метформин для профилактики диабета

метформин для профилактики диабета

Подобные натуральные продукты как Glykyron являются результатом многолетнего производства натуральных фито-комплексов. Они разрабатывались на основе современных экологически чистых компонентов и инновационных методов производства. Все вещества из состава прошли тщательную проверку и не вызывают привыкания.

таблетки форсига инструкция по применению от диабета, чем лечить сахарный диабет 1 типа
таблетки диабет и диета
лекарство амарил от диабета цена
отек ног при сахарном диабете лечить
грибок при диабете как лечить

Лечение диабета с помощью метформина позволяет снизить риск их развития. Кардиопротективное действие препарата связано с его способностью нормализовать липидный профиль крови: доказано, что он снижает уровень триглицеридов, плохого холестерина и повышает уровень холестерина хорошего. Не следует забывать, что большинство больных диабетом либо имеют повышенный вес, либо и вовсе страдают ожирением, поэтому метформин для них становится средством, убивающим двух зайцев.

Способность препарата благотворно влиять на массу тела и наряду с этим хорошая переносимость стали причиной его популярности среди желающих похудеть, не имеющих проблем с сахаром. Метформин – единственный препарат для одновременной профилактики осложнений сахарного диабета и сердечнососудистых заболеваний. Статьи. Опубликовано в журнале: ЭФ. Применение метформина рекомендовано для профилактики сахарного диабета 2 типа лицам с предиабетом и дополнительными факторами риска развития явного сахарного диабета 2 типа, к которым относятся: возраст менее 60 лет; индекс массы тела (ИМТ) ≥30 кг/м2; гестационный сахарный диабет в анамнезе; семейный анамнез сахарного диабета у родственников первой линии родства; повышенная концентрация триглицеридов; сниженная концентрация холестерина ЛПВП; артериальная гипертензия. Метформин не влиял на фертильность самцов или самок крыс при применении в дозах, втрое превышающих максимальную рекомендованную Метформин снижает выработку глюкозы в печени, уменьшает кишечную абсорбцию глюкозы и улучшает чувствительность к инсулину за счет увеличения периферического поглощения и утилизации глюкозы. При терапии метформином секреция инсулина остается неизменной, в то время как уровень инсулина натощак и однодневный (суточный) инсулиновый ответ в плазме крови могут снижаться. Фармакокинетика. Абсорбция. Абсолютная биодоступность метформина в форме таблеток с обычным высвобождением в дозе 500 мг, принимаемых натощак, составляет приблизительно от 50 до 60%. Метформин – это лекарство, используемое для лечения диабета 2 типа и его профилактики, если существует высокий риск развития болезни. Средство также используется при лечении синдрома поликистозных яичников, хотя во многих странах препарат для этих целей официально не одобрен. Получая рецепт у эндокринолога, пациенты, часто интересуются, как работает метформин и какие у него побочные эффекты. Метформин – действие при диабете 2 типа. Содержание статьи. Метформин – действие при диабете 2 типа. Метформин – показания. Метформин – препараты и дозировка (страны Европы). Эффективность метформина при лечении диабета. Метформин – дополнительное действие. Побочные эффекты метформина. Метформин показал свою эффективность как у людей с диабетом 2 типа, так и у людей с нарушенной толерантностью к глюкозе, у которых после приема этого лекарства наблюдается задержка развития диабета. Более того, после применения метформина, помимо эффекта нормализации уровня глюкозы в крови, было обнаружено снижение риска диабетических осложнений и риска сердечного приступа и смертности от диабета. Важной особенностью метформина также является низкий риск гипогликемии. Нормализация уровня глюкозы в крови. Проект клинических рекомендаций. Профилактика развития сахарного диабета типа 2: роль и место метформина. Данные клинические рекомендации разработаны экспертами Российской ассоциации эндокринологов (состав рабочей группы отражен в приложении А1). В феврале 2015 г. состоялось первое заседание экс-пертной комиссии под председательством профессора.С. Аметова, и по итогам заседания было принято решение о создании проекта российских клинических рекомендаций по профилактике сахарного диабета типа 2. В июне 2019 г. состоялось второе заседание рабочей группы, в ходе которого была согласована основна. Метформин Боримед — инструкция, показания к применению, показания и противопоказания. Наличие в аптеках, цены и аналоги препарата Метформин Боримед на сайте 103.by. Лекарственные средства для лечения сахарного диабета. Средства для снижения уровня глюкозы в крови, кроме инсулина. Код АТХ: А10ВА02. Фармакологические свойства. Фармакодинамика Метформин снижает гипергликемию, не приводит к развитию гипогликемии. В отличие от сульфонилмочевины не стимулирует секрецию инсулина и не вызывает гипогликемического эффекта у здоровых лиц. Снижает в плазме крови как исходный уровень глюкозы, так и уровень глюкозы после приема пищи. Метформин — отзывы пациентов и врачей, ответы и вопросы, обсуждение препарата. Профилактика сахарного диабета 2 типа у пациентов с предиабетом с дополнительными факторами риска развития сахарного диабета 2 типа, у которых изменение образа жизни не позволило достичь адекватного гликемического контроля. Противопоказания. Повышенная чувствительность к метформину или к любому вспомогательному веществу

таблетки диабет и диета метформин для профилактики диабета

таблетки форсига инструкция по применению от диабета

чем лечить сахарный диабет 1 типа таблетки диабет и диета лекарство амарил от диабета цена отек ног при сахарном диабете лечить грибок при диабете как лечить таблетки против сахарного диабета лучшие лекарства от давления при диабете

мочегонные народные средства при сахарном диабете лекарства от диабета второго типа

метформин для профилактики диабета лекарство амарил от диабета цена

таблетки против сахарного диабета
лучшие лекарства от давления при диабете
мочегонные народные средства при сахарном диабете
лекарства от диабета второго типа
профилактика диабета кратко
таблетки от ног при диабете

Универсальное средство снижает артериальное давление, стимулирует иммунную защиту, снижает риск развития сердечно-сосудистых заболеваний. Оказывает помощь при сахарном диабете. Содержит бета-адренометики, устраняющие чувство тревоги и стресса. Используется для профилактики сердечных заболеваний и нормализации сердечного ритма. Гликирон – это единственный высокоэффективный препарат, который может помочь людям старшего возраста. Это особенно актуально для пожилых людей в силу их преклонного возраста. За счет безопасного внутреннего состава, комплекс не оказывает никакого негативного воздействия на клетки, ткани и внутренние органы. какое средство от сахарного диабета, лекарство от сахарного диабета форсига. дифосулин средство от диабета, розовые таблетки от сахарного диабета 2 типа, Где в Одинцово купить Гликирон, лекарство от сахарного диабета для кошек, дорогие лекарства от сахарного диабета, меры профилактики диабета, сахарный диабет народные средства снижения, таблетки от сахарного диабета джардинс, таблетки от сахарного диабета список, профилактика сахарного диабета 2 типа подразумевает тест, опрелости при сахарном диабете чем лечить

таблетки от диабета 2 метформин

таблетки от диабета 2 метформин

таблетки от диабета 2 метформин

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое таблетки от диабета 2 метформин?

Сахарный диабет 2 типа при правильном подходе легко поддается лечению. Главное – это выбрать средство, которое будет способствовать оказанию не только симптоматического, но и терапевтического эффекта. К таковым и относится Глюминал, отзывы о котором подтверждают, что он действительно работает.

Эффект от применения таблетки от диабета 2 метформин

Глюминал – средство на основе растительных компонентов, обеспечивающее эффективное лечение сахарного диабета 2 типа. Его активные вещества действуют сразу в нескольких направлениях – улучшают синтез собственно инсулина поджелудочной железой и повышают к нему резистентность клеток. В результате этого возобновляется обмен веществ, уровень глюкозы в крови падает, состояние человека улучшается, риски возникновения осложнений снижаются к минимуму. При этом, препарат не имеет противопоказаний и не вызывает привыкания.

Мнение специалиста

Состав препарата полностью натурален. Глюминал включает в себя экстракты, витамины и вытяжки лекарственных растений. Сбалансированная формула этого средства помогает поддерживать оптимальный уровень самочувствия всем пациентам и вести нормальную полноценную жизнь.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ таблетки от диабета 2 метформин необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Nika

Состав препарата полностью натурален. Глюминал включает в себя экстракты, витамины и вытяжки лекарственных растений. Сбалансированная формула этого средства помогает поддерживать оптимальный уровень самочувствия всем пациентам и вести нормальную полноценную жизнь.

