидатов, по мере появления новых знаний и новых подходов к лечению.Тем не менее, общий план должен быть полезной основой для разработки новых экспериментов на себе, включающих более поздние и, надеюсь, более совершенные соединения, а также тесты, требующие дополнительных логистических усилий.

Выбор кандидатов в сенолитические препараты

Критериями выбора кандидатов в сенолитические препараты для целей данного обзора являются: (а) его следует принимать перорально, а не путем инъекции, поскольку материально-техническое обеспечение сбора материалов и проведения инъекций значительно сложнее; (б) он должен был продемонстрировать сенолитические эффекты в исследованиях на животных, а не только в исследованиях на клетках, поскольку в фармацевтических разработках слишком много неудач для перехода от клетки к мыши; (c) должно быть достаточно данных о людях для определения эффектов и побочных эффектов используемых доз.Фактически, чем больше человеческих данных, тем лучше. Поиск списка сенолитиков и их оценка по этим критериям включает исследование: копайтесь в PubMed в поисках сенолитических исследований и обзорных статей, а затем просматривайте цепочки ссылок, чтобы найти другие статьи. Внимательно проверьте величину и другие детали результатов, заявленных в исследованиях на животных: одни сенолитики лучше других. Вооружившись именами кандидатов в лекарства, поищите исследования дозировки и воздействия на рак и другие испытания как на мышах, так и на людях.Не все статьи находятся в открытом доступе. Там, где это не так, лучший способ получить копию — воспользоваться усилиями еретиков авторского права Sci-Hub.

В настоящее время вышеперечисленные критерии сужают область до нескольких перепрофилированных химиотерапевтических средств, один из которых, как было показано, действует синергетически с флавоноидом кверцетином. Это: (а) дазатиниб в комбинации с кверцетином, хотя данные показывают, что не стоит пробовать ни один из них самостоятельно, (б) навитоклакс / ABT-263 и (в) альвеспимицин / 17-DMAG.Однако у Navitoclax есть побочные эффекты, которые достаточно распространены и достаточно серьезны, чтобы их можно было избежать; он вызывает потерю тромбоцитов в крови до такой степени, что вызывает заметные медицинские последствия, и это произошло примерно у половины участников испытаний рака.

Существует также Venetoclax / ABT-199, который следует рассмотреть, однако, это модифицированная форма navitoclax, предназначенная (и показанная) для уменьшения наихудших из его разрушающих тромбоциты побочных эффектов, но отсутствуют данные о сенолитических эффектах на животных. Навитоклакс и венетоклакс являются ингибиторами семейства BCL-2, действующими примерно по одному и тому же механизму, а другой член этого семейства фармацевтических препаратов, ABT-737, обладает сенолитическим действием.Таким образом, хотя у Venetoclax нет данных о сенолитических эффектах на мышах, на первый взгляд имеет смысл включить его в тест: компромисс заключается в потере некоторых неприятных побочных эффектов и получении неопределенности в отношении того, имеют ли сенолитические эффекты. перенесет. Несколько лет назад вышла очень полезная статья, в которой описывается взаимосвязь между этими ингибиторами семейства BCL-2 и которая хорошо объясняет, почему венетоклакс является предпочтительной альтернативой навитоклаксу, по крайней мере, для сообщества исследователей рака.

Из других соединений, которые мы могли бы рассмотреть, A1331852, A1155463, пиперлонгумин и физетин исключены из-за отсутствия опубликованных данных о сенолитических эффектах на животных. FOXO4-DRI исключен из-за того, что он вводится путем инъекций и из-за отсутствия каких-либо данных для человека о дозировке или побочных эффектах — хотя в принципе, он должен быть лучшим из всех подобных лекарств, обнаруженных до сих пор, если данные о животных переносятся на человека. тесты. ABT-737 исключен для инъекций — в отличие от других ингибиторов семейства BCL-2, он на самом деле не взаимодействует эффективно с биохимией млекопитающих при проглатывании.

Установление дозировок

Единственный точный способ установить дозировку фармацевтического препарата для достижения заданного эффекта — это провести множество тестов на людях. Тестирование на мышах может только определить вероятную отправную точку для экспериментов по определению дозы для человека, но способ, которым вы рассчитываете эту отправную точку, довольно хорошо установлен для большинства случаев. Этот установленный алгоритм по существу одинаков для большинства принимаемых внутрь и внутривенно (или внутрибрюшинно для мелких животных) лекарств, но не обязательно применим к другим путям инъекций.Взаимосвязь между различными формами инъекций, дозировками и эффектами на самом деле является сложной и на удивление плохо обозначенной темой, и здесь мы отложим ее в сторону. Некоторые соединения — как всегда — являются исключениями из правил, и единственный способ, которым ученые обнаруживают, что какое-либо конкретное соединение является исключением, — это тестирование в различных дозах на различных видах.

Учитывая это, обсуждение здесь должно применяться только к пероральным лекарствам, так как это намеренно ограниченный объем этого сообщения.Далее, рассматривая фармацевтическую дозировку, важно подчеркнуть, что больше — не лучше; К этому нельзя подходить так, как люди склонны наивно подходить к (чрезмерному) использованию пищевых добавок. Основная цель, если вы экспериментируете с собой, состоит в том, чтобы принимать как можно меньше любого химиотерапевтического, сенолитического соединения, поскольку все они токсичны в любой значимой дозе. Я призываю внимательно прочитать статьи, в которых описаны побочные эффекты у пациентов при химиотерапевтических дозах и продолжительности лечения, а также исследования, показывающие, что агрессивная химиотерапия вызывает более высокую, а не более низкую нагрузку стареющих клеток.О том, что от дозы образуется яд — это древняя пословица, но не менее верная сегодня.

Шаги для определения подходящей отправной точки для испытания на людях перорального сенолитического фармацевтического препарата следующие: сначала прочтите исследования на мышах для рассматриваемого сенолитического соединения, чтобы узнать, сколько было дано мышам и как долго. Дозы для большинства представляющих интерес фармацевтических препаратов обычно выражаются в мг / кг. Во-вторых, примените стандартный множитель, чтобы масштабировать это до человеческих доз, которые вы можете найти в документе открытого доступа «Простое практическое руководство по преобразованию доз между животными и людьми».Не умножайте просто на вес человека в килограммах — это не так. Относительная площадь поверхности двух видов является более важным параметром масштабирования. Прочтите статью и ссылки на нее, чтобы понять, почему это так. Опять же, обратите внимание, что результат является лишь приблизительным предположением относительно начальной точки размера дозы. Однако продолжительность лечения имеет прямое значение. В течение периода лечения начните с того же количества доз, интервалов между дозами и продолжительности, которые имеют место в сенолитических исследованиях на мышах.

Если данных недостаточно, чтобы сделать больше, чем предположить дозу, то это хороший показатель, чтобы списать это конкретное соединение. Подождите, пока появятся дополнительные данные, или поищите другие соединения с более точными существующими данными.

Дазатиниб и кверцетин

В случае комбинации дастиниба и кверцетина в исследовании сенолитических эффектов на мышах использовалась разовая доза дазатиниба 5 мг / кг плюс 50 мг / кг кверцетина. Для человека весом 60 кг это составляет чуть менее 25 мг дазатиниба и 250 мг кверцетина.Для сравнения, можно найти исследования дазатиниба в качестве химиотерапевтического средства на мышах, которые использовали 50 мг / кг в день в течение нескольких дней, чтобы оценить его способность убивать раковые клетки. В очень полезном исследовании эффектов дозы и продолжительности действия дазатиниба на людях использовалась доза 100 мг на добровольцах, и вы можете найти другие испытания дазатиниба в качестве лечения рака в этой дозе. Кверцетин — это хорошо зарекомендовавшая себя и широко продаваемая добавка, и, судя по данным токсикологии, было бы настоящей проблемой потреблять его в достаточном количестве, чтобы вызвать какие-либо побочные эффекты, не говоря уже о значительных.

Другой способ думать о дозировке — стремиться к достижению той же концентрации фармацевтического препарата в крови, которая использовалась в исследованиях клеточных культур или наблюдалась в исследованиях на мышах. Для этого вам потребуются существующие данные о людях о том, как доза соотносится с концентрацией в крови или тканях. Вышеупомянутое исследование сенолитических мышей и полезное исследование на людях предоставили достаточное количество, чтобы сделать оценку. В разделе культуры клеток исследования на мышах эффективная концентрация 100-200 нМ / л (наномоль на литр) — большее, чем это, не дает большего преимущества.Учитывая молекулярную массу дазатиниба, можно преобразовать наблюдаемую концентрацию в крови 104,5 нг / мл (нанограмм на миллилитр) в исследовании на людях в дозу 100 мг, чтобы получить примерно 200 нМ / л. Почему не все используют одни и те же единицы? Что ж, мы бы не хотели, чтобы это было слишком просто. Исследование на людях также предоставляет результаты для дозы 180 мг, если вы хотите попробовать увеличить или уменьшить дозу, чтобы оценить дозу, необходимую для достижения различных концентраций.

Таким образом, с помощью одного метода разовая доза для человека весом 60 кг составляет 25 мг дазатиниба и 250 мг кверцетина.При использовании другого метода разовая доза составляет примерно 75-100 мг дазатиниба и 750-1000 мг кверцетина, при условии, что мы увеличиваем дозу кверцетина, чтобы соответствовать дазатинибу, и в зависимости от того, где мы нацелены на 100-200 нМ / л. концентрация. Вторая доза находится на экспериментальном уровне химиотерапии, но это однократная доза, а не ежедневная доза в течение недель или месяцев, поэтому воздействие, соответственно, будет более ограниченным. Вы можете посмотреть исследование однократной дозы, чтобы узнать о побочных эффектах этого уровня дозировки. Помните, что нет никаких доказательств того, что дозирование с сенолитическим лечением, таким как комбинация дазатиниба и кверцетина, часто дает лучший результат, чем дозирование один раз в несколько лет: лечение убивает стареющие клетки, которые оно способно убить, и до тех пор, пока их не станет больше. ячеек создается в значительном количестве, тогда дальнейшее лечение, скорее всего, не принесет никакой пользы.Очевидно, есть сенолитики-самоэкспериментаторы, регулярно принимающие дазатиниб; Думаю, это свидетельствует о плохом понимании ситуации и, вероятно, вредно.

Venetoclax

Поскольку нет опубликованных исследований сенолитического препарата венетоклакс, приближение к какой-то приблизительной дозе для человека для этой цели требует аналогий и обоснованных предположений. Подход состоит в том, чтобы сравнить исследования рака с навитоклаксом и венетоклаксом, которых много, а затем уменьшить дозу, полученную при исследовании рака венетоклакс, в соответствии с разницей между дозами навитоклакса при исследовании рака и сенолитика.Это далеко от идеала, но я включаю здесь это обсуждение, чтобы точно указать, почему следует выбирать фармацевтические препараты только с данными о сенолитических свойствах животных и человека; как только какие-либо из этих данных отсутствуют, приходится проводить слишком много проб, ошибок и догадок. Гораздо лучше подождать, чем окунуться в неизвестность, учитывая, что в ближайшие годы появятся новые данные и лучшие альтернативные сенолитики.

Во-первых, сенолитическая доза навитоклакса для мышей из исследования 2015 года составляет 50 мг / кг в день в течение двух периодов по 7 дней с интервалом в 14 дней — во всех этих данных вы довольно быстро заметите, что ингибиторы семейства BCL-2 неблагоприятно сравнить с дазатинибом с точки зрения необходимого количества и продолжительности лечения.Это соответствует дозе около 250 мг для человека в 60 кг.

Хорошим местом для начала исследования сравнительных дозировок венетоклакса и навитоклакса является итоговый документ 2015 года «ABT-199 (венетоклакс) и ингибиторы BCL-2 в клинической разработке». Отсюда и ссылки, химиотерапевтическая доза навитоклакса для человека стабилизировалась где-то в диапазоне 200-300 мг в день в течение 14-21 дня, прежде чем от него отказались в пользу других средств, причем верхний предел этого диапазона доз приводил к вышеупомянутые уродливые побочные эффекты, связанные с потерей тромбоцитов.С другой стороны, дозировка venetoclax для испытаний рака на людях является повсеместной: дозы варьируются от 200 до 1200 мг ежедневно в течение периода от нескольких недель до месяца, причем доза вводится циклически, иногда сложным образом. Чтобы не усложнять задачу, можно сравнить исследования навитоклакса и венетоклакса с исследованиями хронического лимфолейкоза, поскольку они очень похожи. Для навитоклакса проверенные дозы варьировались от 100 мг до 300 мг — по сути, то же самое, что и дозировка сенолитика.Для Venetoclax проверенные дозы составляли от 200 мг до 1200 мг. В обоих случаях это были ежедневные дозы, принимаемые в течение недели или более.

Таким образом, если бы кто-то был вынужден поставить булавку на карту на основе этих чисел, сенолитическая доза венетоклакса для человека, вероятно, была бы в диапазоне 400-600 мг / день, каждый день в течение недели. Обратите внимание, что это строго относится к химиотерапии с территорией побочных эффектов, и нет никаких прямых подтверждающих доказательств эффективности у млекопитающих вообще. Все сказано и сделано, грубая обратная оценка конверта дает результат, который выглядит очень непривлекательным, учитывая, что мы ожидаем лучших вариантов в будущем.

