Лечение органов дыхания

Каждый человек с раннего возраста знаком с заболеваниями дыхательной системы. Часто они перерастают в хронические формы, которые трудно поддаются излечению. Поэтому для предупреждения последствий важна не только своевременная диагностика и грамотно подобранная терапия, но и профилактика.

«Сакрополь» – санаторий с лечением органов дыхания в Крыму. Комплекс оснащен медицинским оборудованием, позволяющим применять терапевтические и профилактические методики при разных группах заболеваний.

Показания к санаторно-курортному лечению

Возрастная категория: взрослые.
Класс заболеваний X: болезни органов дыхания.
Группа: хронические болезни нижних дыхательных путей; другие болезни органов дыхания.
Лечение пневмонии:

• пневмония затяжного характера (более 8 недель) с установленными клиническими и рентгенологическими остаточными изменениями в легких, без бронхоэктазов с гнойной мокротой, при наличии легочно-сердечной недостаточности не выше II степени.

Примечание: пульмонологический санаторий в Крыму принимает пациентов с сердечно-легочной недостаточностью не выше II степени.

Лечение бронхита:

• простого, слизисто-гнойного хронического;
• трахеобронхита;
• хронического обструктивного;
• профессионального характера (токсической этиологии) в фазе стойкой ремиссии.

Примечание: лечебные программы применяются при бронхитах, осложненных сердечно-легочной недостаточностью не выше II степени.

Другие патологии дыхательной системы:

• лечение бронхиальной астмы (неаллергической), с нечастыми легкими приступами, при которой легочная недостаточность не тяжелее II степени;
• хронической респираторной недостаточности;
• пневмосклероза при легочно-сердечной недостаточности не выше I степени, развившегося вследствие инфекционных заболеваний, наличия хронических очагов воспалений в органах дыхания.

Фаза: хроническая.
Стадия: ремиссии.
Осложнение: без осложнений.
Условия оказания: санаторно-курортные и амбулаторно-курортные по основному заболеванию.

Санаторно-курортные услуги по сопутствующим заболеваниям оказываются за дополнительную плату.

Противопоказания для санаторно-курортного лечения (приказ № 281н Минздрава России от 05.05. 2015 года):

1. Острая, подострая стадия заболеваний, инфекционные болезни до конца периода изоляции.
2. Обострение хронических болезней.
3. Носительство возбудителей инфекций.
4. Паразитарные инвазии.
5. Заразные кожные, глазные инфекции.
6. Инфекции, передающиеся через половой контакт.
7. Активная фаза туберкулеза (любая локализация).
8. Состояния с сопутствующим стойким болевым синдромом, при которых необходим прием наркотических анальгетиков, психотропных средств (списки 1 и 2 перечня наркотических, психотропных препаратов, их прекурсоров, оборот которых контролируется государством).
9. Злокачественные новообразования, требующие проведения противоопухолевой терапии, включая химиотерапию.
10. Новообразования неясного происхождения, если отсутствует письменное подтверждение пациента, что он предупрежден о возможных осложнениях после прохождения санаторно-курортной терапии.
11. Психические, поведенческие расстройства (стадия обострения, неустойчивой ремиссии). Другие состояния, небезопасные для окружающих и самого пациента.
12. Психические расстройства, спровоцированные приемом психоактивных препаратов.
13. Эпилепсия – с ремиссией менее полугода (для санаториев непсихоневрологического профиля), а также в резистентной к терапии форме, с текущими приступами.
14. Кахексия (крайнее истощение) различного происхождения.

Методика оздоровления дыхательной системы. Лечение астмы в Крыму

Оздоровительная программа состоит из двух этапов:

• функциональная, лабораторная диагностика органов дыхания;
• индивидуальный подбор комплекса процедур на базе Немецкого Института Индивидуальной Системной Биокоррекции «Новенталис».

«Сакрополь» – санаторий для астматиков и пациентов, страдающих другими патологиями органов дыхания, где практикуются безопасные немедикаментозные оздоровительные методики. Курс индивидуальной системной биокоррекции проводимой в блоке с повышенным содержанием кислорода, устраняет проблемы здоровья на клеточном уровне.

Лечебное действие усиливается приемом гипероксигалотерапии, сухих углекислых ванн, а также методами бальнеогрязелечения, аппаратной физиотерапии, лечебной физкультуры, диетотерапии и климатолечения. Индивидуальное лечение органов дыхания в Крыму каждого пациента нашего санатория проходит под контролем опытных специалистов.

Лечебная программа

Комплекс санаторно-курортного лечения больных с болезнями органов дыхания
в условиях оксигеновоздействия на базе Немецкого Центра Индивидуальной Системной Биокоррекции «НОВЕНТАЛИС»

Модель пациента

Возрастная категория: взрослые
Класс болезней X: болезни органов дыхания
Группа заболеваний: хронические болезни нижних дыхательных путей; другие болезни органов дыхания
Код по МКБ-10:

• J12 Вирусная пневмония, не классифицированная в других рубриках
• J13 Пневмония, вызванная Streptococcus pneumoniae
• J14 Пневмония, вызванная Haemophilus influenzae [палочкой Афанасьева-Пфейффера]
• J15 Бактериальная пневмония, не классифицированная в других рубриках
• J16 Пневмония, вызванная другими инфекционными возбудителями, не классифицированная в других рубриках
• J17* Пневмония при болезнях, классифицированных в других рубриках
• J18 Пневмония без уточнения возбудителя
• J41 Простой и слизисто-гнойный хронический бронхит
• J42 Хронический бронхит неуточненный
• J44.8 Другая уточненная хроническая обструктивная легочная болезнь
• J45.1 Неаллергическая астма
• J96.1 Хроническая респираторная недостаточность

Фаза: хроническая
Стадия: ремиссии
Осложнение: без осложнений
Условия оказания: санаторно-курортные и амбулаторно-курортные по основному заболеванию.

Санаторно-курортные услуги по сопутствующим заболеваниям оказываются за дополнительную плату.

ПОДРОБНЕЕ

Рекомендуемые дополнительные медицинские услуги (оказываются за дополнительную плату и назначаются лечащим врачом)

• Консультации врачей-специалистов
• Рефлексотерапия при болезнях нижних дыхательных путей и легочной ткани
• Подводный душ-массаж
• Восходящий душ
• Сухие углекислые ванны
• Грязевые аппликации
• Карбокситерапия
• Стоунтерапия
• Тренажеры Парк-ленд
• Вагинальные орошения
• Вагинальные грязевые тампоны
• Ректальные грязевые тампоны
• Микроклизмы
• Орошения десен
• Грязевые аппликации на десны
• Кислородная пенка
• Фито-концентраты для ванн
• Магниевый концентрат для ванн «Бишофит»
• Стоматологические услуги (лечение кариеса, художественная реставрация, рентгенконтроль)
• Эстетическая косметология
• Лабораторные исследования
• Эндоскопические исследования (гастроскопия, ректороманоскопия)
• Функциональные исследования (ЭКГ, УЗИ)

Лечение заболеваний органов дыхания

Лечение заболеваний органов дыхания

Группа заболеваний: хронические болезни нижних дыхательных путей; другие болезни органов дыхания Коды по МКБ-10: J41, J42, J43.1, J43.2, J43.8, J43.9, J44.8, J45.8, J45.1, J45.9, J47, J96.1, J96.9, J98.3

Заболевания органов дыхания в настоящее время получили широкое распространение. Это связано и с изменениями окружающей среды, наследственностью, курением.

Именно органы дыхания наиболее подвержены отрицательному воздействию загрязненной окружающей среды, а продолжительные холодные зимы наносят серьезный удар по иммунитету и способствуют частым простудным заболеваниям.

После того, как человек бросает курить, его легкие постепенно очищаются от веществ, содержащихся в табачном дыме, и восстанавливает свои функции примерно за один год.

Регулярные кардионагрузки позволяют увеличить емкость легких и улучшить их работу. Бег трусцой, плавание, велосипед, час ходьбы пешком в день сделают выносливыми не только дыхательную систему, но и весь организм.

Правильное питание и регулярная физическая активность освободят от лишних килограммов тело, а легкие – от работы с перегрузкой.

Как бы ни был велик соблазн провести выходные дни в городе, жителям мегаполиса лучше почаще бывать на природе. Всего несколько часов в лесу или у озера позволят начать свободнее дышать.

ПОКАЗАНИЯ:

• Хроническая обструктивная болезнь легких;
• Бронхиальная астма;
• Очаговый и диффузный пневмосклероз;
• Хронический бронхит;
• Хронические неспецифические заболевания легких;
• Хронические тонзиллиты, риниты, фарингиты, ларингиты;
• Бронхоэктатическая болезнь;
• Склонность к частым простудным и респираторным заболеваниям;
• Состояние после перенесенной пневмонии.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ:

• Бронхиальная астма с частыми и (или) тяжелыми приступами удушья, гормонозависимая неконтролируемая бронхиальная астма;
• Все болезни дыхательной системы, сопровождающиеся сердечно-легочной недостаточностью выше II стадии;
• Заболевания респираторной системы воспалительного генеза в острый период или в фазе обострения хронического процесса.;
• Общие противопоказания к направлению на санаторно-курортное лечение согласно Приказу Минздрава России от 07.06.2018 № 321н «Об утверждении перечней медицинских показаний и противопоказаний для санаторно-курортного лечения».;

Наши врачи специалисты проконсультируют Вас и назначат лечение.

ЛЕЧЕНИЕ:

• Климатолечение;
• Бальнеотерапия;
• Ингаляции с лечебными травами и масляные ингаляции;
• Физиотерапия;
• Лечебная физкультура;
• Скандинавская ходьба;
• Термогидротерапия;
• Рациональное питание (диетическое).

ОЖИДАЕМЫЙ ЭФФЕКТ:

• Уменьшение кашля, одышки;
• Предупреждение развития осложнений и рецидивов заболеваний органов дыхания;
• Снижение активности проявления аллергических реакций;
• Улучшение качества сна ;
• Улучшение общего самочувствия.