Варя

Глюминал от диабета является новинкой в области эндокринологии от российских врачей, которая поможет восстановить сахар в крови и нормализовать работу всего организма в целом. Натуральная добавка выпускается в форме пластинок для рассасывания.

В отличие от других лекарственных средств, эти капсулы не содержат в составе химических ингредиентов. Поэтому противопоказаний у Глюминала нет. Единственное, о чем предупреждает производитель, он может вызывать аллергические реакции. Поэтому, при наличии непереносимости хотя бы 1 компонента, принимать его нежелательно. Где купить таблетки от диабета 2 метформин? Состав препарата полностью натурален. Глюминал включает в себя экстракты, витамины и вытяжки лекарственных растений. Сбалансированная формула этого средства помогает поддерживать оптимальный уровень самочувствия всем пациентам и вести нормальную полноценную жизнь.

Применение метформина рекомендовано для профилактики сахарного диабета 2 типа лицам с предиабетом и дополнительными факторами риска развития явного сахарного диабета 2 типа, такими как: • возраст менее 60 лет Состав на 1 таблетку, покрытую пленочной оболочкой: Действующее вещество: метформина гидрохлорид 500 мг г . Дети и подростки Диагноз сахарного диабета 2 типа должен быть подтвержден до начала лечения метформином. Ядро таблетки: метформина гидрохлорид субстанция-гранулы 540,00 мг. Действующее вещество . Сахарный диабет 2 типа, особенно у пациентов с ожирением, при неэффективности диетотерапии и физических нагрузок Характеристика вещества Метформин. Метформина гидрохлорид — кристаллическое вещество от белого до почти белого цвета с молекулярной массой 165,63, легко растворяется в воде и практически не растворяется в ацетоне, диэтиловом эфире и хлороформе. Фармакология. Таблетки 500 мг — круглые плоскоцилиндрические таблетки белого или почти белого цвета с риской с одной стороны и фаской с двух сторон. . Диагноз сахарного диабета 2 типа должен быть подтвержден до начала лечения метформином. В ходе клинических исследований продолжительностью 1 год. Метформин. Лекарственная форма. Таблетки, 500 мг, 850 мг и 1000 мг. Состав. Одна таблетка 500 мг содержит . Средства для лечения сахарного диабета. Сахароснижающие препараты для перорального приема. Бигуаниды. Сахарный диабет II типа (инсулиннезависимый) при неэффективности диетотерапии, особенно у больных, страдающих ожирением: — как . При лечении высокими дозами применяют препарат Метформин, таблетки покрытые оболочкой 1000 мг. В случае перехода к лечению препаратом. Читайте инструкцию по применению препарата Метформин Тева таблетки 1000 мг 60 шт на сайте интернет-аптеки Горздрав: состав . Метформин — пероральное гипогликемическое средство из группы бигуанидов. У больных сахарным диабетом снижает концентрацию глюкозы в крови путем угнетения. Сахарный диабет 2 типа (инсулиннезависимый) при неэффективности диетотерапии и физической нагрузки, у пациентов с ожирением: у взрослых — в качестве. Подробная инструкция по применению Метформин таблетки покрыт. плен. об. Таблетки — 1 таб.: Активное вещество: метформина гидрохлорид 1000 мг. . Сахарный диабет 2 типа (инсулиннезависимый) при неэффективности . Метформин в небольших количествах выделяется с грудным молоком, при этом концентрация метформина в грудном молоке может составлять.
https://www.mit.in.th/texteditor/uploade/sakharoponizhaiushchie_tabletki_pri_diabete_23637. xml
http://kolyma-trans.ru/upload/tabletki_ot_povyshennogo_davleniia_pri_sakharnom_diabete3808.xml
http://www.kanuu.com/newsletter/images/tabletki_gliukofazh_ot_sakharnogo_diabeta_otzyvy5115.xml
http://hk-bbc.com/upload/vitaminy_dlia_profilaktiki_diabeta5190.xml
http://www.perthstorageunits.com.au/userfiles/tabletki_ot_diabeta_siofor5794.xml
Глюминал – средство на основе растительных компонентов, обеспечивающее эффективное лечение сахарного диабета 2 типа. Его активные вещества действуют сразу в нескольких направлениях – улучшают синтез собственно инсулина поджелудочной железой и повышают к нему резистентность клеток. В результате этого возобновляется обмен веществ, уровень глюкозы в крови падает, состояние человека улучшается, риски возникновения осложнений снижаются к минимуму. При этом, препарат не имеет противопоказаний и не вызывает привыкания.
таблетки от диабета 2 метформин
Сахарный диабет 2 типа при правильном подходе легко поддается лечению. Главное – это выбрать средство, которое будет способствовать оказанию не только симптоматического, но и терапевтического эффекта. К таковым и относится Глюминал, отзывы о котором подтверждают, что он действительно работает.
Как правильно снизить уровень сахара в пище, чтобы не навредить здоровью. . Это также помогает поддерживать здоровый вес, что крайне важно при диабете. . Овсяные отруби значительно снижают уровень сахара в крови при условии, что они готовятся быстро или вообще подаются без варки, залитые. Причины сахарного диабета. Как снизить уровень сахара в крови. Народные средства. . При сахарном диабете все средства хороши, так говорил мой дедушка. Ему много советовали народных средств, чтоб снизить сахар в крови. Он все применял и пробовал. Давайте поговорим о. Народные средства Снижения Сахара в крови. . Все указанные средства из категории народная медицина нужно принимать при повышенном уровне сахара крайне осторожно – после каждого употребления обязательно. Для людей, страдающих от сахарного диабета, рекомендуется питание богатое овощами, фруктами и белками. Следование принципам питания, исключение одних и преобладание других продуктов поможет контролировать уровень сахара в крови. При этом высокий сахар не обязательно признак сахарного диабета. Нередко его кратковременное повышение – это приспособительная реакция организма на перевозбуждение . Снизить калорийность блюд, если есть избыточная масса тела. Заменить чай и кофе на фитосборы, содержащие листья черники. Профилактика сахарного диабета. У семидесяти процентов людей, имеющих . Это вызывает резкое возрастание в крови уровня сахара и синтез инсулина — гормона . Занятия различными видами физической активности понижают уровень сахара не только у предрасположенных к диабету, но и у страдающих. Правильное питание помогает бороться с диабетом. . Курс по профилактике диабета. Курс направлен на снижение сахара в крови, нормализацию обмена . Аир – одно из лучших горько-пряных желудочных средств, включенных в Фармакопею. Он эффективно выравнивает желудочную секрецию, устраняет. Другие народные средства, снижающие уровень сахара (манжетка, овес, семена льна, цикорий, шиповник). . Как видно вариантов лечения диабета народными методами довольно много, что безусловно дает больным надежду на улучшение состояния и, возможно, полного выздоровления. — Сахарный диабет — это заболевание, характеризующееся хроническим повышением уровня сахара в крови вследствие абсолютного или относительного дефицита инсулина — гормона поджелудочной железы.

как пить метформин для профилактики диабета

как пить метформин для профилактики диабета

как пить метформин для профилактики диабета

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое как пить метформин для профилактики диабета?

Я диабетик со стажем, поэтому смело могу советовать покупать Глюминал. Он действительно быстро помогает снизить сахар, улучшает общее состояние, снимает симптомы недомогания.

Эффект от применения как пить метформин для профилактики диабета

В настоящее время проблема такого заболевания, как сахарный диабет, остается по-настоящему актуальной. Все больше людей во всем мире в достаточно молодом возрасте страдают от высокого сахара в крови, тяжелых осложнений и частых приступов. Глюминал от диабета создан европейскими специалистами для того, чтобы быстро улучшить состояние пациента, стабилизировать работу поджелудочной железы, избавиться от ежедневных уколов и таблеток.