Альвеспимицин

Альвеспимицин является ингибитором HSP90, и этот класс фармацевтических препаратов может вызывать сенолитические эффекты за счет менее прямого ингибирования семейства BCL-2. Конечно, эффекты и побочные эффекты во многом схожи с эффектами навитоклакса и венетоклакса. При исследовании этого соединения следует отметить, что оно используется как в инъекционной, так и в пероральной формах, поэтому нужно быть осторожным, работая только с документами, которые охватывают режим пероральной доставки, по крайней мере, в данном контексте.В сенолитическом исследовании на мышах использовалась пероральная доза 10 мг / кг, которую вводили 3 раза через день. Это масштабируется примерно до 50 мг с тем же графиком дозировки для человека весом 60 кг.

Для сравнения, глядя на исследование рака на мышах, исследователи использовали дозировки в 5-15 мг / кг с различными ежедневными и прерывистыми графиками. В исследовании рака человека также использовался широкий диапазон доз, и это хороший ресурс, если вы хотите узнать о потенциальных побочных эффектах.Основываясь на своих данных, авторы рекомендовали либо 40 мг через день, либо 20 мг ежедневно в течение четырех недель каждые шесть недель для последующего исследования.

Исходя из этих цифр, лечение сенолитом человека тремя дозами по 50 мг через день снова звучит как что-то, что поворачивает на территорию полномасштабной химиотерапии, но не в такой степени, как Venetoclax, описанный выше. Любой, кто задумывается об этом, должен будет принять собственное решение о риске, поскольку информации просто недостаточно, чтобы разумно говорить о риске и побочных эффектах, возникающих в результате гораздо более короткого воздействия, чем это проводилось в исследованиях рака у человека.

Используйте небольшие тестовые дозы перед любым исследованием

Почти все исследования химиотерапевтических препаратов начинаются с низких доз, составляющих десятую часть ожидаемой исследуемой дозы. Практически во всех исследованиях сообщается о паре пациентов, у которых наблюдается достаточная реакция на химиотерапевтическое средство в этих низких дозах, чтобы бросить его или потребовать корректировки протокола. Если вы рискуете использовать химиотерапевтические препараты для сенолитических целей, даже разовые дозы или дозы в течение короткого времени, все же важно сначала протестировать низкую дозу на уровне, равном одной десятой от желаемого, чтобы гарантировать отсутствие побочных реакций.Как и в случае со всеми остальными соображениями здесь, если вы попробуете это, вы полностью несете ответственность за выявление, понимание и управление сопутствующими рисками.

Проверьте все вышеперечисленное

Предположите, что все, что написано где-либо, кроме первичных материалов, может быть неверным или вводящим в заблуждение. Не верьте мне на слово ни в одной из приведенных выше сведений; ищите первоисточники, подсчитывайте и судите сами. Глупо ли экспериментировать с химиотерапевтическими средствами вместо того, чтобы ждать более качественной информации от испытаний на людях или появления какой-либо лучшей формы лечения? Только вы можете ответить на этот вопрос, и только вы несете ответственность за любые последствия, возникшие в результате ответа.

Получение сенолитических лекарственных средств

Для людей, не имеющих подходящих связей, самый простой способ получить фармацевтические препараты — это заказать их у производителей в Китае или других странах за рубежом. Как отмечалось в начале этого поста, это незаконно — это было бы актом гражданского неповиновения, потому что законы, касающиеся этих вопросов, несправедливы, хотя и применяются очень неравномерно. Многие люди регулярно заказывают лекарственные препараты из-за границы, по рецепту и без него, по разным экономическим и медицинским причинам, и все это является незаконным.Обычным худшим результатом для индивидуальных пользователей является периодическая конфискация товаров таможней, хотя в США ответственность за это исполнение фактически несет FDA, а не таможенные органы. Однако с людьми могут и случаться худшие вещи, даже если правоприменительные меры обычно нацелены на более крупную рыбу, на тех, кто хочет перепродавать значительные количества лекарств на сером рынке или кто занимается торговлей контролируемыми веществами. В Интернете по этой теме написано довольно много, и я рекомендую читать по этой теме.

Открыть деловой почтовый ящик

Потребуется почтовый ящик, способный принимать посылки с обязательной подписью от внутренних служб доставки, таких как DHL и FedEx. Хорошая идея — указать название компании и адрес. Не используйте адрес проживания.

Используйте Alibaba для поиска производителей

Alibaba — это основное средство для покупателей, не говорящих на китайском языке, для связи с китайскими производителями. Компания проделала большую работу по внедрению автоматического перевода, снижению рисков, созданию конкурентного рынка и повышению репутации компаний, но сейчас это довольно сложный в использовании сайт.Это культура сама по себе, со своими терминами и сокращениями. Существует множество руководств по Alibaba, которые, безусловно, помогают, даже если они в первую очередь нацелены на розничных продавцов, ищущих производителя, но многие из конкретных деталей быстро устаревают. В частности, международные платежные системы Alibaba всегда являются движущейся мишенью: названия, пользовательские интерфейсы и ограничения в этом году не будут такими же, как названия, пользовательские интерфейсы и ограничения в следующем году.

Начните с поиска на Alibaba поставщиков интересующих сенолитических фармацевтических препаратов.В Китае есть множество торговых посредников и компаний-производителей биотехнологических продуктов для любой, даже немного охарактеризованной фармацевтической продукции или фармацевтических препаратов-кандидатов. Отфильтруйте список для небольших компаний, так как более крупные компании будут склонны (а) игнорировать отдельных покупателей в поисках небольших количеств соединения по всем очевидным экономическим причинам, и (б) в любом случае требовать доказательства всего необходимого импорта. лицензии и оформление документов. Присмотритесь к ценам — они могут различаться на порядок, и совсем не обязательно, что очень низкие цены указывают на какое-то мошенничество.Некоторые предметы действительно очень дешевы, чтобы получить их через некоторые китайские источники.

Многие производители заявляют, что им требуется большой (часто до смешного) минимальный заказ; это можно игнорировать. Общайтесь только с золотым значком, поставщиками торговых гарантий с репутацией несколько лет и более и с достойной скоростью отклика. Убедитесь, что компании существуют за пределами Alibaba, хотя для многих вполне надежных китайских предприятий часто существуют значительные различия между витринами на Alibaba, присутствием в реальном мире, а также именами владельцев и банковских счетов.Используйте здравый смысл; с практикой станет легче.

Закупка и доставка через Alibaba

Зная имена нескольких поставщиков, обратитесь через систему обмена сообщениями Alibaba и попросите расценки на определенное количество рассматриваемого сенолитического фармацевтического препарата. Купите вдвое больше, чем вы думаете, что вам нужно, так как часть из них будет использоваться для проверки идентичности и качества партии компаундов, и купите столько, по крайней мере, у двух разных поставщиков, находящихся в сильно разнесенных регионах.Оплата, скорее всего, будет осуществляться посредством банковского перевода, который в Alibaba называется телеграфным переводом (TT). Alibaba предлагает ряд довольно удобных внутренних способов оплаты, которые могут быть подключены к кредитной карте или банковскому счету, но неизвестно, будут ли эти методы разрешены для той или иной транзакции. Запрашивать у продавца проформу счета-фактуры (PI), затем идти в банк, чтобы отправить перевод, и доверять их честности — этого достаточно для недорогих транзакций.Он должен отлично работать при работе с компаниями, у которых есть давний золотой значок.

Чтобы включить доставку с отслеживанием через таких перевозчиков, как DHL, предпочтительный способ доставки для китайских поставщиков, осуществляющих доставку в США или Европу, вам необходимо указать адрес доставки, адрес электронной почты и номер телефона. Эти сведения попадут в базы данных спама, если вы имеете дело с более чем несколькими компаниями, и, конечно же, будут проданы самой Alibaba.Ожидайте роста спама после общения с поставщиками через Alibaba, поэтому подумайте об использовании одноразовых учетных данных, где это возможно.

Китайские производители, работающие на Alibaba, знакомы с международной практикой доставки, а небольшие компании по собственной инициативе будут применять любое описание к упаковке, которая, скорее всего, пройдет таможню. Поскольку заявленные фармацевтические препараты могут быть изъяты и конфискованы, описание не будет включать фармацевтические препараты.Это так же мотивировано отношениями с таможней со стороны Китая, как и попыткой проталкивать дела мимо властей США; это снова форма широко распространенного гражданского неповиновения, которое отражает всеобщее пренебрежение мелкими законами и регуляторами, которые действуют как препятствия для полезной деятельности.

Кверцетин — это добавка, купите в магазине

Кверцетин продают в любом специализированном магазине витаминов, или, в худшем случае, его можно заказать онлайн в любом уважаемом розничном магазине.

Хранение сенолитиков

Дазатиниб, венетоклакс и аналогичные соединения производятся в виде довольно устойчивых порошков, а затем из них формируются таблетки, которые затем продаются как лекарства.В виде порошка или таблеток поместите их в герметичные контейнеры в холодильник, и они будут храниться в течение нескольких лет; конкретные рекомендации по хранению достаточно легко найти в Интернете. То же самое и с кверцетином. Это одно из больших преимуществ большинства принимаемых внутрь фармацевтических препаратов по сравнению с инъекционными фармацевтическими препаратами; они сравнительно неприхотливы, стабильны и долговечны. Это, в свою очередь, означает меньше логистического планирования и усилий.

Проверка приобретенных сенолитиков

Возможно, был заказан сенолитический состав, но это не значит, что то, что появляется у двери, является либо правильным невзрачным порошком, либо без примесей, либо иным образом хорошего качества.Даже если вы не заказываете продукцию у удаленных, нечастых поставщиков, регулярное тестирование партий является хорошей практикой в ​​любой отрасли. Как определить, соответствует ли соединение тому, о чем написано? Проведите соединение через процесс жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии и сравните результаты со стандартными данными для образца высокой чистоты этого соединения. Или, скорее, заплатите за это небольшой лабораторной компании.

Получите необходимое оборудование

Поскольку этот процесс будет включать взвешивание, разделение и транспортировку порошков в миллиграммах, потребуется несколько предметов: шпатели или совки для небольших количеств вещества; надежная ювелирная шкала типа Gemini-20; герметичные флаконы; небольшие сумки на молнии; этикетки; и отгрузочные и упаковочные материалы.Все это легко купить в Интернете. Рекомендуемый протокол доставки — тройная упаковка: флакон с этикеткой, помещенный в пакет с застежкой-молнией и скотч, а затем заключенный в мягкий конверт.

Используйте Science Exchange для поиска лабораторных компаний

Science Exchange — это довольно надежный способ определить поставщиков конкретных лабораторных услуг, запросить расценки и произвести платежи. Здесь снова выберите небольшую лабораторную компанию для работы после поиска услуг ЖХ-МС (жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии).Крупные компании захотят, чтобы все шаблонные регистрации и юридические процедуры были расставлены точками и пересечены, и, как правило, с ними также трудно справиться большинством других способов. Компании, зарегистрированные в Science Exchange, в большинстве случаев не предоставляют свои расценки без обсуждения, но чуть более 100 долларов за образец — это справедливая цена для ЖХ-МС для проверки идентичности и чистоты соединения.

Работа с компанией по организации услуги

Процесс запроса, предложения, принятия и оплаты управляется через веб-сайт Science Exchange, а вопросы и ответы размещаются на доске обсуждений по заданию.Обязательно спрашивайте, есть ли у вас вопросы; большинство провайдеров с радостью ответят на вопросы тех, кто менее знаком с используемыми технологиями. Поставщики услуг, как правило, хотят иметь описание соединений, подлежащих тестированию, и их стандартные листы данных из соображений передовой практики и безопасности. Достаточно хорошо дать название признанным фармацевтическим препаратам, поскольку таблицы данных, профили масс-спектрометрии и другая подробная информация находятся в свободном доступе в Интернете из таких баз данных, как DrugBank.

Отправка образцов

Отмерьте 5 мг или около того из каждого отдельного заказа в качестве отдельного образца, тщательно промаркируйте его, убедитесь, что у вас есть запись, связывающая этикетку с образцом с конкретным поставщиком, и упакуйте его. Больше в образце лучше, чем меньше, так как может потребоваться несколько попыток, чтобы получить хороший результат на используемых машинах, но для каждой попытки действительно требуется очень небольшое количество соединения. Отправьте образец через службу доставки, например DHL, UPS или FedEx.Некоторые сервисные компании ЖХ-МС могут предоставить инструкции или рекомендации по транспортировке. Обычно это какие-то разновидности здравого смысла: добавить к посылке описание и счет; укажите идентификатор заказа, отправителя и получателя; четкая маркировка контейнеров для проб; и защитная упаковка с тремя слоями упаковки; и так далее.

Изучите результаты

После запуска процесса ЖХ-МС лабораторная компания должна предоставить краткое описание того, действительно ли соединение является правильным, и цифры для оценки чистоты.Также предоставляются масс-спектры, которые можно сравнить со стандартными спектрами для соединения, которые можно найти в DrugBank или других источниках в Интернете.