Диагноз умершего с коронавирусом в Витебске: Неуточненная пневмония. Почему врачи не следовали рекомендациям ВОЗ?

Родственникам умершего заслуженного артиста Беларуси Виктора Дашкевича выдали официальный диагноз. В нем указано, что причиной смерти стала “неуточненная пневмония”.

В свидетельстве о смерти в соответствующей графе только шифр из латинских букв и цифр: j18.9, передает Радио «Рацыя». Это идентификационный номер болезни согласно Международной классификации болезней (МКБ-10).

Данная классификация принята ВОЗ и используется практически всеми странами мира вплоть до 2022 года. В том числе и Минздравом Беларуси.

Согласно данному классификатору, код j18.9 означает, что возбудитель, вызвавший болезнь, не известен.

В то же время, согласно рекомендациям ВОЗ, для обозначения вируса COVID-19 в диагнозе необходимо указывать код U07.1.

“Используйте этот код, когда COVID-19 был подтвержден лабораторными исследованиями, независимо от тяжести клинических признаков или симптомов. При необходимости используйте дополнительный код для выявления пневмонии или других проявлений”, — говорится в рекомендациях ВОЗ.

Диагноз, выданный врачами родственникам умершего Виктора Дашкевича

Таким образом ВОЗ прямо говорит, что при выявленном коронавирусе надо указывать код U07.1 и дополнять его другими кодами, если кроме COVID-19 были другие заболевания.

Мало того, в ВОЗ рекомендовали указывать другой код U07.2. В тех «случаях, когда COVID-19 диагностирован клинически или эпидемиологически, но лабораторные исследования неубедительны или недоступны».

Минздрав подтвердил, что у умершего пациента был коронавирус

Ранее Телеграф сообщил, что Минздрав Беларуси опубликовал 31 марта в своем телеграм-канале некоторые частичные данные по распространению коронавируса в стране. В министерстве также признали факт смерти пациента с выявленным в крови коронавирусом.

Замначальника главного управления по здравоохранению Витебского облисполкома Людмила Ковалева рассказала в эфире телеканала «Беларусь 1», что в процессе лечения при проведении обследования дополнительно у пациента был выявлен положительный результат на РНК коронавируса, передает БелТА.

«Поступил он в наше лечебное учреждение с диагнозом «двусторонняя пневмония». Кроме того, у него были сопутствующие заболевания: хроническая обструктивная болезнь легких (тяжелое течение), эмфизема, пневмосклероз, дыхательная недостаточность 2-й степени, хроническое легочное сердце, хроническая недостаточность кровообращения, что осложнило течение основного заболевания, привело к дыхательной недостаточности», — рассказала Людмила Ковалева.

Зачем нужна МКБ и правильные коды болезней в диагнозах

Ранее Всемирная организация здравоохранения заявила, что наименования заболеваний требуются для того, чтобы давать характеристику различным аспектам профилактики, распространения, передачи, тяжести течения, а также лечения заболеваний. Задачей ВОЗ является обеспечение готовности и реагирования на заболевания человека, в связи с чем ВОЗ указывает официальные наименования заболеваний в Международной классификации болезней (МКБ).

Таким образом, врачи обязаны давать правильные цифровые коды в диагнозах, чтобы можно было вовремя реагировать и предотвратить распространение болезней.

Согласно рекомендациям, разработанным ранее совместно со Всемирной организацией по охране здоровья животных (МЭБ), а также Продовольственной и сельскохозяйственной организацией Объединенных Наций (ФАО), 11 февраля 2020 г. ВОЗ объявила о присвоении коронавирусному заболеванию, вызванному вирусом SARS-CoV-2, названия «COVID‑19».

Идиопатический фиброз легких: MedlinePlus Genetics

Идиопатический фиброз легких — это хроническое прогрессирующее заболевание легких. Это состояние вызывает образование рубцовой ткани (фиброз) в легких, что делает легкие неспособными эффективно транспортировать кислород в кровоток. Заболевание обычно поражает людей в возрасте от 50 до 70 лет. Идиопатический фиброз легких относится к группе состояний, называемых интерстициальными заболеваниями легких (также известными как интерстициальные заболевания легких), которые описывают заболевания легких, сопровождающиеся воспалением или рубцеванием легких.

Наиболее частыми признаками и симптомами идиопатического легочного фиброза являются одышка и постоянный сухой отрывистый кашель. Многие пострадавшие также теряют аппетит и постепенно теряют вес. У некоторых людей с идиопатическим фиброзом легких в результате нехватки кислорода появляются расширенные и закругленные кончики пальцев рук и ног (дубинка). Эти особенности относительно неспецифичны; не у всех с этими проблемами со здоровьем есть идиопатический фиброз легких. Другие респираторные заболевания, некоторые из которых менее серьезны, могут вызывать аналогичные признаки и симптомы.

У людей с идиопатическим легочным фиброзом рубцевание легких со временем увеличивается до тех пор, пока легкие перестают обеспечивать органы и ткани организма достаточным количеством кислорода. У некоторых людей с идиопатическим фиброзом легких развиваются другие серьезные заболевания легких, включая рак легких, сгустки крови в легких (легочная эмболия), пневмония или высокое кровяное давление в кровеносных сосудах, снабжающих легкие (легочная гипертензия). Большинство пораженных людей выживают от 3 до 5 лет после постановки диагноза.Однако течение болезни сильно варьируется; некоторые пораженные люди серьезно заболевают в течение нескольких месяцев, в то время как другие могут жить с этим заболеванием в течение десятилетия или дольше.

В большинстве случаев идиопатический фиброз легких встречается только у одного человека в семье. Эти случаи описаны как спорадические. Однако у небольшого процента людей с этим заболеванием есть по крайней мере еще один больной член семьи. Когда идиопатический фиброз легких возникает у нескольких членов одной семьи, он известен как семейный фиброз легких.

Международная классификация болезней (МКБ), коды

Примечание: следующие условия определяются конкретными кодами МКБ для смертности eWoRLD. данные. Для некоторых состояний данные о смертности для более ранних версий МКБ не представлены. в eWoRLD, потому что 1) эти условия изначально не были включены в более ранние версии отчетов по эпиднадзору за заболеваниями легких на рабочем месте (WoRLD), в которых основное внимание уделялось болезни легких, связанные с добычей полезных ископаемых (например,ж, пневмокониозы) и 2) информация о отрасли и профессии не были доступны в Национальном центре здравоохранения Статистические данные о нескольких файлах данных о причинах смерти для определения пропорциональной смертности соотношения.

Астма

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Астма	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Астма Внешняя астма Внутренняя астма Астма неуточненная	493	Астма Преимущественно аллергическая астма Астма неаллергическая Смешанная астма Астма неуточненная	J45
					Астматический статус	J46

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ)

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Бронхит неуточненный	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Бронхит, не уточненный как острый или хронический катаральный с трахеитом n.Операционные системы.	J40
Хронический бронхит	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Простой и слизисто-гнойный хронический бронхит Простой хронический бронхит Слизисто-гнойный хронический бронхит Смешанный простой и слизисто-гнойный хронический бронхит	J41
					Хронический бронхит неуточненный	J42
Эмфизема	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Эмфизема Синдром Маклеода Панлобулярная эмфизема Центрилобулярная эмфизема Другая эмфизема Эмфизема неуточненная	J43
Другая ХОБЛ и бронхоэктазы	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Другая хроническая обструктивная болезнь легких Хроническая обструктивная болезнь легких с острой инфекцией нижних дыхательных путей Хроническая обструктивная болезнь легких с обострением неуточненная Другая уточненная хроническая обструктивная болезнь легких Хроническая обструктивная болезнь легких неуточненная	J44
					Бронхоэктазы	J47
н.Операционные системы. — не указано иное

Гиперчувствительный пневмонит

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Гиперчувствительный пневмонит	Нет дискретного кода ICDA-8		Внешний аллергический альвеолит Легкое фермера Багассоз Легкое птицеводов Суберозис Солод рабочие легкие Легкое рабочих грибов Легкое очистителя коры клена Вентиляционный пневмонит Другой уточненный аллергический альвеолит и пневмонит Аллергический альвеолит и пневмонит неуточненный	495	Гиперчувствительный пневмонит, вызванный органической пылью Легкое фермера Багассоз Легкое любителя птиц Суберозис Легкое солодовода Легкое грибника Легкое очистителя коры клена Легкое кондиционера и увлажнителя воздуха Гиперчувствительный пневмонит, вызванный другой органической пылью Гиперчувствительный пневмонит, вызванный неуточненной органической пылью	J67

Рак легких

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Рак легких	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Злокачественное новообразование трахеи	C33
					Злокачественное новообразование бронха и легкого Главный бронх Верхняя доля, бронх или легкое Средняя доля, бронх или легкое Нижняя доля, бронх или легкое Поражение бронха и легкого, перекрывающееся Бронх или легкое неуточненное	C34

Злокачественная мезотелиома

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Злокачественная мезотелиома	Нет дискретного кода ICDA-8		Нет дискретного кода МКБ-9		Мезотелиома Мезотелиома плевры Мезотелиома брюшины Мезотелиома перикарда Мезотелиома других локализаций Мезотелиома неуточненная	C45

Другие интерстициальные болезни легких

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Другие интерстициальные болезни легких	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Другие интерстициальные болезни легких Альвеолярные и париетоальвеолярные состояния Другие интерстициальные болезни легких с фиброзом Другие уточненные интерстициальные болезни легких Интерстициальные болезни легких неуточненные	J84