Мнение специалиста

Глюминал – средство на основе растительных компонентов, обеспечивающее эффективное лечение сахарного диабета 2 типа. Его активные вещества действуют сразу в нескольких направлениях – улучшают синтез собственно инсулина поджелудочной железой и повышают к нему резистентность клеток. В результате этого возобновляется обмен веществ, уровень глюкозы в крови падает, состояние человека улучшается, риски возникновения осложнений снижаются к минимуму. При этом, препарат не имеет противопоказаний и не вызывает привыкания.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ как пить метформин для профилактики диабета необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Тая

Глюминал – средство на основе растительных компонентов, обеспечивающее эффективное лечение сахарного диабета 2 типа. Его активные вещества действуют сразу в нескольких направлениях – улучшают синтез собственно инсулина поджелудочной железой и повышают к нему резистентность клеток. В результате этого возобновляется обмен веществ, уровень глюкозы в крови падает, состояние человека улучшается, риски возникновения осложнений снижаются к минимуму. При этом, препарат не имеет противопоказаний и не вызывает привыкания.

Евгения

Инструкция к Глюминал содержится в аннотации. Принимать его необходимо 2 раза в день по 1 капсуле. Длительность лечения составляет 1 месяц. В течение года рекомендуется пройти 2-3 курса для закрепления результата.

Глюминал обладает повышенной эффективностью при абсолютной безопасности и гипоаллергенности. Результаты проведенных проверок подтверждают и покупатели, оставляющие в интернете многочисленные положительные отзывы. Где купить как пить метформин для профилактики диабета? Глюминал – средство на основе растительных компонентов, обеспечивающее эффективное лечение сахарного диабета 2 типа. Его активные вещества действуют сразу в нескольких направлениях – улучшают синтез собственно инсулина поджелудочной железой и повышают к нему резистентность клеток. В результате этого возобновляется обмен веществ, уровень глюкозы в крови падает, состояние человека улучшается, риски возникновения осложнений снижаются к минимуму. При этом, препарат не имеет противопоказаний и не вызывает привыкания.
Метформин Боримед — инструкция, показания к применению, показания и противопоказания. . Лекарственные средства для лечения сахарного диабета. Средства для снижения уровня глюкозы в крови, кроме инсулина. На фоне приема метформина масса тела пациента либо остается стабильной, либо умеренно снижается. Показания к применению. Сахарный диабет 2 типа, особенно у пациентов с ожирением, при неэффективности диетотерапии и физических нагрузок: • у взрослых в качестве монотерапии или в. Метформин – единственный препарат для одновременной профилактики осложнений сахарного диабета и . У пациентов с сахарным диабетом суточная доза метформина 2000 мг оказалась оптимальной для контроля уровня глюкозы в крови [3]. На российском рынке оригинальный. Применение метформина рекомендовано для профилактики сахарного диабета 2 типа лицам с предиабетом и дополнительными факторами риска развития явного сахарного диабета 2 типа, такими как: • возраст менее 60 лет Применение метформина рекомендовано для профилактики сахарного диабета 2 типа лицам с предиабетом и дополнительными факторами риска развития явного сахарного диабета 2 типа, к которым относятся Профилактика развития сахарного диабета типа 2: роль и место метформина. Данные клинические рекомендации разработаны экспертами Российской ассоциации эндокринологов (состав рабочей группы отражен в приложении А1). Профилактика сахарного диабета 2 типа у пациентов с дополнительными факторами риска развития сахарного диабета 2 типа, у . Применение препарата Метформин рекомендовано для профилактики сахарного диабета 2 типа лицам с преддиабетом и дополнительными факторами риска. Читайте инструкцию по применению препарата Метформин Тева таблетки 1000 мг 60 шт на сайте интернет-аптеки Горздрав: состав, побочные действия, показания, противопоказания. Бесплатная доставка. Метформин снижает выработку глюкозы в печени, уменьшает кишечную абсорбцию глюкозы и улучшает чувствительность к инсулину за счет увеличения периферического поглощения и утилизации глюкозы. Метформин — это лекарство, используемое для лечения диабета 2 типа и его профилактики, если существует высокий риск развития болезни. Средство также используется при лечении синдрома поликистозных яичников, хотя во многих странах препарат для этих целей официально не одобрен.
http://chickenwild.com/upload/contents/images/miasnikov_diabet_tabletki8138.xml
https://swiatsuma.com/_files/public/userfiles/luchshie_tabletki_ot_diabeta_2_tipa_otzyvy8129.xml
http://www.eventcateringsolutions.com.au/images/dzhardin_tabletki_ot_diabeta8229.xml
http://www.okna-dvere-online.cz/media/upload/upload/miasnikov_diabet_tabletki6174.xml
http://www.editionsitaliques.com/userfiles/amaril_tabletki_ot_diabeta_tsena_i_otzyvy2292.xml
В настоящее время проблема такого заболевания, как сахарный диабет, остается по-настоящему актуальной. Все больше людей во всем мире в достаточно молодом возрасте страдают от высокого сахара в крови, тяжелых осложнений и частых приступов. Глюминал от диабета создан европейскими специалистами для того, чтобы быстро улучшить состояние пациента, стабилизировать работу поджелудочной железы, избавиться от ежедневных уколов и таблеток.
как пить метформин для профилактики диабета
Я диабетик со стажем, поэтому смело могу советовать покупать Глюминал. Он действительно быстро помогает снизить сахар, улучшает общее состояние, снимает симптомы недомогания.
Лечение сахарного диабета первого типа не исключает применения инсулина, а дополняет его народными средствами. Основное лечение сахарного диабета 1 типа состоит в введении инсулина. Но очень важно сохранить собственные клетки островков. Лечение сахарного диабета 1 типа. Лечение заболевания основано на постоянном введении инсулина. . В некоторых случаях пациент с поставленным диагнозом обращается за помощью к народным целителям и за другими альтернативными видами лечения. Если прием народных средств. Типы сахарного диабета. Сахарный диабет 1 типа (ранее использовали название: инсулинзависимый сахарный диабет) . Если вовремя не обратиться к врачу и не начать лечение сахарного диабета 1 типа инсулином, состояние ухудшается, и очень часто развивается. The firewall on this server is blocking your connection. You need to contact the server owner or hosting provider for further information. Your blocked IP address is: 93.158.161.30. The hostname of this server is: skm203.hostsila.org. You can try to Лечение иностранных граждан в беларуси. . — Сахарный диабет — это заболевание, характеризующееся хроническим повышением уровня . В основе сахарного диабета 2-го типа лежит нарушение биологического действия инсулина. Как правило, диагностируется после 40 лет. Лечение сахарного диабета направлено на восстановление качества жизни. Диагностику и лечение сахарного . В результате человек, заболевший диабетом 1-го типа, достаточно быстро худеет. Диабет 1-го типа чаще проявляется у лиц моложе 30 лет. Диабет 2-го типа. Сахарный диабет – эндокринное заболевание, при котором сильно увеличивается концентрация сахара в крови из-за недостатка инсулина либо его пониженной биологической активности. В результате нарушаются все виды обмена веществ. Сахарный диабет – это одна из самых острых проблем мирового здравоохранения. . Поэтому больные сахарным диабетом второго типа страдают от лишнего веса на . Обычно это кардиолог и окулист. Лечение сахарного диабета. Методы лечения зависят от типа заболевания. Первый тип сахарного диабета чаще всего диагностируется в возрасте до 40 лет. В большинстве случаев это связано с аутоиммунным разрушением клеток . Сахарный диабет 1-го типа требует пожизненного лечения, предполагающего ежедневные инъекции инсулина или инсулиновые помпы для. Первый тип диабета чаще встречается у детей и молодых людей. Заболевание проявляется, когда почти 80% клеток поджелудочной . Лечение сахарного диабета подразумевает активное участие человека в лечении заболевания, и личную ответственность за здоровье. Специалисты говорят, что.

37 отзывов, инструкция по применению

Применение при беременности и кормлении грудью

Препарат противопоказан к применению при беременности.

Декомпенсированный сахарный диабет при беременности связан с повышенным риском возникновения врожденных пороков и перинатальной смертности. Ограниченное количество данных свидетельствует о том, что применение метформина у беременных женщин не увеличивает риск развития врожденных пороков у детей.

При планировании беременности, а также в случае наступления беременности на фоне приема метформина, препарат должен быть отменен, и назначена инсулинотерапия. Необходимо поддерживать содержание глюкозы в плазме крови на уровне, наиболее близком к норме для снижения риска возникновения пороков развития плода.