Логистика приема порошков

Чтобы соответствовать способу приема проглоченных соединений в большинстве исследований, в форме таблеток, вероятно, лучше всего приготовить капсулы для таблеток, а не просто, например, взять порцию порошка в воде или завернуть в хлеб. С этим довольно легко справиться, учитывая уже имеющиеся инструменты для измерения небольших образцов порошка.Специализированные магазины витаминов и ряд других продавцов продают пустые желатиновые капсулы для энтузиастов пищевых добавок, и здесь они прекрасно подойдут. Рассыпка порошка в капсулы — занятие непростое, и с возрастом оно только усугубляется; Я бы посоветовал попробовать это с мукой, если вы еще этого не делали. Это намного сложнее, чем можно было подумать. К счастью, есть множество простых и недорогих инструментов, которые помогут в этом; ссылки и видеогиды легко найти, выполнив поиск в Интернете.По крайней мере, если у вас нет трех рук, необходим лоток для капсул, и я бы порекомендовал какую-нибудь небольшую воронку для порошка.

Установление тестов и мер

К сожалению, не существует установленного, проверенного и полезного теста, который мог бы напрямую оценить уровень стареющих клеток у человека или биопсии человека. Можно использовать иммуногистохимию для оценки клеточной чувствительности в образцах тканей, что является стандартным подходом в исследованиях на животных, но, похоже, никто еще не подтвердил это на людях, учитывая биопсии, взятые у живого человека.Поскольку стареющие клетки временно образуются в результате ранения, вполне возможно, что все, что начинается с биопсии, окажется бесполезным в качестве меры сравнения до и после сенолитических испытаний — измеренные уровни могут не иметь никакого сходства с нормальными уровнями в отсутствие ранить.

Без прямых измерений мы должны прибегнуть к косвенным оценкам пагубного воздействия стареющих клеток. Целью здесь является набор тестов, которые каждый может провести без необходимости привлекать врача, так как это всегда требует значительных затрат времени и средств.Поскольку нас действительно интересует только идентификация значительных и надежных эффектов в результате вмешательства, мы можем с правдоподобием ожидать, что будет полезен набор более дешевых и простых мер, которые, как известно, коррелируют с возрастом. После того, как этот холм пройден, решите, идти или нет дальше — не откусывайте больше, чем легко проглотить для первого выхода.

Из более раннего исследования вероятных тестов я выбрал следующие пункты на основе вероятной связи с действиями стареющих клеток, разумной стоимости и усилий, а также способности проводить тест без участия врача.Обратите внимание, что это действительно исключает, чтобы выбрать один пример, интересное и актуальное исследование функции почек и печени, поскольку оно должно быть выполнено с помощью методов радиоактивных индикаторов в ядерной медицине для получения достойных результатов. Таким образом, приведенные ниже тесты полностью сосредоточены на (а) сердечно-сосудистой системе, особенно на измерениях, на которые влияет жесткость сосудов, и (б) воспалительных и других маркерах в кровотоке:

Показатели здоровья сердечно-сосудистой системы в этом списке — это те, на которые влияют изменения эластичности или функциональной способности кровеносных сосудов, которые, как ожидается, в некоторой степени произойдут после любой омолаживающей терапии, направленной на стареющие клетки, хроническое воспаление или другие факторы, которые укрепляют кровеносные сосуды, такие как кальцификация или перекрестное сшивание.Положительное изменение средних значений по большинству этих показателей достижимо, если на физическую подготовку затрачивается значительное время и усилия, поэтому изменение показателей за короткий период времени в результате лечения должно быть интересной точкой данных.

Bloodwork

Существуют онлайн-сервисы, такие как WellnessFX, где можно заказать анализ крови, а на следующий день отправиться на его выполнение в одну из широко доступных компаний по оказанию клинических услуг.Из набора тестовых пакетов, предлагаемых WellnessFX, Baseline, вероятно, все, что нужно для текущих целей. Но присмотритесь к магазинам; это не единственный провайдер.

Частота пульса и артериальное давление в состоянии покоя

Простой, но надежный инструмент, такой как Omron 10, — это все, что вам нужно для измерения пульса и артериального давления. Здесь стоит отметить несколько общих принципов сердечно-сосудистых мероприятий. Во-первых, чем дальше от центра тела проводится измерение, тем оно менее надежно — тем больше на него влияет любое количество обстоятельств, таких как положение, настроение, стресс, время суток и т. Д.Устройства для пальцев удобны, но далеко не так полезны, как что-то вроде Omron 10, которое использует давление на плечо. Во-вторых, все вышеупомянутые позиции также влияют на все показатели сердечно-сосудистой системы, поэтому, когда вы создаете базовый уровень или измеряете изменения по сравнению с этим базовым уровнем, выполняйте каждое измерение в одном и том же положении, в одно и то же время дня и выполняйте несколько измерений. в течение недели, чтобы получить более точное представление о состоянии вашей физиологии. Omron 10 надежен: он просто работает и кажется довольно надежным.

Вариабельность сердечного ритма

Удивительно, но немногие из многочисленных потребительских инструментов для измерения вариабельности сердечного ритма на самом деле предоставляют базовые значения, используемые в исследовательских работах, а не некоторую форму совокупной оценки, полученной поставщиком; первое необходимо для любого серьезного тестирования, а второе бесполезно. Будьте осторожны с покупателем и внимательно читайте отзывы. В качестве альтернативы потребительским товарам некоторыми регулируемыми медицинскими устройствами довольно легко управлять, но удачи в навигации по системе, чтобы получить его.Самый простой способ — купить подержанное медицинское оборудование на одной из основных торговых площадок, открытых для реселлеров, но это требует значительных затрат времени и усилий, что возвращается к правилу о простоте с самого начала.

После некоторого чтения по теме я остановился на комбинации устройства Polar h20 в сочетании с Android-приложением SelfLoops HRV. Я также попробовал приложение EliteHRV. Несмотря на множество рекомендаций по оборудованию Polar, я не смог убедить ни одну установку производить разумные числа для данных вариабельности сердечного ритма: все, что я получил в ходе все более тщательного и контролируемого тестирования, было очень зашумленным набором явно нереалистичных результатов, далеких от значений, указанных в документах. по теме.Тем не менее, многие люди в количественном самооценке заявляют, что эти системы работают достаточно хорошо, поэтому, возможно, другим повезет больше, чем мне. Воспринимайте мой опыт как предостережение и сравнивайте данные с данными из литературы, прежде чем вкладывать много времени. в измерении.

Скорость импульсной волны

Что касается скорости пульсовой волны, то выбор потребительских инструментов значительно более ограничен. Опять же, внимательно отметьте, будет ли устройство и соответствующее приложение предоставлять фактические базовые данные, используемые в исследовательских работах, а не выдуманный совокупный рейтинг поставщиков.Мне пришлось попробовать пальцевое устройство iHeart, которое было выбрано как более надежное и простое в использовании, чем линейка весов, измеряющих скорость пульсовой волны. Многочисленные источники предполагают, что достаточно надежные данные о скорости пульсовой волны от неинвазивных устройств будут получены только путем измерений в аорте и других местах ядра или при использовании более сложных регулируемых медицинских устройств, которые используют манжеты и датчики в нескольких местах на теле. .

Тем не менее, менее надежные данные можно до некоторой степени сгладить, взяв среднее значение измерений с течением времени и согласовав положение, палец, используемый для кончика пальца, время суток и т. Д. При проведении измерения.Достаточно легко продемонстрировать степень, в которой эти элементы могут изменять выходной сигнал — просто используйте устройство кончика пальца на разных пальцах по очереди и наблюдайте за результатом. Все это компромисс. Хороший подход — принять две меры одновременно, используя один и тот же палец левой и правой руки, чтобы продемонстрировать последовательность. При тестировании устройства iHeart таким способом мне действительно удалось получить согласованные и разумные данные, хотя изо дня в день наблюдаются большие различия, даже если я стараюсь сохранить как можно больше переменных согласованными.Такой большой разброс означает, что могут быть обнаружены только значительные эффекты.

Метилирование ДНК

Тесты на метилирование ДНК можно заказать в Osiris Green или Epimorphy / Zymo Research — обратите внимание, что в последнем случае доставка занимает несколько недель. Исходя из разговоров с людьми из двух компаний, нормальный уровень вариабельности для повторных тестов из одной и той же выборки составляет примерно 1,7 года для теста Zymo Research и 4,8 года для тестов Osiris Green.Уровень ежедневных или внутридневных вариаций между разными образцами от одного и того же человека остается скорее вопросительным знаком на данный момент, хотя мне сказали, что они очень согласованы по измерениям, разделенным месяцами. Тем не менее, что касается сердечно-сосудистых показателей, разумно попытаться сделать все как можно более похожим при прохождении теста до и после лечения: время дня, время приема пищи или упражнений, недавняя диета и т. Д.

Пример набора ежедневных мер

Пример одного из подходов к ежедневным измерениям сердечно-сосудистой системы заключается в следующем, добавляя дополнительные меры, чтобы продемонстрировать уровень согласованности в инструментах:

• Наденьте Polar h20; этого достаточно, чтобы немного увеличить частоту сердечных сокращений на короткий период времени, так что сначала избавьтесь от этого.
• Сядьте в удобное положение и расслабьтесь на несколько минут.
• Измерьте артериальное давление и пульс на левой руке с помощью Omron 10.
• Измерьте артериальное давление и пульс на правой руке с помощью Omron 10.
• Измерьте скорость пульсовой волны на кончике указательного пальца левой руки в течение 30 секунд с помощью системы iHeart.
• Измерьте скорость пульсовой волны на кончике указательного пальца правой руки в течение 30 секунд с помощью системы iHeart.
• Измеряйте вариабельность сердечного ритма в течение десяти минут с помощью Polar 10 и Selfloops.

Согласованность очень важна

В ходе эксперимента, от первого до последнего измерения, важно поддерживать постоянный вес, диету и уровень упражнений. Значительные изменения в образе жизни могут привести к результатам, которые могут помешать выявлению каких-либо результатов применения сенолитического фармацевтического препарата первого поколения с использованием описанных здесь простых тестов.Кроме того, при измерении будьте последовательны во времени дня, расстоянии во времени от последнего упражнения или приема пищи и положении тела. Эксперименты с измерительными приборами быстро продемонстрируют, насколько большое влияние могут оказать эти позиции.

Предполагаемая стоимость

Приведенные здесь затраты округлены для удобства и в некоторых случаях представляют собой размытые средние значения, соответствующие диапазону наблюдаемых цен в реальных условиях.

• Деловой почтовый ящик, например, от UPS: 250 долларов в год
• Базовые тесты от WellnessFX: 220 долларов за тест
• Комплекты MyDNAage: 310 долл. США / комплект
• Наборы образцов Osiris Green: 70 долларов США за набор
• Тонометр Omron 10: 80 долларов США
Кардиомонитор Polar h20
• : 100 долларов
• Монитор iHeart: 210 долларов
• American Weigh Gemini-20 Microscale: 90 долларов США.
долларов США.
• Различное оборудование: шпатели, этикетки, флаконы, капсулы для таблеток и т. Д .: 60 долларов
• 2 заказа дазатиниба по 2 г через Alibaba: 300 долларов
• Заказ Venetoclax 2 x 5g через Alibaba: 1300 долларов США
• 2 заказа по 2 г альвеспимицина через Alibaba: $ 400
• Капсулы с кверцетином, купленные в магазине: 10 900 10 долл. США
• Доставка и анализ образцов методом ЖХ-МС: 120 долларов США за образец

Расписание для самоэксперимента

Можно ожидать, что процесс открытия, чтения по теме, заказа материалов и проверки фармацевтических препаратов займет пару месяцев.Как только все решения будут приняты и материалы будут готовы, выберите дату начала. График самостоятельного эксперимента следующий:

• День 1-10: Один или два раза в день измеряйте артериальное давление, скорость пульсовой волны и вариабельность сердечного ритма.
• День 10: Анализ крови и метилирование ДНК.
• День 11-15: Испытайте 1/10 дозы используемых сенолитических соединений один за другим и прекратите попытки, если возникнут проблемы.
• День 16: Начало выполнения программы лечения.
• День 31-40: Повторите измерения артериального давления, скорости пульсовой волны и вариабельности сердечного ритма.
• День 40: Повторите анализ крови и метилирование ДНК.

Точное время на самом деле не важно, но рекомендуется дать достаточно времени после окончания дозировки, чтобы все успокоилось. В исследованиях на животных сенолитические эффекты проявились довольно быстро, как и положительные эффекты, но выделение нескольких недель времени для эксперимента на самом человеке все еще кажется хорошей идеей.Конечно, такой шаг ничего не стоит.

Где опубликовать?

Если вы проведете эксперимент над собой и держите результаты при себе, то вы помогли только себе. Истинное преимущество рационального, продуманного экспериментирования над собой начинает проявляться только тогда, когда многие члены сообщества делятся своими данными до такой степени, что это может помочь в проведении официальных испытаний и направлении исследований и разработок. Существует множество сообществ людей, члены которых с разной степенью строгости экспериментируют с различными соединениями и вмешательствами.Один из них можно найти, например, на форумах LongeCity, и это подходящее место для публикации деталей и результатов личного испытания с сенолитиками. Точно так же, если у вас есть собственный веб-сайт или блог, почему бы не там?