Пневмония и грипп

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Пневмония и грипп	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Данные ICD-9 не включены в eWoRLD		Грипп, вызванный выявленным вирусом гриппа Грипп с пневмонией, вирус гриппа идентифицирован Грипп с другими респираторными проявлениями, вирус гриппа идентифицирован Грипп с другими проявлениями, вирус гриппа идентифицирован	J10
					Грипп, вирус не идентифицирован Грипп с пневмонией, вирус не идентифицирован Грипп с другими респираторными проявлениями, вирус не идентифицирован Грипп с другими проявлениями, вирус не идентифицирован	J11
					Вирусная пневмония, n.e.c. Аденовирусная пневмония Респираторно-синцитиальный вирус пневмонии Пневмония, вирус парагриппа Другая вирусная пневмония Вирусная пневмония неуточненная	J12
					Пневмония, вызванная Streptococcus pneumoniae Бронхопневмония, вызванная S.пневмония	J13
					Пневмония, вызванная Hemophilus influenzae Бронхопневмония, вызванная H. influenzae	J14
					Бактериальная пневмония, n.e.c. Пневмония, вызванная Klebsiella pneumoniae Пневмония, вызванная Pseudomonas Пневмония, вызванная стафилококком Пневмония, вызванная стрептококком группы В Пневмония, вызванная другими стрептококками Пневмония, вызванная Escherichia coli Пневмония, вызванная другими аэробными грамотрицательными бактериями Пневмония, вызванная Mycoplasm pneumoniae Другая бактериальная пневмония Бактериальная пневмония неуточненная	J15
					Пневмония, вызванная другими инфекционными организмами, n.e.c. Хламидийная пневмония Пневмония, вызванная другими уточненными инфекционными организмами	J16
					Пневмония, организм неуточненный Бронхопневмония неуточненная Крупозная пневмония неуточненная Гипостатическая пневмония неуточненная Другая пневмония, организм неуточненный Пневмония неуточненная	J18
н.e.c. — не классифицированный в других рубриках

Пневмокониозы

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Асбестоз 1	Асбестоз	515.2	Асбестоз	501	Пневмокониоз, вызванный асбестом и другими минеральными волокнами	J61
Пневмокониоз рабочих угольной промышленности 1	Антракосиликоз Антракоз Легкое шахтеров	515.1	Пневмокониоз угольщиков Антракосиликоз Антракоз Болезнь черного легкого Легкое угольщиков Шахтерская астма	500	Пневмокониоз угольщиков Антракосиликоз Антракоз Легкое угольщиков	J60
Силикоз 1	Силикоз	515.0	Пневмокониоз, вызванный другим кремнеземом или силикатами Пневмокониоз, вызванный тальком Силикотический фиброз (массивный) легкого Силикоз (простой) / (сложный)	502	Пневмокониоз, вызванный пылью, содержащей кремнезем Силикотический фиброз (массивный) легкого Пневмокониоз, вызванный тальковой пылью Пневмокониоз, вызванный другой пылью, содержащей кремнезем	J62
	Силикотуберкулез Туберкулез Кольера Туберкулез шлифовальных машин Туберкулез горняков Туберкулез каменщиков	010	Нет дискретного кода МКБ-9		Нет дискретного кода по МКБ-10
Биссиноз	Нет дискретного кода ICDA-8		Пневмонопатия при вдыхании другой пыли Биссиноз Каннабиноз Болезнь льноводов	504	Заболевание дыхательных путей, вызванное специфической органической пылью Биссиноз Болезнь льноводов Каннабиноз Заболевание дыхательных путей, вызванное другой специфической органической пылью	J66
Неуточненный / Другие пневмокониозы 1, 2	Пневмокониоз, вызванный вдыханием другой неорганической пыли Алюминоз (легкого) Бокситовый фиброз (легкого) Бериллиоз Графитовый фиброз (легкого)	516.0	Пневмокониоз, вызванный прочей неорганической пылью Алюминоз (легкого) Бокситовый фиброз (легкого) Бериллиоз Графитовый фиброз (легкого) Сидероз Станноз	503	Пневмокониоз, вызванный прочей неорганической пылью Алюминоз (легкого) Бокситовый фиброз (легкого) Бериллиоз Графитовый фиброз (легкого) Сидероз Станноз Пневмокониоз, вызванный другой уточненной неорганической пылью	J63
	Прочие, включая пневмокониоз неуточненный	515.9	Пневмокониоз неуточненный	505	Пневмокониоз неуточненный	J64
н.у. — не указано иное; п.e.c. — не классифицированный в других рубриках
1 Смертельные случаи по первопричине, кодированной как J65 (ассоциированный с пневмокониозом с туберкулезом) или J92.0 (плевральная бляшка с присутствием асбеста). в таблице основных причин смерти для этого состояния, если конкретный МКБ-10 код для этого условия указан на оси сущностей.
2 Смерти с кодом J65, закодированным как причина смерти на оси сущностей, включены. на оси сущностей множественная таблица причин смерти, если ни один из следующих кодов указаны как причина смерти на оси сущностей: J61 (Асбестоз), J60 (Угольщики) Пневмокониоз), J62 (силикоз), J63 (другой пневмокониоз) и J64 (неуточненный). Пневмокониоз).

Респираторные заболевания, вызванные химическими парами и парами

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Респираторные заболевания, вызванные химическими парами и парами	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Респираторные заболевания, вызванные химическими парами и парами Бронхит и пневмонит, вызванные парами и парами Острый отек легких, вызванный парами и парами Воспаление верхних дыхательных путей от дыма и паров Другие острые и подострые респираторные заболевания, вызванные дымом и парами Хронические респираторные заболевания, вызванные дымом и парами Заболевания дыхательных путей, вызываемые парами и парами, неуточненные	506	Респираторные заболевания при вдыхании химикатов, газов, дыма и паров Бронхит и пневмонит, вызванные химическими веществами, газами, парами и парами Острый отек легких, вызванный химическими веществами, газами, парами и парами Воспаление верхних дыхательных путей, вызванное химическими веществами, газами, парами и парами, н.e.c. Другие острые и подострые респираторные заболевания, вызванные химическими веществами, газами, парами, и пары Хронические респираторные заболевания, вызванные химическими веществами, газами, парами и парами Другие респираторные заболевания, вызванные химическими веществами, газами, парами и парами Состояние органов дыхания неуточненное, вызванное химическими веществами, газами, парами и парами	J68
н.e.c. — не классифицированный в других рубриках

Респираторный туберкулез

Состояние (как определено для eWoRLD)	ICDA-8 (1968-1978)		МКБ-9 (1979-1998 гг.)		МКБ-10 (1999-настоящее время)
	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды	Рубрики	Коды
Туберкулез органов дыхания 1	Данные ICDA-8 не включены в eWoRLD		Первичная туберкулезная инфекция Первичная туберкулезная инфекция Туберкулезный плеврит первично-прогрессирующий Другой первично-прогрессирующий туберкулез Первичная туберкулезная инфекция неуточненная	010	Туберкулез органов дыхания не подтвержден ни бактериологически, ни гистологически 2 Туберкулез легких без упоминания о бактериологическом или гистологическом подтверждении Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов без упоминания бактериологических или гистологическое подтверждение Туберкулез гортани, трахеи и бронхов без упоминания о бактериологических заболеваниях. или гистологическое подтверждение Туберкулезный плеврит без упоминания о бактериологическом или гистологическом подтверждении Первичный туберкулез органов дыхания без упоминания бактериологического или гистологического подтверждение Другой респираторный туберкулез, без упоминания бактериологического или гистологического подтверждение Туберкулез органов дыхания неуточненный, без упоминания бактериологического или гистологического исследования. подтверждение	A16
			Туберкулез легких Туберкулез легких инфильтративный Туберкулез легких узловой Туберкулез легких с кавитацией Туберкулез бронхов Туберкулезный фиброз легкого Туберкулезный бронхоэктаз Туберкулезная пневмония (любая форма) Туберкулезный пневмоторакс Другой уточненный туберкулез легких Туберкулез легких неуточненный	011
			Туберкулез других органов дыхания Туберкулезный плеврит Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов Изолированный туберкулез трахеи или бронхов Туберкулезный ларингит Другой уточненный туберкулез органов дыхания	012
			Милиарный туберкулез Острый милиарный туберкулез Другой уточненный милиарный туберкулез Милиарный туберкулез неуточненный	018	Милиарный туберкулез Острый милиарный туберкулез одной уточненной локализации Острый милиарный туберкулез множественной локализации Острый милиарный туберкулез неуточненный Другой милиарный туберкулез Милиарный туберкулез неуточненный	A19
			Поздние последствия туберкулеза Поздние проявления респираторного туберкулеза или неуточненного туберкулеза	137.0	Последствия туберкулеза Последствия респираторного и неуточненного туберкулеза	B90.9
1 Смертельные случаи по первопричине, кодированной как J65 (ассоциированный с пневмокониозом с туберкулезом) включены в таблицу основных причин смерти, если код A16, A19 или B90.9 (в eWoRLD все вместе определяется как «респираторный туберкулез») отображается на оси сущностей. Смерти с кодом J65 как причина смерти объекта ось включены в таблицу множественных причин смерти по оси сущностей, если таковых нет из следующих кодов указаны как причина смерти на оси сущностей: A16, A19, и B90.9.
2 Все коды для этой рубрики включены в определенное условие «Респираторные органы. Туберкулез », кроме А16.0 и A16.1.

---

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА:

Министерство здравоохранения, образования и социального обеспечения США. Международная классификация Болезни. Восьмая редакция. Адаптирован для использования в США. Вашингтон, 1967 (Публикация службы общественного здравоохранения № 1693).

Всемирная организация здравоохранения. Международная классификация болезней, девятая редакция, Том 1. Женева, Швейцария: ВОЗ, 1977.

Всемирная организация здравоохранения. Международная классификация болезней и родственных заболеваний Проблемы здоровья, десятая редакция, том 1. Женева, Швейцария: ВОЗ, 1992.