Метформин выделяется с грудным молоком. Побочные эффекты у новорожденных при грудном вскармливании на фоне приема метформина не наблюдались. Однако в связи с ограниченным количеством данных, применение препарата в период грудного вскармливания не рекомендовано. Решение о прекращении грудного вскармливания следует принимать с учетом пользы грудного вскармливания и потенциального риска возникновения побочных эффектов у ребенка.

Применение при нарушениях функции печени

Противопоказан при нарушениях функции печени, почечной недостаточности.

Применение при нарушениях функции почек

Противопоказан при нарушениях функции почек или почечной недостаточности (КК

Применение у детей

У детей в возрасте 10 лет и старше Глюкофаж^® можно применять как в виде монотерапии, так и в сочетании с инсулином. Обычная начальная доза составляет 500 мг или 850 мг 1 раз/сут после или во время приема пищи. Через 10-15 дней дозу необходимо скорректировать на основании концентрации глюкозы крови. Максимальная суточная доза составляет 2000 мг, разделенная на 2-3 приема.

Особые указания

Лактацидоз

Лактацидоз является редким, но серьезным (высокая смертность при отсутствии неотложного лечения) осложнением, которое может возникнуть из-за кумуляции метформина. Случаи лактацидоза при приеме метформина возникали в основном у больных сахарным диабетом с выраженной почечной недостаточностью.

Следует учитывать и другие сопряженные факторы риска, такие как декомпенсированный сахарный диабет, кетоз, продолжительное голодание, алкоголизм, печеночная недостаточность и любое состояние, связанное с выраженной гипоксией. Это может помочь снизить частоту случаев возникновения лактацидоза.

Следует учитывать риск развития лактацидоза при появлении неспецифических признаков, таких как мышечные судороги, сопровождающиеся диспепсическими симптомами, болью в животе и выраженной астенией. Лактацидоз характеризуется ацидотической одышкой, болью в животе и гипотермией с последующей комой.

Диагностическими лабораторными показателями являются снижение рН крови (<7.25), содержание лактата в плазме крови свыше 5 ммоль/л, повышенные анионный промежуток и отношение лактат/пируват. При подозрении на метаболический ацидоз необходимо прекратить прием препарата и немедленно обратиться к врачу.

Хирургические операции

Применение метформина должно быть прекращено за 48 ч до проведения плановых хирургических операций и может быть продолжено не ранее чем через 48 ч после, при условии, что в ходе обследования почечная функция была признана нормальной.

Функция почек

Поскольку метформин выводится почками, перед началом лечения и регулярно в последующем, необходимо определять КК: не реже одного раза в год у пациентов с нормальной функцией почек, и 2-4 раза в год у пациентов пожилого возраста, а также у пациентов с КК на нижней границе нормы.

Следует проявлять особую осторожность при возможном нарушении функций почек у пациентов пожилого возраста, при одновременном применении антигипертензивных препаратов, диуретиков или НПВС.

Использование в педиатрии

Диагноз сахарного диабета 2 типа должен быть подтвержден до начала лечения метформином.

В ходе клинических исследований продолжительностью 1 год было показано, что метформин не влияет на рост и половое созревание. Однако в виду отсутствия долгосрочных данных, рекомендован тщательный контроль последующего влияния метформина на эти параметры у детей, особенно в период полового созревания. Наиболее тщательный контроль необходим детям в возрасте 10-12 лет.

Другие меры предосторожности

Пациентам рекомендуется продолжать соблюдать диету с равномерным потреблением углеводов в течение дня. Пациентам с избыточной массой тела рекомендуется продолжать соблюдать гипокалорийную диету (но не менее 1000 ккал/сут).

Рекомендуется регулярно проводить стандартные лабораторные анализы для контроля сахарного диабета.

Метформин при монотерапии не вызывает гипогликемию, однако рекомендуется проявлять осторожность при его применении в комбинации с инсулином или другими гипогликемическими средствами (в т. ч. производными сульфонилмочевины, репаглинидом).

Влияние на способность к вождению автотранспорта и управлению механизмами

Монотерапия препаратом Глюкофаж^® не вызывает гипогликемии, поэтому не влияет на способность управлять транспортными средствами и механизмами. Тем не менее, следует предостеречь пациентов о риске гипогликемии при применении метформина в сочетании с другими гипогликемическими препаратами (в т.ч. с производными сульфонилмочевины, инсулином, репаглинидом).

Чудо-лекарство? Изучение молекулярных механизмов метформина, лекарства от диабета со средневековыми корнями

Таблетки Метформин 500 мг. Кредит: общественное достояние

Всего за пенни за дозу метформин является лекарством от диабета 2 типа, имеющим далекие корни в средневековой народной медицине и мощной способностью снижать массу тела, жировую массу, уровень циркулирующей глюкозы и полностью предотвращать заболевание у людей с повышенным риском.

Новое исследование наиболее часто назначаемого в мире препарата для лечения диабета 2-го типа проводится в условиях, когда глобальная эпидемия ожирения не ослабевает.Ожирение является ведущим фактором риска развития диабета 2 типа, нарушения обмена веществ.

Хотя ученые обнаружили, что более чем на 60 процентов способность метформина контролировать тип 2 обусловлена ​​снижением массы тела, до сих пор требовалось выявить ключевые молекулярные механизмы, лежащие в основе того, как лекарство действует.

В Соединенном Королевстве доктор Стивен О’Рахилли и его коллеги из Кембриджского университета находятся в авангарде ученых всего мира, которые провели серию исследований метформина на людях и лабораторных животных.Команда показала, как препарат вызывает потерю веса даже у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, у которых нет диабета.

Помимо своей работы, другие ученые приветствуют метформин как чудодейственное лекарство не только из-за его влияния на диабет 2 типа, но и из-за его выдающегося положения в исследованиях рака и потенциального влияния на легкие людей, у которых диагностирован туберкулез.

«Метформин впервые был использован в качестве сахароснижающего препарата у пациентов с диабетом 2 типа», — сообщил Medical Xpress профессор клинической биохимии и медицины О’Рахилли.«У этих [пациентов] потеря веса может быть довольно скромной, вероятно, потому, что, когда вы снижаете уровень глюкозы при диабете 2 типа, вы прекращаете терять калории с мочой в виде сахара, и это работает против эффекта снижения веса».

«Только когда были проведены долгосрочные исследования среди участников, не страдающих диабетом, стало ясно, что люди, которые действительно хорошо соблюдали режим приема метформина, потеряли в среднем около 6 процентов своего веса и могли удерживать его в течение многих лет», — добавили. О’Рахилли, директор Wellcome Trust-MRC Institute of Metabolic Science-Metabolic Research Laboratories.

В сообщении журнала Nature О’Рахилли и его команда объяснили связь между метформином и ключевым циркулирующим белком, молекулой, известной как GDF15. Инициалы обозначают фактор роста и дифференцировки 15. Белок является членом суперсемейства TGF-β, обширной группы клеточных регуляторных белков.

GDF15 обладает широким спектром биологической активности и обнаруживается в различных тканях, регулируя апоптоз и восстановление клеток.Как оказалось, GDF15 играет важную роль в присутствии метформина для контроля диабета 2 типа.

О’Рахилли и его команда полностью выяснили взаимосвязь, и впервые установили молекулярные механизмы, лежащие в основе потери веса, которая происходит у пациентов, принимающих препарат. Команда обнаружила, что метформин работает с GDF15 и сам по себе, вызывая потерю веса и поддерживая энергетический баланс.

«Наши данные свидетельствуют о том, что большинство, если не все эффекты метформина в отношении потери веса требуют GDF15.Тем не менее, метформин продолжает оказывать некоторое влияние на снижение уровня глюкозы и инсулина, которое не зависит от потери веса и от GDF15», — сказал О’Рахилли.

Исследователи обнаружили, что «лечение метформином довольно заметно увеличивает уровни [GDF15] у всех людей, регулярно принимающих препарат», — сказал О’Рахилли.

Он назвал метформин наиболее часто назначаемым лекарством от диабета на планете. Известный в общем как метформин, препарат продается под торговой маркой Глюкофаж.Шестьдесят таблеток стоят около 4 долларов в магазинах-дискаунтерах, отпускаемых по рецепту, таких как Walmart в США.