При публикации укажите все измеренные данные, принимаемые соединения и дозы, продолжительность лечения, а также возраст, вес и пол. Допускается нечеткое определение возраста до менее четкого пятилетнего диапазона (например, от 40 до 50 лет). Если вы хотите опубликовать анонимно, это должно быть достаточно безопасно, поскольку никакие из этих данных не могут быть отслежены до вас без доступа к поставщику анализа крови.Никому из обычных подозреваемых не будет интересно заходить так далеко. Отрицательные результаты так же важны, как и положительные. Например, с учетом мер, предложенных в этом посте, вполне вероятно, что положительные изменения в результате нынешнего сенолитического лечения у практически здорового человека в конце 40 или начале 50 будут слишком малы, чтобы их идентифицировать — они будут в том же диапазоне, что и случайные. шум и погрешность измерения. Данные, подтверждающие это ожидание, по-прежнему важны и полезны для сообщества, поскольку они помогут направить будущие и более эффективные усилия.

Последние мысли: почему бы не подождать?

Учитывая все вышеперечисленные предостережения, почему бы не подождать? Ожидание может быть очень разумной стратегией. Состояние сенолитической терапии быстро прогрессирует. Появляются новые и менее химиотерапевтические сенолитики, такие как FOXO4-DRI. В какой-то момент в ближайшие несколько лет появятся надежные прямые тесты на старение, которые позволят гораздо лучше понять, действительно ли эти методы лечения достигают заявленных результатов. Тем не менее, это не повредит планировать, и не повредит повозиться с некоторыми составными частями плана.Вот как мы можем определить, стоит ли экспериментировать сейчас или ждать, чтобы экспериментировать позже с лучшими инструментами.

Неинвазивный биомаркер может отслеживать и проверять эффективность сенолитического препарата

Клеточное старение — сложный клеточный процесс, который включает необратимую остановку клеточного цикла; другими словами, клетки навсегда перестают делиться. Стареющие клетки не «мертвые»; их сложный секретом — секреторный фенотип, связанный со старением, или SASP — вовлечен в биологические процессы, такие как воспаление и иммунные ответы.Все больше исследований демонстрируют, что патофизиология многих возрастных заболеваний связана со старением клеток. Следовательно, все больше работ направлено на разработку сенолитических препаратов, эти фармакологические средства способны выборочно устранять стареющие клетки.

Отсутствие биомаркера для измерения и отслеживания эффективности сенолитических препаратов до сих пор является препятствием для исследований, говорит профессор Джудит Кампизи. Лаборатория Кампизи Института исследований старения Бака изучает регуляцию и характеристики клеточных состояний, уделяя особое внимание клеточному старению.

В новом исследовании, опубликованном в Cell Metabolism, Кампизи и его коллеги делятся своим открытием нового неинвазивного теста на биомаркеры, который можно использовать для измерения и отслеживания эффективности сенолитических препаратов. Биомаркер, уникальный сигнальный липидный метаболит, высвобождается, когда стареющие клетки вынуждены умирать. Следовательно, его можно собирать и тестировать с помощью неинвазивных механизмов, таких как сбор мочи или забор крови.

Technology Networks взяли интервью у Кампизи и Кристофера Уайли, ведущего ученого по этому проекту и исследователя из Исследовательского центра по проблемам старения Министерства сельского хозяйства США в области питания человека Джин Майер, чтобы узнать больше об этом исследовании и его клиническом значении.

Молли Кэмпбелл (MC): Почему важно иметь возможность измерять и отслеживать эффективность сенолитических препаратов?

Джудит Кампизи (JC): Большинство сенолитических препаратов сначала тестируются на мышах. Люди живут в 30-35 раз дольше мышей (примерно три года против 100). Таким образом, если сенолитику требуется несколько недель или месяцев для исправления патологии у мышей, то для исправления этой патологии у людей может потребоваться несколько лет. Но как мы узнаем, убивает ли этот препарат стареющие клетки живых людей? Биомаркер, который легко обнаруживается в плазме или моче, позволит быстро оценить, был ли сенолитик активен у людей.

Christopher Wiley (CW): Учитывая количество заболеваний, на которые могут быть нацелены сенолитические препараты, и растущее число сенолитических препаратов, нам действительно нужна неинвазивная стандартная свеча для сенолиза — то, на что люди могут взглянуть и согласиться с тем, что сенолиз происходит в людях. Пока мы еще не достигли цели (мы не тестировали на людях), но наши результаты многообещающие.

MC: Растет число возрастных заболеваний, связанных со старением клеток.Вы можете привести примеры этих болезней?

JC: Список длинный! Он включает болезнь Альцгеймера и другие формы снижения когнитивных функций, некоторые аспекты сердечно-сосудистых заболеваний, метастазирование рака, катаракту, диабетические осложнения, фиброз легких, остеоартрит, остеопороз, несколько побочных эффектов некоторых лекарств, используемых для лечения рака и ВИЧ-СПИДа, саркопении и т. Д. и другие.

CW: Добавьте к этому болезнь Паркинсона, некоторые формы диабета и инсулинорезистентности, жировую болезнь печени, выпадение волос, дегенерацию межпозвонковых дисков и ретинопатию.Список начал расти так быстро, что становится трудно угнаться за быстрыми темпами появления новых болезней, причиной которых, как считается, является старение.

MC: Какие ключевые методы вы использовали в этом исследовании, которые позволили открыть биомаркер?

JC: Наши методы включают культивирование человеческих клеток, модели трансгенных мышей, секвенирование полного транскриптома и масс-спектрометрию.

CW: Мы использовали платформу масс-спектрометрии для измерения липидов в стареющих клетках.Первоначально мы обнаружили ряд простагландинов, поэтому мы расширили наш поиск на все известные простагландины и предполагаемые простагландины. В то время Dihomo-15d-PGJ2 был гипотетическим липидом — и с тех пор о нем сообщалось только как часть списка липидов в одной дополнительной рукописи без проверки. Поэтому мы проверили его, используя синтезированный стандарт дигомо-15d-PGJ2.

Считается, что большинство простагландинов являются секретируемыми факторами, но мы обнаружили дигомо-15d-PGJ2 только внутри стареющих клеток, но не в культуральной среде.Это было ключевое наблюдение, которое подсказало нам, что он может быть полезным в качестве биомаркера сенолиза. Поскольку dihomo-15d-PGJ2 имеет небольшой размер (около 344 Да), мы предположили, что он, вероятно, ускользнет из стареющих клеток, когда они умрут. Мы проверили это, дав контрольным и стареющим клеткам очень высокую дозу сенолитика — достаточно высокую, чтобы убить контрольные клетки. Только стареющие клетки плюс сенолитик приводили к высвобождению дигомо-15d-PGJ2. Важно отметить, что мы воспроизвели это на мышиной модели индуцированного химиотерапией старения, показав, что биомаркер специфичен для сенолиза у млекопитающих.

Существует также коммерчески доступный ELISA для 15d-PGJ2, но мы обнаружили, что он не различает 15d-PGJ2 (родственный простагландин с на 2 атома углерода меньше, который лучше изучен) и дигомо-15d-PGJ2. Тем не менее, он очень хорошо работал для обнаружения сенолиза в наших моделях и теоретически мог использоваться вместо масс-спектрометрии для более быстрого тестирования в клинике.

Лаура Лэнсдаун (LL): Не могли бы вы поговорить с нами о биомаркере дигомо-15d-PGJ2? Как вы продемонстрировали, что он уникален для стареющих клеток?

CW: Дигомо-15d-PGJ2 накапливается внутри стареющих клеток до микромолярных уровней, что очень много для оксилипина.Он практически не изучен и был, по сути, гипотетическим метаболитом, пока мы не обнаружили его внутри стареющих клеток. Хотя это может происходить в других биологических контекстах, его было так много в стареющих клетках, что мы предположили, что он будет избирательным для сенолиза, когда болюс липида будет высвобождаться по мере отмирания стареющих клеток.

Получив стандарт дигомо-15d-PGJ2, мы проанализировали несколько типов клеток, включая иммунные клетки и активированные тромбоциты. Макрофаги действительно имели низкие уровни липидов, но они не увеличивались во время поляризации / активации M1 или M2 и никогда не достигали уровней, наблюдаемых внутри стареющих клеток.У мышей мы наблюдали дигомо-15d-PGJ2 только тогда, когда мышам с большим количеством стареющих клеток (мы показали это для химиотерапевтического препарата доксорубицин в статье) давали сенолитик.

Что наиболее важно, дигомо-15d-PGJ2 не обнаруживался ни в одном из изученных нами состояний (например, химиотерапия, старение, антиретровирусная терапия), если мы не лечили сенолитиками. Хотя в рукописи мы использовали исключительно ABT-263, с тех пор мы проверили использование трансгенных моделей сенолиза и неопубликованных сенолитиков, обнаруженных в Баке, и мы обнаруживаем только дигомо-15d-PGJ2 во время сенолиза.

LL: Почему липидные компоненты SASP изучены недостаточно?

JC: Огромный прогресс был достигнут в характеристике транскриптомов и протеомов клеток. Так много недавних исследований было сосредоточено на этих клеточных компонентах. Однако в настоящее время растет интерес к клеточным метаболитам, включая липиды.

CW: Лаборатория Кампизи первоначально охарактеризовала SASP с помощью белковых биомаркеров, а липиды в целом, как правило, недостаточно изучены.Частично это, вероятно, связано с меньшим количеством инструментов в космосе, а доступные инструменты, такие как масс-спектрометрия, как правило, более дороги. Для сравнения, транскриптомика довольно стандартна и относительно дешева, а многие РНК кодируют белки. Большинство антител вырабатываются к белкам, поэтому инструменты для изучения белков более доступны.

Для сравнения, РНК не кодируют липиды, и очень мало липидов можно анализировать с помощью антител, поэтому вам действительно нужно использовать такие инструменты, как масс-спектрометрия, которые более дороги и требуют дополнительных знаний для изучения.Развитие новых технологий, таких как метаболомика и липидомика, меняет это, поэтому я ожидаю, что мы увидим аналогичные открытия в будущем.

MC: Почему полезен биомаркер, который можно измерить с помощью неинвазивного тестирования?

JC: Если бы вы или ваш врач захотели узнать, подействовали ли лекарство или вмешательство, вы бы предпочли помочиться в чашку или вставить инородный предмет в ваше тело?

CW: С сенолитиками, участвующими в клинических испытаниях при большом количестве состояний, есть два ключевых фактора, которые необходимо установить в ходе этих испытаний:

1.Что лекарства эффективны при лечении болезни.

2. Происходит сенолиз.

В настоящее время единственный способ установить, что происходит сенолиз, — это извлечь ткань до и после лечения и проверить ткань на маркеры старения. Например, биопсии жировой ткани и кожи были взяты до и после сенолитического лечения в одном из первых испытаний, которые установили, что сенолитическое средство работает на людях. Этот биомаркер позволил нам обнаружить сенолиз в крови и моче мышей, получавших сенолитики, в том виде, в котором он происходил.Так что, если вы хотите обнаружить сенолиз без проведения биопсии, это лучший способ.

LL: Каковы ваши следующие шаги в этом направлении и какое клиническое воздействие, по вашему мнению, может оказать эта работа?

JC: Сейчас мы сосредоточены на том, чтобы лучше понять, что делают эти ассоциированные со старением липиды как внутри, так и вне стареющей клетки. Мы надеемся определить, взаимодействуют ли липиды, связанные со старением, с другими клеточными компонентами, и как влияют на них (например,g., белки, мелкие метаболиты).

CW: Во-первых, после того, как мы нашли этот маркер, мы вернулись и посмотрели на наш нецелевой липидомный профиль, и обнаружили 4-5 других липидов-кандидатов, которые также могут быть полезны в качестве биомаркеров. Мы рассматриваем дигомо-15d-PGJ2 как доказательство принципа обнаружения других биомаркеров.

Затем мы хотим проверить наши биомаркеры на людях и нечеловеческих приматах. Это наиболее важный шаг на пути к широко используемому диагностическому тесту на сенолиз у пациентов.

Что касается клинического воздействия, мы предполагаем два основных применения этого биомаркера:

1. Показ того, что препарат работает, когда людей лечат сенолитиками от болезней, вызванных старением.

2. В качестве дополнения к клиническим испытаниям с использованием новых сенолитиков. Мы надеемся, что мы сможем сделать обнаружение дигомо-15d-PGJ2 стандартом для сенолитического тестирования, чтобы избежать этих инвазивных биопсий и образцов тканей, и вместо этого использовать биологические жидкости. Мы показали на бумаге кровь и мочу, но можно было представить себе слезы, спинномозговую жидкость, межклеточную жидкость и т. Д.как потенциально поддающийся анализу.

Например, если вы хотите лечить болезнь Альцгеймера сенолитиками, вы не собираетесь делать биопсию головного мозга человека для анализа на удаление стареющих клеток, но вы можете провести спинномозговую пункцию и анализ на дигомо-15d-PGJ2.

Джудит Кампизи и Кристофер Уайли разговаривали с Молли Кэмпбелл, научным писателем, и Лорой Лэнсдаун, управляющим редактором Technology Networks.