Комплексная оценка заболеваний легких у одиночных животных

Abstract

Во время инфекционного заболевания патогенная нагрузка вызывает воспаление и иммунный ответ, которые вместе способствуют повреждению тканей, часто приводящему к дисфункции органа. Легочная недостаточность у госпитализированных пациентов с COVID-19, инфицированных SARS-CoV2, является одним из таких ярких примеров.Стратегии вмешательства требуют характеристики взаимодействия «хозяин-патоген» путем точной оценки всех вышеупомянутых параметров болезни. Для изучения инфекции у интактных млекопитающих мышей часто используют в качестве важных генетических моделей. Из-за гуманных опасений существует постоянная неудовлетворенная потребность в разработке исследований, которые уменьшают количество мышей, используемых при получении объективных данных. Здесь мы описываем интегрированный метод оценки воспаления легких у мышей, инфицированных Pseudomonas aeruginosa или мышиным гаммагерпесвирусом (MHV) -68.Этот метод сохраняет ресурсы животных, позволяя оценить механизмы заболевания в обоих случаях заражения. Легкие от одной умерщвленной мыши использовали для двух целей: биологических анализов для определения воспаления и инфекционной нагрузки, а также гистологии для оценки структуры ткани. Для этой одновременной оценки нескольких параметров от одной умерщвленной мыши мы ограничиваем фиксацию формалина in-situ и правым легким трупа. Незакрепленное левое легкое немедленно собирают и разделяют на несколько сегментов для биологических анализов, включая определение титра патогенов, оценку уровней цитокинов, вызванных инфекцией, и появление маркеров клеточной смерти. Фиксированное правое легкое in situ затем было обработано для гистологического определения повреждения ткани и подтверждения паттернов гибели клеток, вызванных инфекцией. Этот метод снижает общее использование животных и сводит к минимуму изменчивость между животными, которая возникает в результате умерщвления разных животных для различных типов анализов. Этот метод может быть применен к любому исследованию заболеваний легких у мышей или других млекопитающих.

Образец цитирования: Mandal P, Lyons JD, Burd EM, Koval M, Mocarski ES, Coopersmith CM (2021) Комплексная оценка заболеваний легких у отдельных животных.PLoS ONE 16 (7): e0246270. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0246270

Редактор: Сельвакумар Суббиан, Rutgers Biomedical and Health Sciences, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ

Поступила: 20 мая 2020 г .; Одобрена: 15 января 2021 г .; Опубликован: 8 июля 2021 г.

Авторские права: © 2021 Mandal et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Национальный институт общих медицинских наук (NIGMS) R01-GM072808, T32GM095442 для CMC; NIGMS F32-GM117895 в JDL, Национальный институт злоупотребления алкоголем и алкоголизмом (NIAAA) R01-AA025854 в MKH; Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID) R01-AI020211 для ESM и R21-AI142507 для ESM, Фонд директора CF @ LANTA для PM.

Конкурирующие интересы: НИКАКИЕ авторы не имеют конкурирующих интересов.

Введение

Животные модели необходимы для медицинских исследований, изучающих развитие, гомеостаз, иммунитет, а также механизмы болезни. Национальные институты здравоохранения продолжают подчеркивать необходимость гуманных экспериментальных стратегий в исследованиях на животных, которые соответствуют принципу 3R: замена, сокращение и уточнение [1]. Живые животные являются необходимыми инструментами для изучения процессов у млекопитающих на уровне организма [2], что делает замену альтернативными подходами нежизнеспособной во многих исследованиях.Поэтому желательны методы, позволяющие получать точную и объективную информацию при использовании минимального количества экспериментальных животных. Здесь мы используем интратрахеальную инфекцию Pseudomonas aeruginosa или интраназальную инфекцию мышиным гаммагеспесвирусом (MHV) 68 в качестве моделей острого воспалительного заболевания легких, чтобы продемонстрировать комплексную технику изоляции легких. Этот метод дает как гистопатологические, так и биологические данные для одной и той же умерщвленной мыши.

Легочные болезни — одни из самых серьезных опасностей для здоровья человека во всем мире [3–5].Изменения воспалительной передачи сигналов лежат в основе многих заболеваний легких, включая астму, хроническое обструктивное заболевание легких, острый респираторный дистресс-синдром, фиброз легких и муковисцидоз [6–11]. Мышей широко используют для исследования патологий легких и критических параметров болезни из-за простоты генетических манипуляций [12–14]. Для респираторных инфекционных заболеваний первичными детерминантами исхода являются а) нагрузка патогенами, б) вызванная инфекцией воспалительная сигнализация, в) иммунный ответ и г) повреждение ткани.Несмотря на то, что взаимосвязанная комбинация этих факторов является признанной движущей силой повреждения органов [4], относительный вклад каждого из них часто не определяется однозначно. Понимание процессов болезни требует тщательной оценки каждого параметра. В то время как количественная оценка инфекции, иммунного ответа и воспалительных сигналов может потребовать свежих тканей, оценка морфологии тканей в первую очередь зависит от гистологии. Когда легкие собирают без фиксации in situ , альвеолы ​​схлопываются, придавая спущенный вид, который больше не сохраняет первоначальную структуру ткани. Фиксация in situ путем пропускания формалина через трахею фиксирует всю легочную ткань и не позволяет собрать свежие ткани у умерщвленной мыши. Из-за этих проблем исследователи используют разные группы мышей для получения фиксированных и свежих образцов легочной ткани. Эта практика не только увеличивает общее количество экспериментальных животных, но и вносит сложности, связанные с изменчивостью от животного к животному. Если для генерации a / b / c и d используются разные мыши, корреляция между полученной биологической и гистопатологической информацией становится трудной для объективной корреляции.Для решения этих проблем необходимо брать образцы свежей и фиксированной ткани у одной и той же мыши. Здесь мы используем комплексную технику изоляции легких после заражения Pseudomonas aeruginosa или MHV68, чтобы продемонстрировать метод достижения этой цели.

Pseudomonas aeruginosa — условно-патогенный микроорганизм, который часто лежит в основе патологии легких у людей с ослабленным иммунитетом, таких как пациенты, находящиеся в критическом состоянии из-за других несвязанных инфекций, или люди, страдающие муковисцидозом [15, 16].Интратрахеальная инокуляция Pseudomonas — признанный метод инфицирования легких. Бактерии вызывают воспаление легких и вызывают повреждение посредством различных процессов, включая выработку цитокинов / хемокинов, а также активацию путей гибели клеток [17–19]. Эта модель определила критические генетические факторы, а также воспалительные и иммунные детерминанты острой патологии легких, вызванной бактериями. У мышей дикого типа (WT) прививка Pseudomonas вызывает пневмонию и сепсис [12, 18].Мы изолировали легкие для биологических анализов и гистологии через 12 и 24 часа после заражения (hpi) бактериями. Инфекция мышей MHV68 является моделью для изучения вклада гамма-герпесвирусов в воспалительные заболевания [20]. Репликация вируса подавляется гамма-интерфероном (IFNγ), так что мыши с нокаутом рецептора IFNγ ( Ifngr ^{— / —} ) не могут контролировать стойкий вирус. Интраназальная инфекция этих мышей приводит к хроническому воспалению и стойкому повреждению легкого.Это установленная экспериментальная модель для оценки вклада гамма-герпесвирусов в идиопатический фиброз легких [13]. Используя эту модель, мы изолировали легкие от мышей WT и Ifngr ^{— / —} через 4 дня (г) после инъекции. Для моделей бактериальной или вирусной инфекции мы перфузировали правое легкое трупа формалином in situ в течение 20 минут. Незакрепленное левое легкое было немедленно удалено. Сегменты из этого легкого использовали для определения титра патогенов, уровней цитокинов и маркеров клеточной гибели.Для гистологии использовали фиксированные ткани правого легкого. In situ формалиновая фиксация сохранила архитектуру легких и позволила получить гистопатологические изображения неискаженных легких. У мышей, инфицированных Pseudomonas , это позволяет точно сравнивать изменения в архитектуре альвеол, вызванные характерными бактериями, между группами без артефактов из-за метода выделения ткани. Наш метод выделения легких может быть легко адаптирован к другим условиям легочного заболевания, независимо от инфекционного агента или вида животных [21, 22].

Результаты

Формалиновая фиксация in situ правого легкого

Этот метод фиксации предотвращает схлопывание альвеолярных воздушных мешков и поддерживает резидентную структуру легких для анализа [23]. Для фиксации in situ легкие необходимо инфузировать 10% нормальным забуференным формалином (NBF) перед иссечением. Мы усыпили инфицированных Pseudomonas aeruginosa мышей WT линии C57BL6 / J, перенесших вызванный пневмонией сепсис [18], через 12 часов после заражения (hpi) путем ингаляции диоксида углерода, одобренного IACUC.Используя стерильную технику, мы немедленно разрезали шею, чтобы обнажить трахею, и вставили ангиокатетер в просвет трахеи, направленный на два-три мм вниз по трахее каудально от точки разреза (рис. 1А). Мы провели шелковую нить 4–0 (хирургическая повязка) по окружности вокруг трахеи ниже места введения катетера. Связанный шелковый шов фиксировал катетер на месте (рис. 1B). Затем мы осторожно надрезали грудную стенку по средней линии, чтобы не повредить нижележащие органы грудной клетки.Части передней грудной стенки были вырезаны, чтобы полностью обнажить оба легких. Мы завязали стерильную шелковую нить 4–0 вокруг ворот левого легкого (рис. 1С слева и увеличенное изображение на правой панели), чтобы предотвратить попадание формалина в левое легкое. Трахеальный ангиокатетер был подсоединен к внутривенной трубке, прикрепленной к шприцу объемом 10 мл, закрепленному на высоте 20 см над трупом (рис. 1D). Этот процесс также поднял трахею над уровнем легких, облегчая поток формалина. Мы добавили 10 мл NBF в шприц, который затем попал в правое легкое.Инфляция, вызванная формалином, наблюдалась в правом легком, только подтверждая, что поток фиксатора ограничивался в первую очередь этой стороной (рис. 1E). Мы позволили ткани правого легкого закрепиться в течение 20 минут, после чего были вырезаны и помещены в 10 мл формалина для дальнейшей фиксации (24–48 ч). Удерживая несколько шприцев, прикрепленных к подставке на высоте 20 см над рабочим столом, мы смогли зафиксировать легкие нескольких мышей одновременно. Это минимизировало для исследователей время сбора урожая. Спустя 24-48 часов фиксированные правые легкие помещали в кассеты для гистологии и отправляли на срезы тканей.Неокрашенные слайды, залитые парафином (для иммуногистохимии [IHC]), и слайды, окрашенные гематоксилин-эозином (H&E) (для гистопатологического анализа), были подготовлены Гистологическим центром Emory в Национальном исследовательском центре приматов Йеркса. Неокрашенные срезы использовали для обнаружения появления каспазы-3, расщепленной апоптотическим маркером (Cl-CASP3), тогда как срезы, окрашенные H и E, использовали параллельно для определения морфологии ткани. В течение 20 минут фиксации правостороннего in situ мы осторожно удалили свежее левое легкое, сохраняя стерильные методы, и разрезали его на три равные части для различных биологических анализов.