Одобренный Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США в 1995 году, метформин десятилетиями широко назначался в Европе, прежде чем ему наконец дали зеленый свет в стране с более чем 30 миллионами диабетиков 2 типа. В США также насчитывается 84,1 миллиона человек с преддиабетом, состоянием, которое может привести к полномасштабной болезни.

Среди лекарств метформин имеет долгое и легендарное прошлое.Соединение, которому суждено стать метформином, было впервые выделено в средние века из французской сирени, растения, научно известного как Galega officinalis. Измельченные цветы и листья давали целители пациентам, страдающим от постоянного мочеиспускания, признака расстройства, которое позже стало известно как диабет. Активный ингредиент французской сирени, растения, также называемого козьей рутой, спустя сотни лет был идентифицирован как галегин, который вызывал резкое снижение уровня глюкозы в крови.

К 1950-м годам ученые смогли использовать народную медицину и разработать лекарство, которое стало метформином. В последние годы исследования in vitro, проведенные доктором Ллойдом Тротманом в лаборатории Колд-Спринг-Харбор в Нью-Йорке, показали, что метформин эффективен против клеток рака предстательной железы. А в ноябре ученые из Мексики обнаружили, что метформин способствует уничтожению бактерий Mycobacterium tuberculosis в легких. Препарат усиливает активность антимикробных пептидов, известных как β-дефенсины.Пептиды распространены в эпителиальной ткани легких и активны в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий.

Тем временем O’Rahilly и его коллеги описали преимущества метформина как в клинических испытаниях на людях, так и в экспериментах на животных моделях. В обоих типах исследований метформин влиял на потерю веса и активность GDF15.

Например, в одном из клинических испытаний на людях, процитированном в статье Nature , команда измерила циркулирующий GDF15 и обнаружила, что после двух недель приема метформина он составлял приблизительно 2.5-кратное увеличение циркулирующего GDF15. Чтобы определить, было ли увеличение устойчивым, уровни белка измеряли через шесть, 12 и 18 месяцев. Пациенты, принимавшие метформин, потеряли около 3,5% массы тела. В другом испытании пациенты потеряли еще больше.

У мышей дикого типа пероральный прием метформина также увеличивал циркулирующий GDF15. Уровни белка дополнительно повышались в дистальном отделе кишечника и почках. Метформин предотвращал увеличение веса в ответ на диету с высоким содержанием жиров у животных, но не у мышей, у которых отсутствовал GDF15 или его рецепторный белок, GFRAL.Команда обнаружила, что метформин оказывает влияние как на потребление энергии, так и на расход энергии, что требует GDF15.

О’Рахилли сказал, что исследование было воспроизведено другими группами, заверившими его и его коллег, что они продемонстрировали, как метформин снижает массу тела.

«Ключевые результаты нашей работы уже были независимо воспроизведены Грегом Стейнбергом из Университета Макмастера. Мы действительно проводим дальнейшие исследования, чтобы выяснить, откуда именно берется GDF15 и как он регулируется», — сказал О’Рахилли.

---

Раскрыт секрет полезных свойств лекарства от диабета

---

Дополнительная информация: Энтони П. Колл и др. GDF15 опосредует влияние метформина на массу тела и энергетический баланс, Nature (2019).DOI: 10.1038/s41586-019-1911-y

© 2020 Наука Х Сеть

Цитата : Чудо-наркотик? Изучение молекулярных механизмов действия метформина, лекарства от диабета со средневековыми корнями (10 января 2020 г. ) получено 10 января 2022 г. с https://medicalxpress.com.com/news/2020-01-drug-exploring-morphic-mechanisms-metformin.html

Этот документ защищен авторским правом. Помимо любой добросовестной сделки с целью частного изучения или исследования, никакие часть может быть воспроизведена без письменного разрешения. Контент предоставляется только в ознакомительных целях.

Сиросингопин повышает чувствительность раковых клеток к уничтожению метформином

ВВЕДЕНИЕ

Метформин, пероральный противодиабетический препарат класса бигуанидов, является наиболее широко назначаемым препаратом для лечения диабета 2 типа. Он действует как мягкий митохондриальный ингибитор, а его воздействие на ключевые метаболические органы, такие как печень и мышцы, приводит к снижению уровня глюкозы в крови и восстановлению чувствительности к инсулину на уровне всего организма. Метформин является хорошо переносимым препаратом, который можно принимать в течение многих лет с небольшими побочными эффектами, такими как редкие случаи лактоацидоза.

Появляется все больше доказательств того, что метформин, помимо его антидиабетического действия, обладает противоопухолевыми свойствами. Эпидемиологические исследования показали, что заболеваемость раком значительно снижается у пациентов с диабетом, получающих метформин ( 1 – 5 ).Назначение метформина в качестве неоадъюванта также приводит к улучшению клинического ответа после операции ( 6 , 7 ). Эти наблюдения подтверждаются исследованиями in vitro, в которых метформин ингибирует рост линий раковых клеток из самых разных типов тканей ( 8 ), и исследованиями in vivo, в которых метформин активен на моделях ксенотрансплантатов мышей ( 9 ). Считается, что метформин оказывает противоопухолевое действие за счет косвенного системного и прямого клеточного действия ( 10 ).Системный эффект метформина снижает уровень глюкозы в крови и, следовательно, доступность глюкозы раковым клеткам, нуждающимся в глюкозе. На клеточном уровне метформин ингибирует митохондриальное дыхание в раковых клетках, которые уже испытывают дефицит поглощения глюкозы, что приводит к снижению уровня аденозин-5′-трифосфата (АТФ). В результате активация AMPK приводит к ингибированию мишени рапамицинового комплекса 1 (mTORC1) у млекопитающих, основного сигнального узла для роста, трансляции и метаболизма клеток.В настоящее время проводится несколько клинических испытаний, изучающих противоопухолевую активность метформина [www.clinicaltrials.gov, обзор Pollak and Chae et al. ( 11 , 12 )]. Несмотря на в целом благоприятную картину метформина как потенциального противоопухолевого средства, имеются постоянные исследования, в которых метформин практически не оказывает влияния на рак ( 13 – 16 ) или не имеет преимуществ по сравнению с другими противодиабетическими средствами ( 17 ). , 18 ).Разрешение несоответствия между исследованиями, отмеченными выше, заключается в том, что концентрация метформина, используемая для получения противоопухолевой активности in vitro, значительно превышает концентрацию в сыворотке in vivo, которая может быть достигнута при стандартном противодиабетическом назначении ( 19 ). Таким образом, может существовать клиническая серая зона, где эффективность метформина зависит от факторов, которые могут различаться в разных группах исследования. Это говорит о том, что для разработки метформина в качестве клинически эффективного противоракового средства было бы желательно снизить его терапевтический порог до разумно достижимого диапазона in vivo.С этой целью мы провели скрининг для выявления соединений, которые взаимодействуют с низкой сублетальной концентрацией метформина, вызывая гибель раковых клеток. Мы показываем, что антигипертензивный сиросингопин, производное резерпина, является синтетически летальным с метформином и что оба соединения взаимодействуют синергетически, убивая широкий спектр типов раковых клеток, не демонстрируя активности против нетрансформированных клеток. Синтетическая летальность при применении сиросингопина также наблюдалась для каждого тестируемого ингибитора митохондриальной цепи переноса электронов (ETC).Синтетическое летальное взаимодействие, вызванное сиросингопином и митохондриальными ингибиторами, происходит при концентрациях, существенно ниже порога токсичности для каждого соединения в отдельности. Эти результаты позволяют предположить, что комбинация сиросингопина с митохондриальными ингибиторами представляет собой новый вариант для обоих классов соединений в терапии рака. Снижение терапевтического порога метформина и родственного бигуанида фенформина может позволить их клиническое применение в качестве противоопухолевых средств.

ОБСУЖДЕНИЕ

Мы описываем мощное взаимодействие между сиросингопином, антигипертензивным препаратом, и митохондриальными ингибиторами ЭТС.Эти два класса препаратов в сочетании вызывают синтетическую летальную реакцию в большинстве протестированных линий раковых клеток, которая была специфична для трансформированных клеток.