Национальный институт старения, семинар: Переделка лекарств или пищевых добавок для их сенолитических или сеноморфных эффектов: соображения для клинических испытаний | Журналы геронтологии: серия A

Аннотация

Предпосылки

Клеточное старение участвует во многих возрастных состояниях.Лекарства и пищевые добавки, разработанные для различных целей, убивают стареющие клетки (сенолитики) или подавляют их секрецию (сеноморфизм). Есть интерес к перепрофилированию таких лекарств для лечения или профилактики возрастных заболеваний. На сегодняшний день проведены лишь мелкомасштабные предварительные испытания.

Метод

На семинаре, созванном Национальным институтом старения в августе 2019 года, академические, промышленные и правительственные ученые рассмотрели вопросы фазы II испытаний потенциально повторно используемых лекарств или пищевых добавок, чтобы оценить преимущества и риски их сенолитических ( уничтожение стареющих клеток) или сеноморфные (изменение фенотипов стареющих клеток) эффекты при лечении или профилактике возрастных состояний.

Результаты

Участники рассмотрели механизмы и эффекты клеточного старения, сенолитики и сеноморфики нескольких классов и их потенциальную роль в лечении или профилактике заболеваний, модуляторы секреторного фенотипа, связанного со старением, потребности в маркерах старения, данные и ресурсы для образцов, инфраструктура для планирования испытаний и потенциальное влияние на исходы у пожилых пациентов с мультиморбидностью и полипрагмазией.

Выводы

Участники отметили важность рассмотрения потенциальных эффектов лекарственных препаратов-кандидатов на множественные исходы старения.Важно оценить специфичность лекарств для уничтожения стареющих клеток и баланс между сенолитическим и цитотоксическим эффектами. Маркеры определенных типов стареющих клеток необходимы для оценки реакции на вмешательство. У пожилых людей есть потенциальные взаимодействия с сопутствующими заболеваниями и методами их лечения. Стандартизированные меры могут улучшить сравнение и объединение данных. Дополнительная характеристика фенотипов сенесцентных клеток человека необходима для разработки лучших и более специфичных сенолитиков и сеноморфиков.

Этот семинар был первым в серии, запланированной Отделением гериатрии и клинической геронтологии, для рассмотрения вариантов клинических испытаний на ранней стадии вмешательств, модулирующих фундаментальные процессы старения. Клеточное старение было выбрано из-за недавних научных достижений, включая идентификацию нескольких классов лекарств, которые могут быть перепрофилированы из-за их сенолитических или сеноморфных свойств, разработка новых соединений биотехнологическими компаниями и недавнее начало исследовательских клинических испытаний (1).

Рекомендации по терапевтическим стратегиям

Стареющие клетки, характеризующиеся прерыванием клеточного цикла, относительной устойчивостью к апоптозу, секреторным фенотипом, связанным со старением (SASP), а также несколькими типами макромолекулярного повреждения и метаболической дисрегуляции, увеличиваются во многих стареющих тканях (2). SASP чрезвычайно сложен и включает более 400 белков, а также простаноиды, церамиды, лейкотриены и нуклеотиды и варьируется в зависимости от типа клетки (3,4).В дополнение к прямым эффектам SASP стареющие клетки также вызывают старение в не стареющих клетках (5,6).

Доказательства роли стареющих клеток в возрастных расстройствах накапливаются (5,7). Однако клеточное старение также играет положительную роль в эмбриональном развитии, восстановлении тканей и заживлении ран и может как ингибировать, так и стимулировать онкогенез (8).

Сигналы, вызывающие старение, могут быть быстрыми, но стареющие фенотипы, по-видимому, созревают в течение нескольких дней и недель, что является важной особенностью для сроков вмешательства и схем лечения.В клеточных культурах требуется 2–6 недель для установления старения и приобретения полного SASP. Соответственно, сенолитики могут быть эффективными при периодическом введении, например, один раз в день, раз в две недели или один раз в месяц, в зависимости от скорости образования стареющих клеток. Такой подход «беги и беги» мог бы уменьшить побочные эффекты и, если он эффективен, предоставить более убедительные доказательства того, что эффекты лекарства опосредованы уничтожением стареющих клеток, а не эффектами, которые требуют постоянного присутствия лекарства.

Основная стратегия разработки сенолитических лекарств основана на способности стареющих клеток противостоять апоптотическим стимулам, что подразумевает усиление защиты от выживания и / или антиапоптотической защиты. Цель состоит в том, чтобы разработать лекарства, которые убивают стареющие клетки путем временного отключения сетей просуществования, которые защищают стареющие клетки от их собственного SASP, который может вызвать апоптоз в соседних нонсенсирующих клетках. Разработка сенолитиков сосредоточена на таких сетях выживания, включая эфрины (EFNB1 или 3), PI3Kδ, p21, BCL-xL, активированный плазминоген ингибитор-2, члены семейства BCL-2 или белок теплового шока-90 (HSP-90). (9,10), а также метаболические мишени в стареющих клетках, которые отличаются от таковых в не стареющих клетках.

Поскольку разные типы стареющих клеток зависят от разных путей выживания, оптимальным подходом было бы определение лекарств или комбинаций лекарств, затрагивающих несколько мишеней в этих сетях, некоторые компоненты которых являются избыточными. Следовательно, может потребоваться прервать более одного пути, чтобы убить определенные типы стареющих клеток. Убийство по крайней мере одного резервуара стареющих клеток полезно, даже если оно не является основным источником заболевания, потому что эти клетки больше не могут распространять старение.

Сенолитики первого поколения, такие как дазатиниб, кверцетин и физетин, а также другие препараты, рассматриваемые для использования в качестве сенолитиков, были выбраны из препаратов, которые, как известно, влияют на мишени, связанные со старением клеток и устойчивостью к апоптозу (9,11). Сенолитическая активность также оценивалась для соединений, увеличивающих продолжительность жизни, протестированных в Программе тестирования мышей Национального института старения (NIA), и в регуляторах аутофагии (10). Дополнительные сенолитики теперь выявляются с использованием высокопроизводительных подходов, таких как скрининг библиотеки лекарств.

Поскольку пути, связанные со старением, влияют на другие клеточные процессы, помимо устойчивости к апоптозу, важным соображением при скрининге сенолитиков-кандидатов является их специфичность в отношении уничтожения стареющих клеток по сравнению с нестареющими клетками. Это было оценено путем сравнения летальности ностареющих клеток мыши и человека с вызванными излучением стареющими клетками (9) или старением из-за дефектной репарации ДНК (10). Некоторые соединения обладали частичной специфичностью в отношении летальности стареющих клеток. Сенолитики, предназначенные для нацеливания на сети, поражающие преимущественно стареющие клетки, могут вызывать меньше побочных эффектов in vivo, чем препараты, менее специфичные для стареющих клеток, которые могут запускать апоптоз нецелевых типов клеток с большим количеством побочных эффектов (9).

Многие препараты с сенолитическими свойствами были первоначально разработаны как противоопухолевые препараты, нацеленные на механизмы, общие для раковых и стареющих клеток. Среди этих препаратов те, которые имели более специфический сенолитический эффект по сравнению с более широким цитотоксическим действием, рассматривались в качестве кандидатов для лечения состояний, связанных со старением клеток. Чрезмерная токсичность и низкая эффективность, ограничивающие использование этих соединений при лечении рака, могут вызывать меньшее беспокойство, когда эти агенты используются в качестве сенолитиков, поскольку стареющие клетки не размножаются и, в отличие от раковых клеток, не нужно полностью уничтожать.Следовательно, более низкие дозы и прерывистые схемы лечения могут решить проблемы токсичности и эффективности (12). Однако человеческий опыт применения потенциальных сенолитиков ограничен, и потенциальные преимущества следует тщательно взвешивать с учетом возможных пагубных последствий, таких как снижение иммунного надзора за раком, возвращение стареющих раковых клеток в клеточный цикл, а также нарушение восстановления и регенерации тканей.

Senomorphics, которые подавляют компоненты SASP или SASP, не убивая стареющие клетки, представляют альтернативный подход.Скрининг клеточной культуры выявил сеноморфные соединения на основе связанных с пониженным старением бета-галактозидаз-положительных клеток без уменьшения количества клеток (10).

Senomorphics необходимо применять непрерывно, а значит, требуются более эффективные профили безопасности. Учитывая разнообразие SASP в разных типах стареющих клеток, любой один сеноморфный может не ингибировать все компоненты SASP во всех типах стареющих клеток. Компоненты SASP меняются в зависимости от типа стареющих клеток и с течением времени. Они включают белки и пептиды, простаноиды, церамиды, лейкотриены, нуклеотиды, экзосомы и изменения клеточных мембран, влияющие на иммунный клиренс стареющих клеток.Целевая специфичность сеноморфизма может быть повышена за счет понимания биологической значимости различных популяций стареющих клеток и эффектов их компонентов SASP (4). Эта информация необходима для оценки их относительной важности в патофизиологии различных состояний, что может позволить разработать более селективные соединения для нацеливания на определенные компоненты SASP или клетки для конкретных условий или комбинаций состояний.

Опыт работы с отдельными классами сенолитиков

Навитоклакс и другие ингибиторы семейства BCL-2 / BCL-xL

Выживание некоторых, но не всех типов стареющих клеток человека зависит от члена семейства BCL-2, BCL-xL (9).Ингибиторы семейства BCL и соединения, нацеленные на взаимодействие H / Mdm2-p53, представляют собой противораковые препараты, которые активируют p53 и приводят клетки к апоптозу. В моделях на животных навитоклакс, ингибитор Bcl-2, предотвращал нейродегенерацию (13) и подавлял образование и рост атеросклеротических бляшек, устраняя стареющие клетки (14). Ингибитор H / Mdm2, UBX0101, предотвращал разрушение хряща в коленных суставах мышиной модели остеоартрита. В фазе I плацебо-контролируемого исследования однократная инъекция UBX0101 в коленные суставы 48 участников с остеоартритом была хорошо переносимой и безопасной (15).По сравнению с плацебо, высокие дозы UBX0101 (1–4 мг) значительно уменьшали боль и маркеры клеточного старения с положительной тенденцией к улучшению функции измерения, но исследование не имело возможности оценить влияние на этот результат.

На клиническую разработку ингибиторов семейства BCL в качестве противоопухолевых препаратов повлияла ограничивающая дозу тромбоцитопения из-за клиренса зрелых тромбоцитов (16). Этот побочный эффект можно контролировать с помощью переливания тромбоцитов. Из-за их сенолитических свойств ингибиторы семейства BCL можно вводить с перерывами, ограничивая воздействие парой дней.Кроме того, дозировка ингибитора семейства BCL может быть уменьшена за счет «апоптотического прайминга», то есть одновременного введения таких препаратов, как ингибиторы тирозинкиназы Брутона (например, ибрутиниб), для увеличения зависимости стареющих клеток от BCL (17) и, таким образом, повышения безопасности ингибитора BCL. профили.

Ингибиторы HSP-90

Исследования клеточных культур показали, что обработка старых мезенхимальных стволовых клеток гелданамицином, ингибитором HSP-90, значительно увеличивает апоптоз стареющих мезенхимальных стволовых клеток, не затрагивая незрелые клетки.В животной модели клеточного старения ингибитор HSP-90 17-DMAG (альвеспимицин) удалял стареющие клетки. Аналогичным образом, обработка мышей Ercc1 ^{— / ∆} 17-DMAG снижает экспрессию маркеров SASP IL-1β, TNFα и p16 и облегчает патологию межпозвонкового диска. Доклинические исследования показывают, что сенолитические эффекты ингибиторов HSP-90 опосредуются воздействием на митохондриальную изоформу TRAP1 (белок 1, связанный с рецептором фактора некроза опухоли) и комплекс HSP-90-cdc37. Эти препараты, по отдельности или в сочетании с другими сенотерапевтическими средствами, могут уменьшить количество стареющих клеток в различных тканях (10).

Ингибиторы HSP90 используются в качестве противоопухолевых препаратов для воздействия на многочисленные белки, важные для выживания и пролиферации раковых клеток. Гелданамицин и радицикол являются природными ингибиторами HSP90, но гепатотоксичность и структурная нестабильность ограничивают их клиническое применение (18). Разработка 17-DMAG была прекращена из-за нейро- и нефротоксичности, гематологической злокачественности и неполного восстановления костного мозга в ранней фазе клинических испытаний (19). Разработка других аналогов гелданамицина была приостановлена ​​или прекращена из-за низкой активности или неприемлемых побочных эффектов, таких как куриная слепота и тяжелая диарея (20–22).Исследования на грызунах показывают, что длительное ингибирование сетчатки HSP-90 вызывает гибель фоторецепторных клеток, которая обратима после прекращения приема препаратов (23).

Есть обнадеживающие первые результаты тестирования нескольких аналогов, не являющихся гелданамицином. Однако эти агенты также показали ограничивающую дозу токсичность и низкую эффективность в последующих онкологических исследованиях (24,25). PU-H71, пуриновый каркас, который связывает N-концевой АТФ-связывающий домен HSP90, продемонстрировал значительную активность и хорошо переносился в клинических испытаниях фазы I, проведенных Национальным институтом рака (NCI).Исследование было остановлено из-за отсутствия лекарств (26). В целом, токсичность для глаз и печени, диарея и утомляемость ограничивают клиническую применимость ингибиторов HSP-90.