Рис. 1. Метод выделения легких для получения образцов для биологических и патологических анализов.

Изображены следующие этапы после эвтаназии: (A) трахеи иссечены с помощью изогнутых щипцов, (B) ангиокатетер был вставлен в трахею и положение зафиксировано черным шелковым галстуком, указанным стрелкой, (C) a шелковый шов накладывали по окружности вокруг ворот левого легкого (левая панель), чтобы предотвратить поток формалина из ангиокатетера трахеи в ткань левого легкого.Увеличенное изображение грудных внутренних органов (правая панель), показывающее крупный план шва (обозначенного стрелкой) относительно легких. (D) Ангиокатетер был подсоединен к внутривенной трубке, прикрепленной к шприцам на 10 мл, содержащим мениск жидкости на 20 см над трупом, как показано, и (E) надутого правого легкого (указано левой стрелкой) перфузировали в течение 20 минут, в то время как левое легкое (указанное правой стрелкой) иссекали для биологических анализов.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0246270.g001

Окклюзия левого легкого

Чтобы определить, достаточно ли метод in situ ограничивает поток формалина только в правое легкое, мы повторили наш подход, используя краситель гематоксилин (рис. 2А). В течение минуты после начала кровотока синий краситель был явно обнаружен в правом легком, а не в левом. Продолжительное наблюдение подтвердило кровоток только в правое легкое, о чем свидетельствует прогрессивно увеличивающееся распространение окраски в этой ткани. Ни разу не наблюдалось окрашивания в левом легком.Затем иссеченные ткани легких тщательно исследуются на наличие красителя. В левом легком не было признаков потока красителя (конечная панель фиг. 2А). Таким образом, наш метод направляет поток жидкости только в правое легкое, оставляя левые ткани нетронутыми и доступными для дополнительных биологических анализов. Мы также оценили жизнеспособность клеток в незафиксированных левых легких мышей WT (рис. 2B). Иссекали легкие трупов без обработки (рис. 2В, левая панель) или трупов, подвергшихся фиксации формалином in situ (рис. 2В, правая панель).Суспензию единичных клеток каждого легкого анализировали на жизнеспособность с использованием метода исключения трипанового синего. Примерно 90% восстановленных клеток левого легкого были жизнеспособными (не окрашивались трипановым синим) независимо от условий фиксации правого легкого. Это продемонстрировало, что наш метод сбора не вызывает потери жизнеспособности клеток в незафиксированных тканях левых легких. Фиксированные правые легкие сохранили удивительную жизнеспособность 70–80% (правая панель) по сравнению с клетками, полученными из неперфузионных правых легких (жизнеспособность ~ 90%).Эти данные показывают, что перфузии было достаточно для сохранения альвеолярной архитектуры, несмотря на воздействие in situ и перфузированного 10% формалина. Затем мы применили метод фиксации in situ и к моделям бактериальной или вирусной инфекции с использованием инокуляции Pseudomonas (рис. 3A – 3D) или MHV68 соответственно (рис. 3E – 3H).

Рис. 2. Поток жидкости к правому легкому и окклюзия левого легкого.

(A) Гематоксилиновый краситель был введен в правое легкое с использованием метода перфузии in situ , описанного на рисунке 1.Изображения взяты от той же мыши (представительницы трех), изображающие включение красителя в правое легкое в течение от 0 до 20 минут. К 20 минутам правое легкое становится темно-синим, в то время как левое легкое не показывает видимого красителя. (B) Суспензии единичных клеток, полученные из левых легких неинфицированных мышей, обрабатывали типановым синим для оценки жизнеспособности. Отрицательные (-ve) клетки по трипановому синему сохраняют мембранные свойства, указывающие на жизнеспособность, тогда как положительные (+ ve) клетки имеют поврежденную целостность мембраны, что указывает на потерю жизнеспособности.Каждая точка данных представляет одну мышь с 3-4 мышами в группе. Планки погрешностей показывают среднюю ошибку и диапазон. Статистический анализ между группами проводился с использованием непарного t-критерия с поправкой Велча. n.s. не имеет значения.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0246270.g002

Рис. 3. Биологические данные для одной мыши.

(A, B) Ложно обработанных или инфицированных Pseudomonas мышей через 12 часов после инфицирования (hpi; мыши, перенесшие пневмонию) или лечения, при котором каждая мышь была инокулирована 40 мкл 2X10 ⁸ КОЕ / мл Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853; приблизительно 8 × 10 ⁶ КОЕ на мышь) использовали для количественной оценки бактериальной нагрузки ( A , n = 2 и 11 мышей для фиктивных и инфицированных групп соответственно) на чашках с кровяным агаром и цитокинов IL-1β. (B) , а также TNF с помощью ELISA ( C; n = 2 и 6 мышей для фиктивных и инфицированных групп соответственно) с помощью ELISA.N.D. не обнаружен. (D ) Иммуноблоттинг лизатов легких от ложно обработанных (n = 2) или септических (n = 4) мышей WT, указывающих на появление расщепленных CASP8 (Cl-C8; 18 кДа) и Cl-CASP3 (Cl-C3; 19, 17 кДа) с загрузкой контрольного β-актина. (EF) Титр MHV68 в легких инфицированных WT и Ifngr мышей ^{— / —} мышей без перфузии (E) или инфицированных Ifngr ^{— / —} мышей с перфузией in situ (F) Через 4 дня после инфицирования (dpi) каждую мышь инокулировали 5 × 10 ⁵ БОЕ вируса в 20 мкл полной среды. (G, H) Уровни TNF, обнаруженные с помощью ELISA в срезах легких от тех же мышей, изображенных в (E), и (F), соответственно. Каждая точка данных представляет одну мышь с 3–4 мышами на группу в каждом условии. Для каждого эксперимента все группы включали сопоставимое количество самцов и самок мышей соответствующего возраста. Планки погрешностей показывают среднюю ошибку и диапазон. Статистический анализ между группами проводился с использованием непарного t-критерия с поправкой Велча. n.s. не имеет значения.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0246270.g003

Псевдомонады и титр MHV68

Чтобы оценить титр Pseudomonas или MHV68, мы собрали самый нижний участок (ближайший к диафрагме) левого легкого у мышей WT (для бактерий, 12 hpi) или мышей WT и Ifngr ^{— / —} мышей (для вируса, 4 dpi) в стерильной полной среде (рис. 3A и 3E). Равные количества (по весу) этой ткани обрабатывали ультразвуком в среде на льду и последовательно разбавляли для определения инфекционного титра любого патогена.Мы выполнили все биологические анализы с равным соотношением массы к объему ткани: растворитель для определения титра, анализа цитокинов или иммуноблоттинга. Для оценки бактериального титра (рис. 3А) обработанные ультразвуком лизаты легких были серийно разбавлены в PBS перед распределением по предварительно нагретым (37 ° C) чашкам с кровяным агаром. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 18–24 ч перед оценкой бактериальных колоний. Рассматривали чашки, на которых было от 10 до 100 колоний. Подсчитанные колонии выражали как бактериальную нагрузку после поправки на массу ткани и разведение (фиг. 3A).Все инфицированные мыши показали сопоставимый бактериальный титр в левом легком. Мы не обнаружили бактерии у мнимо обработанных мышей, что подтверждает стерильность метода во время сбора урожая без перекрестного заражения. Для определения титра MHV68 обработанные ультразвуком лизаты последовательно разводили в среде и высевали на монослои фибробластов мыши (фиг. 3E и 3F). Семь дней спустя планшеты окрашивали и подсчитывали лунки с 20-200 вирусными бляшками и корректировали их по массе ткани перед подсчетом титров. При 4 dpi у WT и мутантных мышей был сопоставимый титр вируса в левом легком, измеренный без перфузии (рис. 3E).Чтобы определить, влияет ли фиксация in situ на титры вирусов, мы оценили титры в легких трупов, к которым применялся наш метод перфузии (рис. 3F). Левые легкие перфузированных мышей Ifngr ^{— / —} показали аналогичные титры (~ 10 ⁶ БОЕ / г ткани) по сравнению с левыми легкими мышей без манипуляций (рис. 3E и 3F). Перфузированные правые легкие показали диапазон вирусных титров (~ 10 ³ -10 ⁶ БОЕ / мл), что свидетельствует о том, что перфузия формалина в течение 20 минут влияла на титр у некоторых мышей.Эти данные подготовили почву для оценки воспалительного выделения в легких каждой мыши, вызванного инфекцией.