Метформин и фенформин вызывают значительный интерес как потенциальные противораковые средства. Хотя многие митохондриальные ингибиторы, такие как азид натрия, ротенон и KCN, известны своей токсичностью, мягкое ингибирование ETC, обеспечиваемое бигуанидами, обеспечивает их безопасное использование и, как правило, чистые клинические записи. Это привело к призывам к переоценке соотношения риска и пользы фенформина для его введения в противораковую терапию ( 29 , 43 ).Однако эффективные концентрации метформина и фенформина, необходимые для противоопухолевого действия в условиях in vitro, выше, чем те, которые достигаются при обычных противодиабетических дозировках in vivo. Таким образом, эффективность этих низких доз для лечения рака in vivo является предметом споров ( 19 , 44 , 45 ). Как отмечается в исследовании Chandel et al. ( 45 ), концентрация метформина в плазме в мышиных моделях при дозах, сравнимых с противодиабетическими препаратами для человека, перекрывается с концентрацией, достаточной для ингибирования окислительного фосфорилирования; тем не менее, другие факторы, такие как фармакокинетика и факторы, связанные с опухолью, могут влиять на клиническую противоопухолевую эффективность. Сенсибилизирующие соединения, которые снижают терапевтический порог бигуанидов, могут помочь проложить путь к их использованию в противоопухолевой терапии. Сиросингопин вызывает гибель клеток со всеми тестируемыми ингибиторами ETC при концентрациях на несколько порядков ниже их цитотоксического порога. Таким образом, сиросингопин способен использовать слабое ингибирование ETC, которое практически невозможно обнаружить (рис. 3, B и C), для мощного уничтожения клеток. Олигомицин, в частности, имеет in vitro IC ₅₀ 750 пМ с сиросингопином и нетоксичен до 16 нМ в его отсутствие.Низкие значения IC ₅₀ in vitro этих небигуанидных ингибиторов ЦЭТ предполагают, что они могут быть фармакологическими альтернативами метформину или фенформину, а также потенциальными альтернативами в случае развития резистентности к бигуанидам в ходе терапии. метформин остается неизвестным, хотя мы установили, что он отличается от ингибирования VMAT (рис. 4). Наблюдение, что сиросингопин связывает α-энолазу, может дать ключ к пониманию основного механизма. Раковые клетки более уязвимы к митохондриальному ингибированию в сочетании с ограничением глюкозы ( 46 ) или гликолитическим ингибированием ( 47 , 48 ). Зависимое от сиросингопина ингибирование активности енолазы и, следовательно, гликолиза является вероятным механизмом синтетической летальности с одновременным ингибированием митохондрий. Однако мы не видим каких-либо доказательств ингибирования активности енолазы сиросингопином in vitro. Возможно, что сиросингопин является пролекарством, которое требует интернализации и метаболизации в активную форму, что объясняет отсутствие активности, наблюдаемое в анализах in vitro.Мы действительно наблюдаем влияние сиросингопина на гликолиз в интактных клетках ρ0, предполагая, что это действительно может играть некоторую роль в синтетическом летальном взаимодействии. Экспрессия γ-энолазы коррелирует с нечувствительностью к сиросингопину-метформину, а эктопическая экспрессия γ-энолазы придает устойчивость к сиросингопину. — лечение метформином. Глиобластомы, гомозиготно делетированные по ENO1, жизнеспособны благодаря экспрессии ENO2; однако эти клетки более уязвимы к ингибированию енолазы из-за снижения общей активности енолазы ( 49 ).Таким образом, экспрессия обеих изоформ енолазы связана с большей устойчивостью к ингибированию енолазы. Тот факт, что сиросингопин связывается только с α-, но не с γ-енолазой, и предположительно нарушает ее функцию, подтверждает эту точку зрения. Однако следует отметить, что нокаута γ-енолазы недостаточно для сенсибилизации резистентных клеточных линий к лекарственному лечению (рис. S8B). необязателен ( 41 , 50 , 51 ).Некоторые из этих функций важны в контексте рака. Усеченная изоформа Eno1, белок 1, связывающий промотор myc , транскрипционно регулирует онкоген c- myc ( 52 ). Связанная с клеточной поверхностью α-енолаза является рецептором плазминогена и связана с большей инвазивностью и метастазированием ( 50 , 53 , 54 ). Сообщалось также, что γ-энолаза находится на плазматической мембране ( 55 ), но в ней отсутствует С-концевой лизин, присутствующий в α-энолазе, который служит рецептором плазминогена.Вместо этого его С-концевая последовательность формирует PDZ-связывающий мотив для белок-белкового взаимодействия ( 41 ). С-концевая последовательность γ-энолазы способствует выживанию клеток за счет активации фосфатидилинозитол-3-киназы/Akt и митоген-активируемой протеинкиназы/передачи сигнала киназы, регулируемой внеклеточным сигналом ( 56 , 57 ) и ингибирования апоптоза ( 58 ). ). γ-энолаза необходима для импорта акцептора тРНК лизина 1 в митохондрии ( 59 ), совместная активность, которая сохранилась от дрожжей до человека.Остается возможным, что нарушение одной из этих вспомогательных функций связано с синтетической летальностью. Две недавние публикации показали, что ингибирование синтеза цитозольного аспартата является синтетическим летальным при ингибировании ETC ( 50 , 60 ), что повышает вероятность того, что сиросингопин может быть ингибитором GOT1 (глутамин-оксалоуксусная трансаминаза 1), цитозольного фермента, который синтезирует аспартат при ингибировании ETC. Однако, похоже, это не так, потому что добавка аспартата не смогла спасти клетки от уничтожения сиросингопином-метформином.

Сиросингопин и метформин являются одобренными препаратами с хорошо зарекомендовавшими себя клиническими данными, не относящимися к терапии рака. Взаимодействие между этими препаратами in vitro и на животных моделях дает надежду на то, что при правильном сочетании они могут найти применение в лечении рака.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Культура клеток

Клетки выращивали в среде Искова с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, пенициллина (100 ЕД/мл) и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37°С и 5% CO ₂ .В среду 6,5 мышиных тучных клеток добавляли мышиный интерлейкин-3 из кондиционированной среды ( 20 ). Клетки ρ0 с нулевым митохондриальным геномом получали добавлением бромистого этидия (0,2 мкг/мл), уридина (50 мкг/мл) и mIL3 (для 6,5ρ0), а вырастающие клетки ρ0 получали после четырех-пяти пассажей. Первичные лейкемические бласты были получены от пациентов, перенесших бластный криз (14 пациентов с ОМЛ и 1 пациент с ХМЛ), с одобрения этического комитета Базеля, Швейцария, и информированного согласия в соответствии с Хельсинкской декларацией. 3D-культуры гепатосфер Huh7 и HepG2 получали путем посева 2×10 ⁵ и 1×10 ⁵ клеток соответственно в 1,5 мл среды (модифицированная Дульбекко среда Игла/F12 + GlutaMAX, дополненная B27, инсулином и эпидермальный фактор роста) в шестилуночных планшетах (поверхностные планшеты Ultra-Low Attachment, Costar). Образование сфер оценивали под микроскопом, и лекарственные препараты добавляли через 24 часа после посева, когда уже можно было наблюдать сферы. Среду меняли каждые 2 дня и добавляли свежие соединения.Жизнеспособность гепатосфер определяли количественно, добавляя в среду 50 мкМ резазурина и измеряя флуоресценцию. Нормальные клетки периферической крови были получены из избыточных единиц в местном банке крови (Blutspendezentrum, University Hospital Basel). Клетки крови и лейкемические бласты высевали в 96-луночные планшеты в количестве 20000 клеток/150 мкл среды и обрабатывали таким же образом, как и установленные клеточные линии.

Анализ клеточной пролиферации

Клетки высевали в 96-луночные титрационные микропланшеты с плотностью 3000 клеток/150 мкл среды (суспензия клеток) или 2000 клеток/150 мкл среды (адгезивные клетки), рост измеряли через 3 дня (суспензионные культуры) или 5 дней (адгезивные клеточные линии) путем добавления 0. 1 объем резазурина (конечная концентрация 50 мкМ). Флуоресценцию считывали при 535/595 нм (возбуждение/испускание) с помощью планшет-ридера. Рост нормализовали к необработанному контролю, и каждую точку данных выполняли в трех экземплярах.