дазатиниб

Дазатиниб, ингибитор пантирозинкиназы, был одобрен Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) США в 2006 году для лечения устойчивых к иматинибу хронических миелогенных лейкозов и острых лимфобластных лейкозов, положительных по филадельфийской хромосоме. Он хорошо всасывается и быстро метаболизируется ферментом CYP3A4 P450 и относительно хорошо переносится, при этом токсичность исчезает после прекращения приема препарата.

Дазатиниб сам по себе или в комбинации с кверцетином (см. Ниже) обладает сенолитическим действием в отношении нескольких типов культивируемых клеток, включая миофибробласты, β-клетки поджелудочной железы, эмбриональные фибробласты мышей с дефицитом Ercc1 и первичные фибробласты легких человека (9,27). Введение дазатиниба в культивируемые мезенхимальные стволовые клетки женщин с преэклампсией устраняет стареющие клетки (28).

При постоянном применении в качестве противоопухолевого препарата обычными токсическими эффектами дазатиниба являются миелосупрессия, кровотечение, задержка жидкости, включая плевральный выпот, и побочные эффекты со стороны сердца.Не было различий в фармакокинетике, эффективности или безопасности между пожилыми или более молодыми людьми. Однако участники в возрасте 65 лет и старше чаще испытывали усталость, дозозависимый плевральный выпот, одышку, застойную сердечную недостаточность и снижение веса. Были также постмаркетинговые отчеты о фибрилляции предсердий и трепетании предсердий у пациентов, получавших препарат (29).

Из 130 пациентов, участвовавших в I – III фазах клинических испытаний дазатиниба, 72% с хроническим миелолейкозом имели нейтропению и / или тромбоцитопению 2–4 степени.Средняя продолжительность развития цитопении составила 27 дней (30). При длительном лечении дазатинибом среднее время до появления плеврального выпота составляло 114 недель, и пациенты старшего возраста были подвержены более высокому риску (31). При такой продолжительности периодическое введение и / или более низкие дозы дазатиниба при использовании в качестве сенолитика могут снизить частоту и тяжесть этих нежелательных явлений. Исследования на крысиной модели плеврального выпота, вызванного дазатинибом, показывают, что совместное лечение антиоксидантами может снизить риск плеврального выпота (32).

Флавоноиды , такие как кверцетин и физетин, действуют на многочисленные биологические процессы, поэтому трудно приписать их действие исключительно удалению стареющих клеток. Было показано, что физетин нацелен на стареющие клетки путем ингибирования эффекторов про-старения, таких как p16 и p21 (11), а кверцетин — путем воздействия на PI3K и другие киназы (33). Несмотря на короткий период полураспада (3 часа для физетина), они облегчают множественные состояния, связанные со старением, в моделях на животных, даже если вводить их каждые несколько недель.Эта эффективность «беги и беги» больше совместима с сенолитической активностью, чем с побочными эффектами, которые зависят от постоянного занятия рецепторов или модуляции биохимических путей или ферментов. Кверцетин был первым флавоноидом, идентифицированным как сенолитик. Он подавляет жизнеспособность стареющих клеток больше, чем жизнеспособность пролиферирующих клеток. Физетин более эффективен, чем кверцетин, и значительно снижает уровень β-галактозидазы, связанной со старением, и несколько факторов SASP в тканях животных и человека (34). Другие эффекты включали снижение окислительного стресса и повышение антиоксидантной защиты.У лабораторных животных физетин подавлял уровни p16 ^Ink4a , маркера старения. Этот эффект продолжался после отмены физетина, подтверждая мнение о том, что очищение стареющих клеток дает продолжительный эффект. Введение очень старым мышам увеличивало среднюю и максимальную продолжительность жизни примерно на 15%, снижало сывороточные уровни ферментов печени, уменьшало перекисное окисление липидов и повышало уровни глутатиона (11).

В исследованиях на культуре клеток и in vivo кверцетин и физетин имеют мишени, соответствующие их сенотерапевтическим свойствам.Они могут быть как сенолитическими, так и сеноморфными. Физетин и другие флавоноиды обладают нейропротективным действием в моделях многих видов и заболеваний, а физетин полезен в моделях диабета, астмы и рака на животных (35). В исследованиях на лабораторных животных не наблюдалось никаких побочных эффектов при дозах физетина до 3 г / кг в день в течение месяца.

Физетин и кверцетин быстро конъюгированы, что усложняет анализ биодоступности. Деконъюгация может происходить на участках воспаления, что приводит к локализованному высвобождению, что может способствовать терапевтическому эффекту.И кверцетин, и физетин обратимо ингибируют цитохром P450 2C8, что может влиять на биодоступность других препаратов (36).

Оба соединения в изобилии содержатся во фруктах и ​​овощах, а потребление с пищей увеличивает уровни циркуляции. Высокое потребление коррелирует с более низким содержанием липидов в сыворотке крови и снижением смертности от ишемической болезни сердца (37). Доказательств неблагоприятного воздействия физетина и других флавоноидов на человека мало, но контролируемых клинических испытаний нет. Безопасность и эффективность флавоноидов оцениваются в более чем 60 клинических испытаниях, в основном по нейропротекторным эффектам кверцетина.

Дазатиниб плюс кверцетин

Комбинация этих 2 сенолитиков влияет на различные узлы антиапоптотической сети стареющих клеток и, таким образом, может убивать более широкий спектр типов клеток, чем любое соединение по отдельности. Таким образом, дазатиниб убивает стареющие преадипоциты, но не эндотелиальные клетки сосудов, и кверцетин наоборот. Комбинация обоих препаратов более эффективна, чем любой по отдельности, для уничтожения определенных типов стареющих клеток (9).

В моделях мышей лечение дазатинибом плюс кверцетином (D + Q) привело к исчезновению трансплантированных стареющих преадипоцитов, уменьшению хрупкости и возрастных жировых отложений, улучшению памяти и увеличению здоровья и продолжительности жизни у старых мышей.(5). В исследованиях на мышах D + Q также уменьшал множественное старение и возрастные фенотипы, включая потерю костной массы (38), вазомоторную дисфункцию (39) и когнитивные нарушения (40).

Был интерес к потенциальным преимуществам D + Q для пациентов с идиопатическим легочным фиброзом (IPF), смертельным заболеванием, которое в первую очередь поражает людей старше 60 лет. Маркеры старения накапливаются в легких пациентов IPF и повышается экспрессия p16 ^INK4a , очаги повреждения ДНК, дисфункция теломер и факторы SASP связаны с повышенной тяжестью IPF (27).В мышиной модели IPF, индуцированной блеомицином, прерывистые дозы D + Q уменьшали нагрузку на стареющие клетки и улучшали физическую функцию, состав тела, легочную функцию и способность к физической нагрузке (27).

В открытом неконтролируемом исследовании с участием 14 пациентов с IPF D + Q вводили с перерывами в течение 3 недель для оценки безопасности и возможности дальнейших исследований. Участники сообщили об одном серьезном нежелательном явлении, не связанном с вмешательством, и нескольких несерьезных нежелательных явлениях, включая головные боли, легочные симптомы и усталость, варьирующуюся по интенсивности от умеренной до тяжелой.Скорость походки после лечения, пройденное расстояние и показатель короткой физической активности батареи улучшились по сравнению с предварительным лечением. Однако, поскольку эти меры влияют на обучение, эти результаты следует интерпретировать с осторожностью. Изменения фактора SASP умеренно коррелировали с изменениями физической функции, легочной функции и индекса слабости (41).

2-недельное открытое неконтролируемое исследование с участием 9 пациентов с диабетом почек (средний возраст 69 лет) оценивало 3-дневный курс перорального приема D + Q.Желудочно-кишечных и других симптомов, но серьезных побочных эффектов отмечено не было. Доля клеток жировой ткани с маркерами старения, включая p16, p21 и клетки, экспрессирующие бета-галактозидазу, была уменьшена, как и несколько циркулирующих факторов SASP (42).

Избранные модуляторы SASP (Senomorphics)

рапамицин

Рапамицин увеличивает продолжительность жизни и здоровье нескольких моделей лабораторных животных и обладает множественными клеточными эффектами.Он подавляет клеточное старение в широком диапазоне клеток, но его механизм полностью не установлен. Гепатоциты мышей, получавших рапамицин в течение 6 месяцев, имели повышенные уровни Nrf2, белка, регулирующего защиту от окислительного повреждения, вызванного травмой и воспалением (43). Роль Nrf2 в опосредовании эффектов рапамицина на клеточное старение была выяснена в исследованиях нокаута Nrf2 на грызунах: индуцированное рапамицином снижение маркеров старения p16 и p21 требовало Nrf2, а уменьшение бета-галактозидазы и SASP рапамицином — нет (44).

Рапамицин был одобрен FDA в 1999 году для предотвращения отторжения трансплантата и (в стентах с лекарственным покрытием) для ограничения рестеноза коронарных артерий. Три рапалога одобрены FDA по нескольким показаниям. В культурах клеток человека рапамицин сдерживал воспалительное плечо SASP, подавляя трансляцию IL-1-α и подавляя протуморигенные эффекты стареющих клеток у мышей (45).

В большинстве исследований системного введения рапамицина и рапалогов на людях участвовали пациенты с трансплантатами, принимавшие комбинации иммунодепрессантов.Таким образом, интерпретация их безопасности ошибочна. Наиболее частыми побочными эффектами, поражающими> 20% пациентов после трансплантации, являются стоматит / язвы во рту, сыпь и гиперлипидемия. Редкие (<5%) и очень серьезные эффекты включают пневмонит и угнетение костного мозга. У пациентов с трансплантатом также наблюдаются положительные побочные эффекты, включая меньшее количество раковых заболеваний кожи, неходжкинских лимфом, вирусные инфекции и уменьшение васкулопатии сердечного аллотрансплантата.

Клинический опыт применения рапамицина и рапалогов у пожилых людей без состояний, при которых препараты одобрены FDA, ограничен.В неконтролируемом пилотном исследовании с участием 13 кардиологических реабилитационных пациентов (средний возраст 74 ± 8 лет) была проверена безопасность и переносимость 0,5–2,0 мг рапамицина в день (46). Рапамицин относительно хорошо переносился, но у 62% участников развился понос. В плацебо-контролируемом исследовании изучались эффекты рапамицина в дозе 1 мг в течение 8–16 недель у 28 пожилых людей в возрасте 70–95 лет (47). Для исследования подходили здоровые люди и люди со стабильными хроническими заболеваниями, такими как гипертония, астма и ишемическая болезнь сердца.Небольшое снижение гемоглобина, уровней гематокрита, количества эритроцитов и массы тела в группе рапамицина значительно отличалось от изменений в контроле, но клиническое значение этих изменений не определено. На уровни циркуляции многочисленных цитокинов, включая компоненты SASP, рапамицин существенно не влиял, за исключением увеличения TNF-альфа. У двух участников, принимавших рапамицин, и одного, принимавшего плацебо, развился стоматит. Еще двое, принимавшие рапамицин, прекратили исследование, один из-за диареи и один из-за лицевой сыпи.Более крупные контролируемые испытания рапалога эверолимуса (RAD001) и ингибитора mTOR дактолизиба (RTB101) выявили улучшение реакции на вакцинацию против гриппа и профилактику инфекций у пожилых людей (48,49). В этих испытаниях исследуемые препараты относительно хорошо переносились, но с более высокой частотой побочных эффектов, включая язвы во рту и повышение уровня холестерина в сыворотке. Нет данных ни в одном из вышеупомянутых исследований на людях о влиянии in vivo на фенотип клеточного старения, например, активность p16 или p21.

Ингибиторы янус-киназы

Путь трансдуктора сигнала киназы Janus и активатора транскрипции (JAK / STAT) регулирует пролиферацию, дифференциацию, миграцию, апоптоз и выработку про- и противовоспалительных цитокинов, факторов роста и многих метаболических цитокинов. На 4 вида киназ Janus по-разному влияют разные ингибиторы JAK.

In vitro, ингибиторы JAK значительно снижали количество цитокинов SASP, включая IL-6, MCP-1, MCP-3 и GM-GSF, в преадипоцитах человека и эндотелиальных клетках сосудов, которые стареют в результате облучения или серийного пассажа, но не в бессревших. клетки.In vivo маркеры активности пути JAK / STAT, старения клеток и воспалительных компонентов SASP выше в жировой ткани старых мышей по сравнению с молодыми мышами (50). Введение руксолитиниба в дозе 60 мг / кг в течение 2 месяцев 24-месячным мышам значительно снизило уровни циркулирующих воспалительных маркеров, уменьшило воспаление в жировой ткани и потерю жира, связанную с возрастом. Ингибитор JAK улучшил фенотипы костей (38) и метаболическую функцию (51), включая уровни триглицеридов в крови и печени, циркулирующие свободные жирные кислоты и чувствительность к инсулину.Мыши, получавшие руксолитиниб, имели более высокий уровень активности, большую выносливость, силу захвата и скорость ходьбы (50). У молодых мышей руксолитиниб не влиял на фенотип костей, а также на физическую или метаболическую функцию (38,50,51).