Анализ цитокинов и иммуноблоттинг (IB)

Острая инфекция Pseudomonas стимулирует воспалительные цитокины, такие как TNF и IL-1β [24]. Инфекция MHV68 запускает воспалительные цитокины, обнаруживаемые в легких с разрешением 4 dpi [25]. Чтобы оценить количество цитокинов, вызванных инфекцией, мы использовали средний отдел левого легкого. Мы обработали ультразвуком эту ткань каждой мыши в HBSS (Sigma), восстановленном коктейлем из ингибиторов протеаз (Roche).Мы использовали лизат для каждого образца для количественного определения уровней TNF и IL-1β (для Pseudomonas , рис. 3B и 3C) или TNF (для MHV68, рис. 3G и 3H) с помощью ELISA. Мы использовали оставшийся самый верхний участок (ближайший к трахее) левого легкого для IB, чтобы определить появление известных Pseudomonas -ассоциированных [26–28] маркеров клеточной смерти (рис. 3D). В условиях заражения Pseudomonas ложно леченные мыши экспрессировали определяемый TNF, но не IL-1β, в легких (рис. 3B и 3C). Pseudomonas экспрессирует проапоптотические белки, которые запускают апоптотическую гибель клеток в инфицированных клетках и мышах [29].Как и ожидалось, каспаза палача апоптоза (CASP) 3 была заметно активирована (расщеплена с образованием биоактивной формы 19 кДа) во всех инфицированных образцах по сравнению с ложно обработанными образцами (рис. 3D). CASP8, медиатор внешнего апоптоза, также подвергся значительному процессингу с образованием активных расщепленных форм (22 кДа и 18 кДа) вместе с промежуточной формой (43 кДа). У всех мышей MHV68 без манипуляций с легкими инфекция приводила к детектируемым уровням TNF (фиг. 3G). У мышей Ifngr ^{— / —} , у которых правые легкие были фиксированы, а левое легкое не фиксировано, в левых тканях наблюдались уровни цитокинов, сравнимые с уровнем, наблюдаемым у необработанных мышей (рис. 3H).Фиксированное правое легкое, как видно из титра вируса, показало более широкий разброс количества цитокинов. Эти данные вместе с данными о титре демонстрируют, что в описанном нами методе фиксации in situ обеспечивается качество свежей ткани, необходимое для биологических анализов.

Гистология

Чтобы оценить, коррелируют ли биологические маркеры инфекции с гистопатологией ткани, демонстрирующей бактериозависимую воспалительную передачу сигналов, мы оценили морфологию, внешний вид инфильтратов и расщепленный маркером клеточной смерти CASP3 (рис. 4A).На этом рисунке первый и второй столбцы представляют правое легкое, взятое у двух отдельных мышей, одна без фиксации in situ и одна с фиксацией (как показано на рисунке). Третий столбец представляет одну инфицированную мышь, полученную одновременно с фиксацией in situ и правого легкого. Для разделов H&E показаны три увеличения (увеличение сверху вниз). Уплощение альвеолярных пространств приводит к появлению утолщенной стенки перегородки на срезах, полученных без фиксации in situ правого легкого.Это признанный артефакт техники, когда легкие помещаются непосредственно в формалин без предварительной перфузии [23]. Напротив, репрезентативное изображение фиксированных легких in situ (второй столбец рис. 4A) демонстрирует четкое разделение перегородки. В срезах легких, полученных от мышей, инфицированных в течение 24 часов (фиг. S1A), легкие как от ложно обработанных (фиг. S1A, верхняя панель), так и от инфицированных мышей (фиг. S1A, нижняя панель) демонстрировали уплощенное альвеолярное пространство в отсутствие фиксации in situ . Это подтвердило необходимость перфузии для сохранения архитектуры паренхимы.Типичное легкое от одной инфицированной мыши продемонстрировало известный вид воспалительных инфильтратов, вызванных Pseudomonas , и значительное повышение расщепленного CASP3 (фиг. 4A, нижний ряд) в полном соответствии с IB (фиг. 3D).

Рис. 4.

(A) Гистология после окрашивания H&E (верхние панели, масштабная шкала = 200 мкм, 10-кратное увеличение объектива камеры; средние панели, масштабная шкала = 100 мкм, увеличение 20X; нижние панели, масштабная линейка = 40 мкм, увеличение 40X) и иммуногистохимия, показывающая Cl-C3 in situ с контрастным окрашиванием гематоксилином (шкала = 40 мкм, увеличение 40X) тех же сегментов легких от ложно обработанных или инфицированных Pseudomonas мышей WT через 12 часов после ( hp) лечения или инфекции (n = 1 репрезентативное изображение для каждой группы).Большинство левых панелей H&E и IHC взяты из легких без фиксации in situ с утолщенной альвеолярной стенкой, что является артефактом метода. Стрелки указывают на типичную воспалительную инфильтрацию (в срезе H&E) или положительные по Cl-C3 клетки (в срезах IHC).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0246270.g004

Таким образом, мы показываем, что в исследованиях инфекционных заболеваний легких на мышах соседние ткани легких одной и той же мыши могут использоваться для различных целей.Описанный метод сохраняет качество как фиксированных, так и свежих тканей. Маркеры клеточной смерти подтвердили согласованность полученных данных. Биологические анализы левого легкого можно легко модифицировать для определения других маркеров заболевания, таких как инфильтрация иммунных клеток (с помощью проточной цитометрии), отложение коллагена (с помощью анализов гиалуронидазы) и патогенные ДНК или паттерны экспрессии генов (путем выделения нуклеиновых кислот), если это необходимо. В целом, мы описываем метод изоляции легких, который уменьшает общее количество мышей, используемых для экспериментов, за счет максимизации сбора данных.Хотя мы были удивлены уровнями жизнеспособных клеток и инфекционного вируса, остающимися в легких перфузированных мышей, наш метод усовершенствовал технику выделения легких, преодолев артефакты фиксации и одновременно позволяя генерировать согласованные биологические данные. Важно отметить, что этот метод сводит к минимуму вариации от животного к животному, позволяя проводить все анализы на отдельных мышах. Поэтому здесь мы описываем метод, который усиливает принцип 3R исследований на животных, рекомендованный NIH.

Методы

Мыши

самцов и самок мышей C57BL / 6J (JAX 000664), а также C57BL / 6J-background Ifngr ^{— / —} [13] мышей были выведены в Университете Эмори.Все инфекции проводились на мышах в возрасте 8–12 недель, где в каждом эксперименте были сопоставимы самцы и самки мышей. Все эксперименты на животных проводились с одобрения в соответствии с руководящими принципами комитетов по контролю за животными и благополучием IACUC Университета Эмори.

Интратрахеальная инокуляция

Pseudomonas aeruginosa

Запасы Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) поддерживались медицинским микробиологом (EB). Исходные материалы готовили в триптическом соевом бульоне с использованием регидратированного Culti-Loops® (Remel Microbiology Products, ThermoScientific Inc., Lenexa, KS). Качество поголовья оценивалось каждый месяц по субкультуре. Из этих чашек ежедневно делали свежие субкультуры для процедур контроля качества в лаборатории клинической микробиологии Эмори. Для экспериментов отбирали колонию из чашки с субкультурой для инокуляции в триптический соевый бульон; бактерии выращивали в течение ночи при 37 ° C. Осадок из центрифугированного бульона ресуспендировали в 0,85% физиологическом растворе (Remel Microbiology Products, ThermoScientific Inc., Lenexa, KS). 40 мкл посевного материала из запаса 2х10 ⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ) / мл, оцененных по оптической плотности на длине волны 600 нм.(приблизительно 8×10 ⁶ КОЕ / мышь) инокулировали каждой мыши интратрахеальным путем, как описано ранее [12]. Вкратце, мышей анестезировали ингаляционным изофлураном (4% индукция и 2% поддерживающая терапия) и обнажали трахею путем рассечения с использованием стерильных методов. Инокулят вводили в трахею с помощью тонкой иглы. Чтобы обеспечить максимальный поток жидкого инокулята, мышей держали наверху в течение 10-15 секунд. Для фиктивного лечения мышей подвергали анестезии, срединному разрезу шейки матки и инъекции физиологического раствора.Хирургический разрез герметизировали с использованием тканевого клея, и животных умерщвляли путем ингаляции CO ₂ в соответствии с протоколом IACUC Университета Эмори.

Интраназальная инфекция, вызванная MHV68

Мышей, потерявших сознание в результате ингаляции изофлурана, интраназально инокулировали вирусом 5X10 ⁵ БОЕ в 20 мкл среды, как описано ранее [30]. Перед эвтаназией мышей содержали в течение 4 дней.

Окраска легких гематоксилином

Трупы умерщвленных мышей были подготовлены для перфузии in situ и правого легкого.10 мл гематоксилина (22110639, Fisher) пропускали через легкие в течение 20 минут для обнаружения утечки красителя в левое легкое.

Изоляция клеток легких

Иссеченные легкие помещали в 1 мл ледяной среды и разрезали на кусочки размером ~ 3 мм для выделения клеток, как описано ранее [2]. Фрагменты легких обрабатывали коллагеназой D (11088858001, Sigma; 1,5 мг / мл) в PBS, фильтровали через металлическое сито и подвергали лизису эритроцитов [31]. Жизнеспособные клетки рассчитывали с использованием гемоцитометра и исключения трипанового синего.