Скрининг синтетического летального препарата метформин

Клетки 6.5 высевали с плотностью 3000 клеток/150 мкл среды Искова в 96-луночные планшеты. Планшеты-реплики устанавливали параллельно, содержащие 4 мМ метформина. Планшеты заражали 1120 лекарствами (Prestwick Chemical Library) в концентрациях 2 и 10 мкМ.Анализ клеточной пролиферации проводили после 3-дневной инкубации с 50 мкМ резазурина, и рост нормализовали по сравнению с необработанными контролями. Цитотоксические соединения убивали или сильно снижали пролиферацию независимо от того, присутствовал ли метформин. Препараты, взаимодействующие с метформином, были летальными только в присутствии 4 мМ метформина. Была установлена ​​точка отсечки >80% роста (нормализованная по ДМСО-контролям) в отсутствие метформина и <10% роста в присутствии 4 мМ метформина.

FACS-анализ

Анализ апоптоза

Клетки окрашивали аннексином V (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя, и апоптотические клетки выявляли с помощью FACS-анализа.Клетки также докрашивали йодидом пропидия (5 мкг/мл) в качестве витального красителя и одновременно определяли долю живых клеток в отдельном канале FACS.

Определение потенциала митохондриальной мембраны

Потенциометрический краситель TMRM (100 нМ; ImmunoChemistry Technologies) добавляли к клеткам за 30 мин до анализа FACS, и клетки непосредственно подвергали FACS. Для измерения мембранного потенциала в HL60ρ0 клетки обрабатывали лекарственными препаратами в течение 30 минут в полной среде, а затем центрифугировали и ресуспендировали в буфере для митохондриального анализа [250 мМ сахарозы, 1 мМ EGTA и 10 мМ трис (pH 7.4)], содержащие соответствующие препараты. При необходимости клетки пермеабилизировали свежеприготовленным сапонином (120 мкг/мл). Затем добавляли TMRM на 30 минут, прежде чем приступить к анализу FACS. Данные FACS анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo (версия 9.6.2).

Иммуноблоттинг

Клетки лизировали в буфере RIPA (радиоиммунопреципитация) и общий белок (от 20 до 40 мкг) наносили на гели SDS-PAGE. Белки наносили на нитроцеллюлозные мембраны и исследовали с помощью имеющихся в продаже антител против α-енолазы, γ-енолазы (Cell Signaling) и MT-Co1 (Abcam).

Эксперименты на мышах

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с федеральными инструкциями по экспериментам на животных и были одобрены Kantonales Veterinäramt кантона Базель-Штадт. Специфичные для печени Pten ^— / Tsc1 ^— мыши с двойным нокаутом обнаруживают развитие опухоли с 10-недельного возраста. Лечение начинали с 15 недель. Мышам внутрибрюшинно каждые 2 дня вводили сиросингопин (7,5 мг/кг массы тела), метформин (200 мг/кг массы тела) или их комбинацию.Двукратно обработанным животным метформин вводили приблизительно за час до второй инъекции сиросингопина. После шести обработок мышей умерщвляли в возрасте примерно 17 недель.

Анализ DARTS

Анализ DARTS проводили в соответствии с Lomenick et al. ( 61 ) с модификациями. Лизат клеток HL60, приготовленный с использованием буфера DARTS, предварительно абсорбировали 50 мкМ сиросингопина в течение 30 минут на льду перед тем, как подвергнуть расщеплению проназой (0, 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/мкл) в течение 30 мин при комнатной температуре. Половину расщепленного лизата наносили на гель SDS-PAGE, и полосы визуализировали с окрашиванием Кумасси. Вырезанные полосы брали для масс-спектрометрического расщепления присутствующих белков.

Термофорез на микроуровне

Рекомбинантные α-энолаза и γ-энолаза (антитела Acris) были помечены красителем Monolith NT Blue. Количество меченого белка для использования было определено эмпирически. К сиросингопину добавляли меченый белок (16-ступенчатое двукратное разведение, начиная с 8 мкМ в индивидуальных пробирках) и инкубировали на льду в течение 30 мин. Каждое отдельное разведение помещали в стеклянные капилляры и измеряли термофорез на Monolith NT.115 (NanoTemper Technologies).

Анализ активности енолазы

Анализ активности енолазы проводили в соответствии с Muller et al. ( 62 ). Объем реакции уменьшали до 100 мкл и проводили в 96-луночных титрационных микропланшетах. Использовали клеточный лизат (0,5 мкг) и изменение флуоресценции вследствие окисления НАДН (восстановленная форма никотинамидадениндинуклеотида) считывали с помощью планшет-ридера при 360/460 нм (возбуждение/испускание).Этот основной экспериментальный протокол использовали в различных условиях: предварительная обработка клеток лекарственным средством или инкубация при комнатной температуре или на льду. Измерения активности енолазы подтверждали с использованием имеющегося в продаже набора (набор для колориметрического/флуорометрического анализа енолазной активности, BioVision).

Метаболические измерения

Уровни АТФ измеряли с использованием реагента CellTiter-Glo. Секретируемую молочную кислоту измеряли непосредственно в среде для культивирования клеток с помощью измерителя лактата ARKRAY Lactate Pro 2 с соответствующими тест-полосками.

Нокаут Eno2 и сверхэкспрессия

Eno2 был делетирован с использованием плазмид CRISPR с двойной никазой, направленных против человеческого Eno2 из Санта-Крус (h и h3). Клетки-реципиенты трансфицировали с использованием липофектамина 3000, а трансфектанты отбирали с помощью пуромицина. Клетки OPM2 инфицировали контрольными лентивирусами (abmGood, каталожный номер LVP587) и лентивирусами, несущими немеченую ORF Eno2 человека (abmGood, каталожный номер LVP148539), для сверхэкспрессии Eno2. Экспрессия Eno2 была вариабельной, и для выявления клеток с высокой экспрессией Eno2 использовали клонирование и скрининг отдельных клеток.

Метформин в ядре прилежащего ядра снижает индуцированный сигналом поиск кокаина у самцов и самок крыс

Введение

Несмотря на десятилетия исследований, расстройство, связанное с употреблением кокаина, остается серьезной проблемой общественного здравоохранения в Соединенных Штатах. В Национальном обзоре употребления наркотиков и здоровья за 2018 год 5,5 миллиона человек в возрасте 12 лет и старше (примерно 2% населения) сообщили об употреблении кокаина в прошлом месяце. ¹ Еще больше подчеркивая актуальность проблемы, растет частота смертей от передозировки кокаином. ² К сожалению, до сих пор не существует одобренных FDA фармакотерапевтических средств для лечения расстройств, связанных с употреблением кокаина. Даже при воздержании частота рецидивов этого хронического заболевания остается высокой. ³ Поведенческие различия мужчин и женщин в употреблении психоактивных веществ зависят от биологических воздействий, включая половые гормоны. ⁴ Кроме того, могут быть половые различия в реакции на фармакологические методы лечения расстройств, связанных с употреблением психоактивных веществ. ⁵ Соответственно, существует четко определенная потребность в выявлении и описании новых фармакотерапевтических средств для предотвращения рецидивов употребления кокаина с использованием доклинических субъектов мужского и женского пола.