Ингибиторы JAK одобрены FDA для лечения нескольких состояний: руксолитиниб при миелофиброзе и истинной полицитемии, тофацитиниб при ревматоидном и псориатическом артрите и барицитиниб при ревматоидном артрите. В клиническом исследовании руксолитиниба при миелофиброзе наиболее частыми побочными эффектами были анемия, нейтропения и тромбоцитопения (52).Эти эффекты могут быть видоспецифичными или специфичными для болезни, поскольку у мышей они не наблюдались (50).

Данные о потенциальной терапевтической роли ингибиторов JAK в качестве сеноморфных состояний ограничены. Неясно, в какой степени их терапевтический эффект опосредован воздействием на стареющие клетки по сравнению с нестареющими клетками. Кроме того, не изучались преимущества и риски длительного лечения, которое может потребоваться для отсрочки или купирования состояний, связанных со старением. Также неясно, какие компоненты SASP вносят вклад в конкретные состояния и могут быть индивидуально нацелены, что может обеспечить более благоприятные профили польза-риск.Потенциальные эффекты комбинирования ингибиторов JAK с другими лекарствами, ингибирующими SASP, такими как метформин и рапамицин, также еще не исследованы.

Биомаркеры наличия и / или фенотипа стареющих клеток в тканях

Человеческие биомаркеры клеточного старения in vivo будут иметь решающее значение во II фазе испытаний сенолитиков и сеноморфных препаратов для выявления целевых популяций вмешательства с высоким содержанием стареющих клеток, оценки степени вмешательства и специфичности воздействия на мишень и определения их способности устранять стареющие клетки и / или или модулировать их фенотипы.В исследованиях перепрофилирования лекарств такие маркеры также могут определять разработку новых сенолитических или сеноморфных лекарств с повышенной эффективностью и безопасностью.

Маркеры клеточного старения связаны с заболеваниями человека, связанными со старением, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, атеросклероз и преждевременную коронарную болезнь сердца (2). Они были оценены по нескольким вопросам и типам клеток, которые можно было измерить в исследованиях вмешательства человека. Снижение экспрессии генов компонентов SASP в клетках кожи коррелировало с клиническим улучшением в небольшом исследовании дазатиниба у пациентов с системным склерозом в одной группе (53).In vitro мезенхимальные стволовые клетки брюшного жира от женщин с преэклампсией обладают повышенной экспрессией бета-галактозидазы, связанной со старением, и активацией компонентов SASP по сравнению с клетками из контрольной группы (28). Нагрузка стареющих клеток и фенотип, проявляющийся в экспрессии генов p16, p53, IL-6 и MCP-1, были активированы в клетках субъектов с ожирением по сравнению с контролем (54).

Общие меры клеточного старения, такие как связанная со старением бета-галактозидаза и p16 ^INK4a , не специфичны для стареющих клеток.Поскольку ни один отдельный маркер не является полностью специфичным для старения, а фенотипы старения различаются в зависимости от тканей, для количественной оценки и характеристики стареющих клеток в отдельных тканях человека рекомендуется комбинация клеточных маркеров (2).

Исследования 3 индукторов старения: облучение рентгеновскими лучами, онкогенная сверхэкспрессия RAS и атазанавир (ингибитор протеазы, используемый при ВИЧ-СПИДе), выявили ядро ​​белков SASP, общих для всех 3 индукторов и среди разных типов клеток. Некоторые из них вредны, а некоторые полезны (4).Эти результаты имеют отношение к исследованиям циркулирующих факторов, которые могут быть системными индикаторами активности SASP у людей. В плазме человека циркулирующие уровни нескольких белков SASP, включая GDF15, STC1, SERPINs и MMP1, значительно варьировались в зависимости от возраста донора (4,55).

Исследования на животных моделях профилируют различные популяции клеток с использованием RNA-seq для генерации сигнатур, связанных со стареющими клетками, для субпопуляций стареющих клеток и основных сигнатур для разных типов стареющих клеток.Эти связанные со старением сигнатуры могут идентифицировать субпопуляции стареющих клеток и помогать в открытии и разработке сенолитиков, нацеленных на них.

Признаки старения зависят от индукторов старения, типа клеток и продолжительности после индукции старения при оценке фенотипов. Репликативное старение, старение, индуцированное онкогенами, и индуцированное ионизирующим излучением старение, повышающее или понижающее регуляцию, создают различные зависимые от стресса сигнатуры. Набор генов, лежащих в основе фенотипа старения, не зависит от вызывающего старение стрессора, таким образом создавая независимые от стрессора сигнатуры.Четыре типа стареющих клеток: фибробласты, меланоциты, кератиноциты и астроциты, значительно различаются по экспрессии генов, что позволяет идентифицировать характерные особенности клеточного старения. Однако ядро ​​из 55 генов не регулировалось независимо от типа клеток (56). Примечательно, что экспрессия многих генов, связанных со старением, не зависит от времени, прошедшего с момента индукции старения, тогда как экспрессия других зависит от времени, что указывает на динамическое развитие фенотипа старения.

Ресурсы и вопросы исследований для будущих испытаний

В то время как вмешательства, направленные на клеточное старение и другие механизмы старения, были протестированы на животных моделях, исследования на людях еще не оценили степень, в которой нацеливание на такие механизмы могло задержать, предотвратить или облегчить множественные возрастные расстройства.Испытания по оценке таких вмешательств сталкиваются с другими проблемами, нежели традиционная парадигма «одно лекарство — одна мишень — одно заболевание».

Трансляционная Геронаучная сеть

Для решения таких проблем Трансляционная геронаучная сеть (TGN) при поддержке NIA предоставит инфраструктуру и анализ для фаз I или II испытаний условий, связанных с одним или несколькими механизмами старения. По этическим и практическим соображениям его первоначальное внимание уделяется симптоматическим состояниям, пациенты которых могут получить прямую пользу от лечения, особенно тем, у кого в настоящее время нет вариантов лечения.Целевые группы могут включать людей с множественными сопутствующими заболеваниями (для каждого из них оценивается эффект лечения) или состояниями с признаками ускоренного старения (например, рак у выживших после лечения, ВИЧ, диабет, связанный с ожирением, и прогероидные синдромы). Испытания, направленные на старение клеток, также могут касаться тканеспецифических состояний, которые можно лечить местным введением лекарств, таких как остеоартрит или кожные заболевания. Испытания также могут касаться возрастных нарушений реакции на стрессовые факторы, такие как инфекции или хирургическое вмешательство.После оценки эффективности и безопасности в таких исследованиях, клинические испытания могут быть расширены до профилактических исследований с участием лиц, подверженных риску таких состояний.

TGN разработает стандартные рабочие процедуры, клинические протоколы и протоколы анализов, а также набор биомаркеров, которые можно будет использовать в исследованиях для оценки воздействия лекарств на несколько механизмов старения и клинических исходов, а также для сбора данных из нескольких исследований. Набор биомаркеров в испытаниях также полезен для оценки влияния нацеливания одного процесса старения на другие процессы старения.TGN будет предоставлять биостатистические консультации, биобанкинг и помощь в соблюдении нормативных требований FDA. Он также будет координировать усилия нескольких учреждений и служить ресурсом для обучения и обмена информацией.

Анализ данных и образцов из предыдущих или текущих исследований

Анализ данных или образцов из предыдущих испытаний соединений, рассматриваемых для повторного использования в качестве сенолитиков или сеноморфных средств, может помочь в разработке исследований для проверки их потенциала для этого использования, например, путем выявления дополнительных пораженных путей или фенотипов.Такой анализ еще не проводился для данных или образцов из испытаний сенолитиков для лечения рака. Базы данных и репозитории рака могут быть полезны при оценке потенциальных эффектов сенолитических или сеноморфных препаратов. В рамках проекта «Атлас генома рака» (TCGA), поддерживаемого NCI, было собрано и проанализировано более 20 000 биологических образцов из 11 000 случаев рака различных типов. Он может предоставить клинические, фармакологические, патологические, генетические и молекулярные данные от лиц, участвовавших в этих исследованиях (https: // www.race.gov/about-nci/organization/ccg/research/structural-genomics/tcga). Такие данные можно анализировать для оценки взаимосвязи различных элементов SASP с различными фенотипами, эффектами лекарств и клиническими исходами. Другие источники данных и образцов, связанные с раком, включают Национальную сеть клинических испытаний NCI и Cancer Moonshot Biobank.

Данные и образцы клинических испытаний вмешательств, которые могут повлиять на механизмы старения, например, испытания метформина и изменения образа жизни в рамках Программы профилактики диабета, могут быть проанализированы для оценки воздействия лечения на клеточное старение или компоненты SASP, а также взаимосвязь этих эффектов с клинические исходы и другие механизмы старения.Аналогичный анализ можно провести на образцах и данных наблюдательных когортных исследований. Для исследований с генетическими данными, но без молекулярных данных о биопрепаратах (например, Биобанк Великобритании), можно использовать методы менделевской рандомизации для определения фенотипов SASP или связанных со старением молекулярных изменений, для которых установлены генетические отношения.

Лекарственные взаимодействия

Пожилые потенциальные люди, которые могут быть кандидатами на сенолитическое или сеноморфное лечение, часто имеют несколько сосуществующих состояний и принимают несколько лекарств.Таким образом, важно учитывать сенолитические и сеноморфные лекарственные взаимодействия (DDI), а также взаимодействия лекарств с заболеванием.

Ключевой тип DDI состоит из воздействия одного препарата на выведение или транспортировку других. FDA требует информации о существенных фармакокинетических DDI в процессе утверждения лекарств. Следовательно, существует значительная информация DDI о лекарствах, одобренных FDA, которые рассматриваются для использования в качестве сенолитиков. Руксолитиниб, дазатиниб, навитоклакс и рапамицин метаболизируются путем цитохрома P450 CYP3A и взаимодействуют с множеством других препаратов, которые ингибируют или индуцируют этот путь.Абсорбция дазатиниба в желудке зависит от pH и, таким образом, может зависеть от применения антацидов или ингибиторов протонной помпы. Некоторые ингибиторы JAK снижают клиренс креатинина (57), что указывает на возможные фармакокинетические эффекты на другие препараты, зависящие от почечной экскреции.

Меньше информации о фармакокинетике DDI имеется по флавоноидам, таким как кверцетин или физетин (который также метаболизируется CYP3A). Для этих и других потенциальных сенолитических / сеноморфных соединений, не одобренных FDA, будет важным испытание взаимодействий in vitro и in vivo с использованием утвержденных субстратов и ингибиторов ферментов и переносчиков индекса (58).

Фармакодинамические взаимодействия сенолитиков или сеноморфных препаратов могут иметь не меньшее значение, чем фармакокинетические взаимодействия. Клинические фармакологические исследования возможных побочных эффектов взаимодействия с лекарствами, широко используемыми пожилыми людьми, будут важны для принятия решения о том, является ли одновременное применение безопасным, требует осторожности или должно быть противопоказано различным группам пациентов. Связанное с рапамицином снижение гемоглобина и гематокрита (47) указывает на необходимость оценки безопасности у пациентов, принимающих антикоагулянтные и антитромбоцитарные препараты.Снижение тромбоцитов, вызванное дазатинибом, может увеличить риск кровотечений у многих пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и другими состояниями, которые принимают эти препараты. Его влияние на задержку жидкости может усугубляться применением нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) и может повышать риск у многих пожилых пациентов с сердечной недостаточностью, принимающих НПВП для лечения остеоартрита. Продление реполяризации сердца дазатинибом также может быть особенно опасным для пациентов, принимающих препараты с эффектами реполяризации потенциала действия, такие как ранолазин.

Чрезвычайно высокая распространенность полипрагмазии (например, ≥5 препаратов) среди пожилых людей создает высокую вероятность лекарственного взаимодействия с сенолитическими или сеноморфными препаратами. Разнообразные комбинации лекарств, обнаруживаемые у пожилых пациентов, могут способствовать неожиданным взаимодействиям, которые не были бы обнаружены в исследованиях взаимодействий с одним лекарством или ферментом, метаболизирующим лекарство. Испытание рапамицина на относительно здоровых пожилых людях выявило значительную полипрагмазию, хотя люди, принимавшие препараты, влияющие на активность CYP3A, были исключены (47).Высокая степень полипрагмазии отражает высокую распространенность множественных сопутствующих заболеваний и факторов риска у пожилых людей. Мультиморбидность, не зависящая от DDI, может создавать проблемы при употреблении сенолитических или сеноморфных препаратов. Таким образом, например, необходима информация о том, в какой степени снижение гематокрита и гемоглобина рапамицином может усугубить субклиническую анемию, которая часто встречается у пожилых людей. Повышенный риск, который представляют собой ингибиторы JAK для опоясывающего герпеса и других инфекций (57), следует рассматривать с точки зрения их использования в качестве сеноморфных препаратов, особенно у пожилых людей с возрастными нарушениями иммунной функции.

Ключевым вопросом для сенолитической терапии является степень, в которой периодическое или хроническое введение может уменьшить нежелательные лекарственные взаимодействия. Также необходимы данные о рисках и преимуществах временной приостановки приема лекарств, которые отрицательно взаимодействуют с сенолитиками во время периодического приема сенолитиков. Фармакокинетических данных об элиминации лекарств, вероятно, будет недостаточно для полного ответа на этот вопрос, поскольку клинические эффекты многих лекарств сохраняются даже после того, как они полностью исчезнут.