Анализ титров вирусов и бактерий

Для определения титров органов идентичные сегменты правого легкого каждой мыши собирали в 1000 мкл полной среды. Полная среда представляет собой DMEM, содержащую 4,5 г / мл глюкозы, 10% фетальной бычьей сыворотки (F2442, Atlanta Biologicals), 2 мМ L-глутамина (MT 25005CI, Fisher) с 100 ед. / Мл пенициллина и 100 ед. / Мл стрептомицина (MT 3002CI, Фишер). 100 мг каждого сегмента легкого помещали в 1000 мкл полной среды, выдерживали на льду и гомогенизировали с использованием Misonix Sonicator 2000 при установке программы на два импульса по 10 секунд каждый при 15 Вт.Для условий инфицирования MHV68 лизаты тканей разводили семью последовательными десятикратными разведениями в среде и разведениями со второго по седьмое высевали на клетки фибробластов мыши (NIH-3T3s, 200 мкл / лунку). Клетки NIH-3T3 высевали за 18 часов до эксперимента с 5 × 10 ⁵ клеток / лунку и поддерживали при 34 ° C в инкубаторе. После часовой адсорбции вирусом клетки в каждой лунке покрывали 5 мл теплой карбоксиметилцеллюлозы, как описано ранее [30]. Планшеты инкубировали в течение 6 дней, окрашивали Гимза и подсчитывали количество бляшек на 7 день.Пронумерованные бляшки графически отображали на грамм ткани. Для условий заражения Pseudomonas 500 мкг срезов легких помещали в 500 мкл среды и гомогенизировали. Лизаты легких разбавляли для пяти последовательных десятикратных разведений в PBS и 200 мкл из каждого образца высевали на предварительно нагретые чашки с кровяным агаром для инкубации в течение ночи при 37 ° C. Для определения титра учитывались чашки для разведения, содержащие от 20 до 100 различных колоний. Титры выражали в количестве бактерий для каждого легкого, рассчитанного с использованием информации о весе.

Лизат легких для цитокинов ELISA

Для ELISA цитокинов лизаты легких получали из средних срезов левого легкого каждой мыши. Сопоставимые части среза легких взвешивали и обрабатывали ультразвуком в HBSS (Sigma) с добавлением коктейля для ингибирования протеаз (Roche; 1 таблетка на 10 мл HBSS). Примерно 0,5 мг ткани обрабатывали ультразвуком, как описано выше в методах, в 500 мкл дополненного HBSS. 75 мкл каждого лизата использовали для ELISA мышиного цитокина TNF и IL-β (R&D).

Иммуноблот

IB выполняли, как описано ранее [32]. Вкратце, верхняя часть левого легкого была вырезана и помещена в ледяной HBSS. Ткани равного веса (приблизительно 100 мг ткани от каждой мыши) обрабатывали ультразвуком в RIPA (25 мМ Трис, 150 мМ хлорид натрия [Sigma], 1% NP-40 [Sigma], 1% дезоксихолат натрия [Sigma] и 0,1%). % SDS [Sigma], pH 7,6; 200 мкл на образец) с добавлением коктейля ингибитора протеазы и ингибитора фосфатазы (Roche). После обработки ультразвуком ткани лизировали на льду в течение 30 минут, собирали центрифугированием при 150000 об / мин при 4 ° C в течение 20 минут с использованием высокоскоростной охлаждаемой микроцентрифуги Tomy TX-160.Полученный супернатант (лизат ткани) собирали для анализа IB. Уровни бета-актина использовали для определения сопоставимых количеств белка во всех образцах для IB. Белки переносили на PVDF-мембраны (Bio-Rad), обрабатывали хемилюминесцентным реагентом (Clarity, Bio-Rad) для развития сигнала и отображали на системе визуализации Kwik Quant Gel Imaging System (Kindle Biosciences Inc.). Используемые антитела представляли собой кроличьи антитела против расщепленного Casp8 (8592, Cell Signaling Technology), кроличьи антитела против расщепленного Casp3 (9661, Cell Signaling Technology) и мышиные анти-β-актин (A2228, Sigma).

Гистология и иммуногистохимия

In situ фиксированные правые легкие вырезали и затем фиксировали в ледяном 10% нормальном забуференном формалине (5700TS, Fisher) при 4 ° C в течение 48 часов и отправляли на гистологию. Для обнаружения ИГХ готовили залитые в парафин срезы и окрашивали, как описано [2], кроличьим анти-расщепленным-CASP3 (разведение 1: 100) при 4 ° C, а затем биотинилированным козьим вторичным антителом против кролика (BA-1000, Vector Laboratories), стрептавидин-пероксидаза хрена (HRP, SA-5004, Vector Laboratories) и реактив пероксидазной реакции (Vector Laboratories).Срезы контрастировали с использованием гематоксилина (22110639, Fisher) в течение 2–5 минут и промывали под водопроводной водой и, наконец, ультрачистой водой. Изображения были получены на микроскопе Nikon Elements с использованием программного обеспечения для обработки изображений EIS Elements BR 3.10 (Nikon Instruments).

Статистический анализ и воспроизводимость

Статистика, показанная в биологических анализах, указывает на среднюю ошибку с диапазоном, и статистическое сравнение между группами проводилось с использованием непарного t-критерия с поправкой Велча в Graphpad Prism 8 (Graphpad Software Inc.). Все графики были построены с использованием одного и того же программного обеспечения. Для биологических анализов показано несколько образцов, демонстрирующих воспроизводимость; для гистологии одно репрезентативное изображение из каждой группы показано на основном рисунке (Рис. 4), а 2–3 репрезентативных изображения показаны на S1 Рис. Все анализы между группами выполнялись как

Обсуждение

Болезни легких, от хронических до острых, часто опосредованные патогенами, являются основными причинами смерти во всем мире [3–5]. Существует постоянная потребность в создании надежных моделей легочных заболеваний.При инфекционных патологиях легких сложное взаимодействие хозяина и патогена, лежащее в основе заболевания, требует in vivo и оценки генетических, воспалительных и иммунных детерминант. Все исследования требуют живых животных. Таким образом, исследователи несут ответственность за оценку методов, которые минимизируют количество используемых животных, где это возможно, без ухудшения качества или интерпретации данных. Подход, описанный в этой рукописи, был разработан с использованием острых бактериальных и вирусных инфекций.Здесь мы продемонстрировали, что этот метод а) сводит к минимуму изменчивость от животного к животному, что должно предотвратить связанные с этим ошибки в интерпретации данных, б) генерирует высококачественные, взаимно согласованные гистопатологические и биологические доказательства, а также в) снижает общее количество животные необходимы для сбора объективных данных.

Посредством инфузии in situ мы получили фиксированные легкие и свежие срезы легких от отдельных животных. Перфузия с последующей длительной фиксацией формалином поддерживает архитектуру ткани.Без первого шага легкие демонстрируют отек ткани с увеличенной шириной альвеолярной перегородки, что соответствует артефакту метода. Поскольку известно, что пневмония или другие воспалительные состояния легких вызывают отек тканей, такие артефакты явно противоречат наблюдениям. Эти исследования могут быть легко использованы для определения генетических влияний и эффективности профилактических стратегий в других моделях. Этот модифицированный метод фиксации сокращает количество используемых экспериментальных животных, сохраняя при этом качество и количество информации, необходимой для понимания основного процесса заболевания.Одно из явных недостатков этой модели — отсутствие возможности анализировать жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ). Из-за ограничения потока жидкости в левое легкое невозможно получить БАЛ (промытый сток воспалительной проникающей клетки в легкое). Таким образом, для БАЛ потребуются отдельные группы мышей. Кроме того, распространение инфекции и повреждений в легких при воспалительных заболеваниях часто бывает неоднородным. Ярким примером является туберкулезная инфекция. Давно признано, что у инфицированных млекопитающих апикальные и верхние отделы легких являются первичными очагами инфекции [33].В таких ситуациях или условиях, когда распределение патогена не совсем понятно, может быть полезным продольное сечение (содержащее апикальный, средний и нижний сегменты легкого для каждого анализа) фиксированной и незафиксированной ткани. Следовательно, для каждой экспериментальной модели потребуются контрольные эксперименты, чтобы определить различия в параметрах заболевания в разных отделах легких.

Возможность отслеживать отдельных животных на предмет инфекций, воспалений и повреждений легких значительно улучшит исследования, изучающие влияние противовирусной и / или антибактериальной терапии, а также противовоспалительной терапии на исход болезни.У пациентов с острым респираторным дистресс-синдромом поддерживающая терапия обычно включает стратегии минимизации воспаления, связанного как с основным заболеванием, так и с механической вентиляцией легких. При инфекционных заболеваниях легких противовоспалительная терапия часто сочетается с антибиотиками или противовирусными препаратами. Этот комбинированный режим лечения предназначен для уменьшения степени повреждения тканей, минимизации дисфункции органов и предотвращения смертности [18, 34]. Даже несмотря на то, что такие подходы принимаются, существует явное непонимание относительной пользы борьбы с инфекцией по сравнению с воспалением.Точно так же трудно определить относительную важность определенных компонентов иммунной системы, таких как эозинофилы, у пациентов с астмой [35]. Наш метод позволит выявить различные компоненты болезни, чтобы выявить их вклад, зависимости и общие результаты. Такое понимание перекрестных помех между патогеном и хозяином важно для понимания сложной природы легочных заболеваний. Несомненно, эти стратегии применимы к любому исследованию с использованием мышей или других экспериментальных животных, помимо острых легочных реакций, вызванных инфекцией.В конечном итоге этот метод позволит пользователям использовать наименьшее количество животных для определения: a) воздействия агента модуляции хозяина, b) воздействия антивирусного или другого антимикробного средства (поскольку изменение патогенной нагрузки будет Turn изменяет реакцию хозяина и то, что наблюдается в легких) и c) их комбинацию. Эта информация покажет, являются ли модуляции хозяина и патогена аддитивными, синергическими или парадоксально антагонистическими для оптимальной стратегии вмешательства при заболеваниях легких.

Вспомогательная информация

S1 Рис.

(A) Гистология после окрашивания H&E (масштабная шкала = 100 мкм, 20-кратное увеличение на камере) от ложно обработанного (верхняя панель) или инфицированного Pseudomonas (нижняя панель) WT через 24 часа после (hp) лечение (t) или инфекция (i). Показаны два репрезентативных изображения для фиктивных и три репрезентативных изображения для зараженных групп.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0246270.s001

(DOCX)

Благодарности

Все участники включены в качестве авторов.