Дополнительная биологическая и клинико-патологическая информация, необходимая для дизайна и анализа клинических испытаний

Дополнительная информация о старении клеток человека и его связи с клиническими исходами будет иметь решающее значение для оптимизации дизайна будущих фаз I и II испытаний сенолитиков и сеноморфных средств и интерпретации их результатов.Такие данные могут быть предоставлены исследованиями на людях, включая (но не ограничиваясь ими) исследования ранней фазы вмешательства, которые могут решить следующие проблемы дизайна испытаний.

Старые типы клеток и / или компоненты SASP для цели

Различные типы стареющих клеток можно охарактеризовать разными клеточными маркерами и компонентами SASP. Создание и проверка панели маркеров для различения типов стареющих клеток в разных тканях может прояснить их связь с существующими клиническими состояниями и риском будущих событий.Эти маркеры также можно использовать для оценки степени и специфичности киллинга или модификации фенотипа сенолитическими и сеноморфными препаратами.

Выбор целевых групп клинического исследования и методов для скрининга потенциальных участников

Приведенная выше информация может быть использована для определения взаимосвязи между бременем стареющих клеток и серьезностью заболевания и риском, что необходимо для выявления лиц с высоким бременем, которые могут иметь наиболее благоприятное соотношение потенциальных выгод и рисков от сенолитического или сеноморфного лечения.

Определение графика приема сенолитических препаратов

Потенциальная прерывистая сенолитическая лекарственная терапия «насквозь» ставит задачу оценки скорости повторного накопления стареющих клеток после эпизода лечения и взаимосвязи повторного накопления с изменениями клинического статуса. Это, вероятно, потребует разработки специфических маркеров старения, которые можно будет повторно оценивать у человека.

Возможные меры по определению типа стареющих клеток, их нагрузки и вовлеченности в клинические исследования

Разработка индикаторов типа стареющих клеток и нагрузки для тканей, из которых невозможно отобрать пробы (или отобрать образцы повторно) в испытательных скринах или участниках, представляет собой проблему.Эту проблему можно было бы решить, если бы можно было найти корреляцию между количеством стареющих клеток (или изменениями в нагрузке) в таких тканях и уровнями (или изменениями уровней) маркеров SASP в крови (например, IL-1α, IL-2, MMP-2). , и MMP-9) или с маркерами старения в тканях, которые можно отбирать, таких как кожа или подкожный жир (например, p16, p21 или Sa-βgal).

Меры лечения

Поскольку сенолитики и сеноморфики влияют не только на клеточное старение, но и на другие механизмы, важна оценка благоприятных и неблагоприятных побочных эффектов.Измерения этих эффектов могут также облегчить анализ степени, в которой эффекты лечения на первичный результат опосредованы воздействием на клеточное старение или другими механизмами. Кроме того, учитывая присутствие стареющих клеток во многих тканях, испытания системно вводимых сенолитиков или сеноморфиков должны оценивать влияние на множественные связанные со старением изменения и факторы риска, а также индикаторы других механизмов старения, на которые влияет старение клеток.

Возможные преимущества стандартизации мер

Сравнение результатов сенолитических и сеноморфных вмешательств в исследованиях и анализ объединенных данных, где это необходимо, улучшили бы понимание эффектов сенолитических и сеноморфных препаратов.Для этого потребуется базовый набор протоколов для хранения образцов, анализов и процедур контроля качества, которые можно было бы использовать в исследованиях или проводить в центральной лаборатории для нескольких исследований. Такие общие показатели результатов для нескольких связанных со старением фенотипов и факторов риска, а также индикаторы состояния предполагаемых механизмов старения могли бы улучшить понимание широты воздействия сенолитических и сеноморфных вмешательств.

Заключение

Ключевые соображения семинара, обсуждавшиеся в предыдущих разделах, кратко представлены в Таблице 1.

Благодарности

Спикеры семинара: Джуди Кампизи, доктор философии (Институт Бака по исследованию старения), Элис Чен, доктор медицины (Национальный институт рака), Марко Демария, доктор философии (Университет Гронингена), Латония Хиксон, доктор медицины (клиника Майо), Джейми Джастис, доктор философии (Медицинская школа Уэйк Форест), Дин Келлог, доктор медицины, доктор наук (Центр медицинских наук Техасского университета в Сан-Антонио и GRECC, Система здравоохранения ветеранов Южного Техаса), Джеймс Киркланд, доктор медицины, доктор философии (клиника Мэйо), Энтони Летай, доктор медицины (Институт рака Дана-Фарбер), Ануп Намбиар, доктор медицины (Техасский университет в Сан-Антонио), Лаура Нидернхофер, доктор медицины, доктор философии (Университет Миннесоты), Вивиана I.Перес, доктор философии (Университет штата Орегон), Пол Роббинс, доктор философии (Университет Миннесоты), Дженис Шварц, доктор медицины (Калифорнийский университет в Сан-Франциско), Наоко Такебе, доктор медицины, доктор философии (Национальный институт рака), Тамара Чкония, доктор философии (Майо Clinic), Ян ван Дерсен, доктор философии (клиника Майо), Томас фон Зглиницки, доктор философии (Университет Ньюкасла), и Минг Сю, доктор философии (Университет Коннектикута). Мы высоко ценим вклад следующих дополнительных участников в обсуждения вышеуказанных тем на семинаре: Харви Коэн, доктор медицины (Университет Дьюка), Стивен Кричевски, доктор философии (Медицинская школа Уэйк Форест), Джордж Кучел, доктор медицины, (Университет Коннектикута), Наталья Митина, PhD (Healthspan Diagnostics, LLC), Николас Муси (Техасский университет, Сан-Антонио), Марк Рамис-Кастеллторт, PhD (Senolytic Therapeutics Inc.), Эшли Роско, доктор медицины (Университет штата Огайо), и Деннис Виллареал, доктор медицины (Медицинский колледж Бейлора).

Финансирование

Не объявлено.

Конфликт интересов

Не объявлено.

Вклад автора

Все авторы в равной степени участвовали в написании статьи.

Заявление об отказе от ответственности

Ответственность за содержание этой рукописи несут исключительно авторы и не обязательно отражают официальную точку зрения Национального института старения, Национальных институтов здравоохранения или U.S. Департамент здравоохранения и социальных служб.

Список литературы

Топпил

H

Риабоволь

К

Сенолитики: переходный мост между клеточным старением и старением организма

Front Cell Dev Biol

2019

7

367

Горгулис

В

Адамс

PD

Алимонти

A

Клеточное старение: определение пути вперед

Ячейка

2019

179

4

813

827

Басисты

N

Kale

A

Jeon

OH

Протеомный атлас секретомов, связанных со старением, для развития биомаркеров старения

ПЛоС Биол

2020

18

1

e3000599

Басисты

N

Kale

A

Patel

S

Campisi

J

Schilling

B

Возможности протеомики для мониторинга секреторных фенотипов, связанных со старением, и не только: к клиническим приложениям

Эксперт Рев Протеомика

2020

17

297

308

Сюй

кв.м

Пирцхалава

Т

Фарр

JN

Сенолитики улучшают физическое состояние и увеличивают продолжительность жизни в пожилом возрасте

Нат Мед

2018

24

8

1246

1256

да Силва

ПФЛ

Огродник

М

Кучерявенко

О

Эффект наблюдателя способствует накоплению стареющих клеток in vivo

Ячейка старения

2019

18

1

e12848

Киркланд

JL

Tchkonia

T

Клеточное старение: трансляционная перспектива

EBioMedicine

2017

21

21

28

Myrianthopoulos

В

Evangelou

K

Vasileiou

PVS

Старение и сенотерапия: новое направление в терапии рака

Pharmacol Ther

2019

193

31

49

Чжу

Я

Тчкония

Т

Пирцхалава

Т

Ахиллесова пята стареющих клеток: от транскриптома до сенолитических препаратов

Ячейка старения

2015

14

4

644

658

Fuhrmann-Stroissnigg

H

Ling

YY

Zhao

J

Идентификация ингибиторов HSP90 как нового класса сенолитиков

Нац Коммуна

2017

8

1

422

Юсефзаде

МДж

Zhu

Y

McGowan

SJ

Фисетин — сенотерапевтическое средство, продлевающее здоровье и продолжительность жизни

EBioMedicine

2018

36

18

28

ван Дерсен

JM

Сенолитическая терапия для здорового долголетия

Наука

2019

364

6441

636

637

Русский

ТДж

Aziz

A

Meyer

CF

Swenson

BL

van Deursen

JM

Baker

DJ

Удаление стареющих глиальных клеток предотвращает тау-зависимую патологию и снижение когнитивных функций

Природа

2018

562

7728

578

582

Чайлдс

BG

Baker

DJ

Wijshake

T

Conover

CA

Campisi

J

van Deursen

JM

Старые пенистые клетки интимы вредны на всех стадиях атеросклероза

Наука

2016

354

6311

472

477

Hsu

Б

Visich

J

Genovese

M

Безопасность, переносимость, фармакокинетика и клинические результаты лечения болезненного остеоартрита коленного сустава сенолитической молекулой UBX0101 [аннотация]

Остеоартр Карти

2020

28

доп.1

S479

S480

Ганди

л

Camidge

DR

Ribeiro de Oliveira

M

Фаза I исследования Navitoclax (ABT-263), нового ингибитора семейства Bcl-2, у пациентов с мелкоклеточным раком легкого и другими солидными опухолями

Дж. Клин Онкол

2011

29

7

909

916

Дэн

Дж

Isik

E

Fernandes

SM

Brown

JR

Letai

A

Davids

MS

Ингибирование тирозинкиназы Брутона увеличивает зависимость BCL-2 и повышает чувствительность к venetoclax при хроническом лимфолейкозе

Лейкемия

2017

31

10

2075

2084

Амолины

МВт

Благг

БС

Ингибиторы Hsp90 из натуральных продуктов: потенциальные возможности для открытия новых лекарств

Мини Рев Мед Хим

2009

9

2

140

152

Куммар

S

Gutierrez

ME

Gardner

ER

Фаза I испытания 17-диметиламиноэтиламино-17-деметоксигельданамицина (17-DMAG), ингибитора белка теплового шока, вводимого два раза в неделю пациентам с запущенными злокачественными новообразованиями

евро J Рак

2010

46

2

340

347

Солит

DB

Osman

I

Polsky

D

Фаза II исследования 17-аллиламино-17-деметоксигельданамицина у пациентов с метастатической меланомой

Clin Cancer Res

2008

14

24

8302

8307

Секвист

LV

Geter

S

Senzer

NN

Активность IPI-504, нового ингибитора белка теплового шока 90, у пациентов с немелкоклеточным раком легкого, определенным на молекулярном уровне

Дж. Клин Онкол

2010

28

33

4953

4960

Вагнер

AJ

Chugh

R

Rosen

LS

Исследование фазы I ингибитора HSP90 гидрохлорида ретаспимицина (IPI-504) у пациентов со стромальными опухолями желудочно-кишечного тракта или саркомами мягких тканей

Clin Cancer Res

2013

19

21

6020

6029

.

Чжоу

D

Liu

Y

Ye

J

Модель повреждения сетчатки крысы предсказывает потенциальные клинические нарушения зрения, вызванные ингибиторами Hsp90

Toxicol Appl Pharmacol

2013

273

2

401

409

До

К

Speranza

G

Chang

LC

Ориентация на клеточное старение предотвращает возрастную потерю костной массы у мышей

Нат Мед

2017

23

9

1072

1079

Шапиро

GI

Kwak

E

Dezube

BJ

Первое исследование фазы I повышения дозы на людях не ансамицинового ингибитора HSP90 второго поколения, AT13387, у пациентов с распространенными солидными опухолями

Clin Cancer Res

2015

21

1

87

97

Сперанца

г

Андерсон

L

Чен

AP

Первое исследование ингибитора эпихаперома PU-H71 на людях: клинические результаты и метаболический профиль

Инвестируйте новые лекарства

2018

36

2

230

239

Schafer

МДж

Белый

TA

Иидзима

K

Клеточное старение опосредует фиброзное заболевание легких

Нац Коммуна

2017

8

14532

Суваков

S

Cubro

H

Белый

WM

Ориентация на старение улучшает ангиогенный потенциал мезенхимальных стволовых клеток, полученных из жировой ткани, у пациентов с преэклампсией

Биол Разница по полу

2019

10

1

49

Кинтас-Кардама

А

De Souza Santos

FP

Kantarjian

H

Динамика и лечение цитопений, связанных с терапией дазатинибом, у пациентов с хроническим миелолейкозом в хронической фазе после неэффективности иматиниба

Рак

2009

115

17

3935

3943

Хьюз

TP

Laneuville

P

Rousselot

P

Заболеваемость, исходы и факторы риска плеврального выпота у пациентов, получающих терапию дазатинибом по поводу лейкоза с положительной филадельфийской хромосомой

Haematologica

2019

104

1

93

101

Фан

С

Jutant

EM

Tu

L

Дазатиниб увеличивает проницаемость эндотелия, что приводит к плевральному выпоту

Eur Respir J

2018

51

1

1701096

.01096-2017.33.

Брюнинг

А

Ингибирование передачи сигналов mTOR кверцетином при лечении и профилактике рака

Противораковые агенты Med Chem

2013

13

7

1025

1031