Ссылки

1. 1. Хубрехт Р.К., Картер Э. «3П» и гуманная экспериментальная техника: реализация изменений. Животные (Базель). 2019; 9 (10). pmid: 31575048
2. 2. Мандал П., Фенг Й., Лайонс Д. Д., Бергер С. Б., Отани С., ДеЛэйни А. и др. Caspase-8 взаимодействует с Caspase-11, чтобы управлять повреждением тканей и вызвать эндотоксический шок. Иммунитет. 2018; 49 (1): 42–55 e6. pmid: 30021146
3. 3. Пахва Р., Джиалал И. Хроническое воспаление. StatPearls.Остров сокровищ (Флорида) 2019.
4. 4. Джонсон ER, Мэттэй Массачусетс. Острое поражение легких: эпидемиология, патогенез и лечение. J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2010. 23 (4): 243–52. pmid: 20073554
5. 5. Quaderi SA, Hurst JR. Неудовлетворенное глобальное бремя ХОБЛ. Glob Health Epidemiol Genom. 2018; 3: e4. pmid: 29868229
6. 6. Provinciali М., Карделли М., Марчегиани Ф. Воспаление, хроническая обструктивная болезнь легких и старение. Curr Opin Pulm Med. 2011; 17 Приложение 1: S3–10.
7. 7. Bringardner BD, Baran CP, Eubank TD, Marsh CB. Роль воспаления в патогенезе идиопатического фиброза легких. Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал. 2008. 10 (2): 287–301. pmid: 17961066
8. 8. Ward PA, Hunninghake GW. Воспаление и фиброз легких. Am J Respir Crit Care Med. 1998. 157 (4 Pt 2): S123–9. pmid: 9563771
9. 9. King PT. Воспаление при хронической обструктивной болезни легких и его роль в сердечно-сосудистых заболеваниях и раке легких.Clin Transl Med. 2015; 4 (1): 68. pmid: 26220864
10. 10. Джуканович Р. Астма: болезнь воспаления и восстановления. J Allergy Clin Immunol. 2000; 105 (2 Pt 2): S522–6. pmid: 10669536
11. 11. Gorska K, Paplinska-Goryca M, Nejman-Gryz P, Goryca K, Krenke R. Эозинофильное и нейтрофильное воспаление дыхательных путей в фенотипировании астмы легкой и средней степени и хронической обструктивной болезни легких. ХОБЛ. 2017; 14 (2): 181–9. pmid: 27983888
12. 12. Coopersmith CM, Stromberg PE, Dunne WM, Davis CG, Amiot DM 2nd, Buchman TG, et al.Подавление апоптоза кишечного эпителия и выживаемость на мышиной модели вызванного пневмонией сепсиса. ДЖАМА. 2002. 287 (13): 1716–21. pmid: 11926897
13. 13. О’Флаэрти Б.М., Матар К.Г., Уэйкман Б.С., Гарсия А., Уилке Калифорния, Кортни К.Л. и др. CD8 + Т-клеточный ответ на инфекцию гамма-герпесвирусом опосредует воспаление и фиброз у мышей с дефицитом гамма-рецепторов интерферона. PLoS One. 2015; 10 (8): e0135719. pmid: 26317335
14. 14. Day CW, Baric R, Cai SX, Frieman M, Kumaki Y, Morrey JD и др.Новый адаптированный к мышам штамм SARS-CoV в качестве летальной модели для оценки противовирусных агентов in vitro и in vivo. Вирусология. 2009. 395 (2): 210–22. pmid: 19853271
15. 15. Бхагират А.Ю., Ли И, Сомаяджула Д., Дадаши М., Бадр С., Дуан К. Муковисцидоз легких и инфекция Pseudomonas aeruginosa. BMC Pulm Med. 2016; 16 (1): 174. pmid: 27
16. 3
17. 16. Weiner LM, Webb AK, Limbago B., Dudeck MA, Patel J, Kallen AJ, et al. Устойчивые к противомикробным препаратам патогены, связанные с инфекциями, связанными со здравоохранением: сводка данных, переданных в Национальную сеть безопасности здравоохранения в Центрах по контролю и профилактике заболеваний, 2011–2014 гг.Инфекционный контроль Hosp Epidemiol. 2016; 37 (11): 1288–301. pmid: 27573805
18. 17. Клингенсмит, штат Нью-Джерси, Coopersmith CM. Кишечник как двигатель множественной дисфункции органов при критических заболеваниях. Crit Care Clin. 2016; 32 (2): 203–12. pmid: 27016162
19. 18. Coopersmith CM, Amiot DM 2nd, Stromberg PE, Dunne WM, Davis CG, Osborne DF, et al. Антибиотики улучшают выживаемость и изменяют воспалительный профиль в мышиной модели сепсиса от пневмонии Pseudomonas aeruginosa. Шок.2003. 19 (5): 408–14. pmid: 12744482
20. 19. Рейнигер Н., Ли М.М., Коулман Ф.Т., Рэй С., Голан, Делавэр, Пирс, Великобритания. Устойчивость к хронической легочной инфекции Pseudomonas aeruginosa требует муковисцидоза, регулируемого регулятором трансмембранной проводимости, высвобождения интерлейкина-1 (ИЛ-1) и передачи сигналов через рецептор ИЛ-1. Заражение иммунной. 2007. 75 (4): 1598–608. pmid: 17283089
21. 20. Бартон Э, Мандал П, Спек Ш. Патогенез и контроль хозяев гаммахерпесвирусов: уроки мыши.Анну Рев Иммунол. 2011; 29: 351–97. pmid: 21219186
22. 21. Rockx B, Kuiken T, Herfst S, Bestebroer T, Lamers MM, Oude Munnink BB и др. Сравнительный патогенез COVID-19, MERS и SARS на нечеловеческой модели приматов. Наука. 2020.
23. 22. Rosen BH, Evans TIA, Moll SR, Gray JS, Liang B, Sun X и др. Инфекция не требуется при муковоспалительном заболевании легких у CFTR-нокаутных хорьков. Am J Respir Crit Care Med. 2018; 197 (10): 1308–18. pmid: 29327941
24. 23.Брабер С., Верхейден К.А., Хенрикс П.А., Краневельд А.Д., Фолкертс Г. Сравнение методов фиксации по морфологии легких на мышиной модели эмфиземы. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2010. 299 (6): L843–51. pmid: 20935232
25. 24. Клот С., Ширмер Б., Мундер А., Стельцер Т., Ротшу Дж., Зайферт Р. Роль Pseudomonas aeruginosa ExoY в модели острой инфекции легких у мышей. Токсины (Базель). 2018; 10 (5).
26. 25. Лопес-Родригес Д.М., Кириллов В., Круг Л.Т., Месри Е.А., Андреанский С.Роль индуцируемого гипоксией фактора 1 альфа в литической репликации и реактивации мышиного гаммагерпесвируса 68 (MHV68) с латентного периода. PLoS Pathog. 2019; 15 (12): e1008192. pmid: 31809522
27. 26. Эрнст Э. Дж., Хашимото С., Гульельмо Дж., Сава Т., Питтет Дж. Ф., Кропп Х. и др. Влияние антибиотикотерапии на повреждение легких, вызванное Pseudomonas aeruginosa, на модели крыс. Антимикробные агенты Chemother. 1999. 43 (10): 2389–94. pmid: 10508012
28. 27. Суреш Кумар В., Садикот Р.Т., Перселл Дж. Э., Малик А.Б., Лю Ю.Модель повреждения легких, вызванного синегнойной палочкой. J Vis Exp. 2014 (92): e52044. pmid: 25406628
29. 28. Hotchkiss RS, Dunne WM, Swanson PE, Davis CG, Tinsley KW, Chang KC и др. Роль апоптоза при пневмонии, вызванной синегнойной палочкой. Наука. 2001; 294 (5548): 1783. pmid: 11729269
30. 29. Jendrossek V, Grassme H, Mueller I, Lang F, Gulbins E. Апоптоз, индуцированный Pseudomonas aeruginosa, включает митохондрии и активируемые стрессом протеинкиназы. Заражение иммунной. 2001. 69 (4): 2675–83.pmid: 11254634
31. 30. Мандал П., Крюгер Б.Е., Ольденбург Д., Андри К.А., Борода Р.С., Уайт Д.В. и др. Гаммагерпесвирус взаимодействует с IRF2, индуцированным интерфероном-альфа / бета, чтобы останавливать репликацию вируса, контролировать реактивацию и минимизировать летальность хозяина. PLoS Pathog. 2011; 7 (11): e1002371. pmid: 22114555
32. 31. Дейли-Бауэр Л.П., Винн Г.М., Мокарски Е.С. Цитомегаловирус ослабляет противовирусный CD8 + Т-клеточный иммунитет, рекрутируя воспалительные моноциты. Иммунитет. 2012. 37 (1): 122–33.pmid: 22840843
33. 32. Мандал П., Бергер С.Б., Пиллэй С., Мориваки К., Хуанг С., Гуо Х. и др. RIP3 вызывает апоптоз независимо от активности пронекротической киназы. Mol Cell. 2014; 56 (4): 481–95. pmid: 25459880
34. 33. Гудвин Р.А., Дес През Р.М. Апикальная локализация туберкулеза легких, хронического гистоплазмоза легких и прогрессирующего массивного фиброза легкого. Грудь. 1983; 83 (5): 801–5. pmid: 6839825
35. 34. Мора А.Л., Торрес-Гонсалес Э., Рохас М., Сюй Дж., Ритценталер Дж., Спек Ш. и др.Контроль реактивации вируса останавливает фиброз, вызванный герпесвирусом легких, у мышей с дефицитом рецептора IFN-гамма. Am J Respir Crit Care Med. 2007. 175 (11): 1139–50. pmid: 17363768
36. 35. Бруссино Л., Хеффлер Е., Букка С., Никола С., Ролла Г. Целевая терапия эозинофилов при тяжелой астме: критические точки. Biomed Res Int. 2018; 2018: 7582057. pmid: 30498762

.