Протеинкиназа, активируемая аденозинмонофосфатом (AMPK), представляет собой гетеротримерную серин/треониновую протеинкиназу, которая действует как датчик клеточной энергии, контролирующий соотношение АМФ и АТФ в клетке. ⁶ Агонисты AMPK используются для лечения состояний, включая диабет II типа, рак и сердечно-сосудистые заболевания. ⁷ В новой литературе предполагается, что AMPK может регулировать поведение, связанное с употреблением наркотиков, включая локомоторную сенсибилизацию к алкоголю и кокаину. ⁸ Одно недавнее исследование продемонстрировало, что микроинъекция аналога AMP 5-аминоимидазол-4-карбоксамид рибонуклеозида (AICAR) в ядро ​​прилежащего ядра (NAcore) уменьшает вызванное сигналом восстановление в крысиной модели поиска кокаина. ⁹ Однако трансляционная полезность AICAR ограничена, поскольку он имеет плохие фармакокинетические свойства и не обладает пероральной биодоступностью. ^7,10 Более того, высокие дозы AICAR связаны с многочисленными вредными побочными эффектами, включая брадикардию и другие нарушения обмена веществ. ⁷ Напротив, метформин (диметилбигуанид), наиболее часто назначаемый FDA препарат для лечения диабета II типа, является безопасным и широко используемым препаратом, который помимо других механизмов действия может активировать AMPK. ¹¹ В доклинических исследованиях было показано, что метформин облегчает тревожное поведение, вызванное отменой никотина, ослабляет развитие толерантности к морфиновым анальгетикам и уменьшает симптомы отмены опиоидов. ^12,13 Ни в одном исследовании не изучалась эффективность метформина, возможно, более трансляционно релевантного активатора AMPK по сравнению с AICAR, для уменьшения восстановления поведения, связанного с поиском кокаина. Важно отметить, что метформин легко проникает через гематоэнцефалический барьер и имеет абсолютную биодоступность при пероральном приеме у человека на уровне 40-60%. ¹⁴

В настоящем исследовании оценивалась способность внутричерепных микроинъекций метформина в NAcore ослаблять восстановление поведения, связанного с поиском наркотиков, вызванного реакцией на условные кокаиновые условные сигналы у самцов и самок крыс. И ядро, и оболочка прилежащего ядра (NAc) вовлечены в реакцию на поиск наркотиков, ¹⁵ , но NAcore и оболочка NAc играют диссоциирующую роль в ответ на условные подкрепления в паре с кокаином. ¹⁶ Фосфорилированная AMPK снижается в NAcore после прекращения самостоятельного приема кокаина, в то время как уровни в оболочке NAc остаются неизменными. ⁹ Такая регионально избирательная модуляция системы AMPK кокаином обеспечивает дополнительное обоснование нашего нынешнего внимания к NAcore. ^9,17 Мы пришли к выводу, что влияние внутричерепного метформина на поиск кокаина не зависит от влияния на двигательную активность. Мы также определили, были ли эффекты метформина в NAcore избирательными для индуцированного сигналом поиска кокаина или обобщены для индуцированного сигналом поиска сахарозы, естественного вознаграждения. Эти данные закладывают основу для дальнейшего изучения метформина в качестве новой фармакотерапии рецидивов употребления кокаина.

Материалы и методы

Испытуемые

137 самцов и самок крыс Sprague Dawley (225-275 г при поступлении) были приобретены у Envigo, и 109 субъектов были включены в окончательный набор данных. Крыс содержали попарно в индивидуально вентилируемых клетках в помещении с регулируемой температурой (70-71°F) и влажностью (38-46%). Стандартный корм и вода были доступны вволю , если не указано иное. Животных содержали при цикле свет-темнота 14/10, при этом все эксперименты проводили во время световой фазы.Процедуры были предварительно одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Университета Миннесоты и соответствуют рекомендациям Национального института здравоохранения (NIH).

Хирургия

Крыс (весом 250-300 г на момент операции) анестезировали испаряемым изофлураном (2-5%). Крысам имплантировали внутривенные яремные катетеры и двустороннюю направляющую канюлю (Plastics One) к NAcore: ±1,8 мм ML, +1,5 мм AP, -5,5 мм DV и ±1,6 мм ML, +2,3 мм AP, -5,5 мм DV при 0 ° угол. Послеоперационную анальгезию проводили в течение 72 часов после операции (карпрофен, 5 мг/кг внутривенно).п.). Проходимость катетера была подтверждена до начала самостоятельного введения кокаина путем внутривенного введения 0,05-0,1 мл ксилазина (5 мг/мл).

Наркотики

Гидрохлорид кокаина был приобретен в аптеке Бойнтон Миннесотского университета. Раствор кокаина (4 мг/мл) готовили в стерильном 0,9% физиологическом растворе и доставляли в объеме 0,05 мл/инфузию. В среднем самцы и самки крыс самостоятельно вводили кокаин в дозах 0,59 и 0,74 мг/кг/инфузию, соответственно, в течение курса самостоятельного введения, исходя из различий в массе тела (рис. S1).Гидрохлорид метформина (ApexBio, Sigma-Aldrich), 1,1-диметилбигуанид) готовили в концентрации 250 мкг/мкл в стерильной воде, и 125 мкг/полушарие микроинъецировали в NAcore. Доза метформина была основана на опубликованных исследованиях интрацеребровентрикулярного (ICV) введения крысам с использованием доз от 3 мкг до 1 мг. ^18–20 Физиологический раствор или метформин микроинъецировали в NAcore с образцами головного мозга, собранными через 1 час у подгруппы животных, использованных для вестерн-блоттинга. Как и ожидалось, метформин повышал уровни фосфо-AMPK и демонстрировал тенденцию к снижению фосфо-ERK, что соответствовало активации AMPK (рис. S2).

Самостоятельный прием кокаина, угасание и восстановление по сигналу

Обучение было завершено в стандартных оперативных ящиках (MedAssociates). Крысы прошли один 2-часовой сеанс оперантного обучения пищевым гранулам в отсутствие сигналов перед началом ежедневных 2-часовых сеансов самостоятельного введения кокаина. Ограничение в еде в ночное время предшествовало диетической тренировке. Крысы сами принимали кокаин по схеме подкрепления с фиксированным соотношением 1 (FR1). Каждое вливание кокаина сочеталось с дискретным двойным световым и звуковым стимулом.Неактивные нажатия рычагов были зафиксированы, но не имели последствий. Крысы должны были достичь критерия 10 дней самостоятельного введения ≥10 вливаний кокаина. Во время угасания (минимум 7 дней) нажатие на ранее активный рычаг больше не приводило к выдаче кокаина или сигналов. Вымирание потребовало снижения активного нажатия рычага до ≤30% от среднего значения самостоятельного управления. Во время восстановления, вызванного сигналом, активное нажатие рычага приводило к предъявлению сигналов, связанных с наркотиками, но не доставляло лекарство в течение 2-часового сеанса.

Самостоятельное введение сахарозы, угасание и вызванное сигналом восстановление

Протокол самостоятельного введения сахарозы был аналогичен протоколу, используемому для кокаина, описанному выше. Вместо вливаний кокаина гранулы сахарозы (45 мг, BioServ) были соединены с дискретным световым и звуковым сигналом. Крыс обучали самостоятельно вводить гранулы сахарозы в течение не менее 5 дней по графику подкрепления FR1, а затем продлили до 5 дней по графику подкрепления FR3 с критерием усвоения ≥10 гранул сахарозы, полученных за сеанс.Условия угасания и восстановления, вызванные сигналом, были идентичны условиям самостоятельного приема кокаина.

Двигательная активность

Спонтанная двигательная активность регистрировалась с помощью веб-камеры USB, помещенной над тестовой камерой (квадратная акриловая коробка 60 см x 60 см) на 45 минут. Видео были проанализированы на предмет общего пройденного расстояния с помощью программного обеспечения для анализа видео ezTrack. Животным делали микроинъекции физиологического раствора или метформина в NAcore непосредственно перед или за 1 час до помещения в тестовую камеру.

Микроинъекции и гистология

Метформин или 0,9% стерильный физиологический раствор вводили в NAcore на 2 мм ниже основания направляющей канюли. Микроинъекции (0,5 мкл/сторона) происходили в течение 2 минут, после чего следовала 1 минута времени диффузии. Сеанс восстановления начинался сразу после микроинъекции. Для внутрисубъектных сравнений экспериментального лечения восстановления, вызванного сигналом (физиологический раствор против метформина), крысы подвергались двум сеансам восстановления, разделенным ≥2 сеансами угасания. Порядок был случайным между субъектами. Эквивалентная стратегия использовалась для оценки влияния метформина на поддержание самостоятельного приема кокаина (поддерживающий день 7 и дни 9-10) и угашение ответа (угасание на 2-й день и день 4-5). Для гистологии животных глубоко анестезировали пентобарбиталом натрия (80-100 мг/кг) и транскардиально перфузировали 1x фосфатно-солевым буфером (PBS, в MilliQ h3O), а затем 1x формалином в PBS. Корональные срезы NAcore (100 мкм) помещали на предметные стекла и окрашивали крезиловым фиолетовым для подтверждения размещения канюли.Слайды визуализировали с помощью стереомикроскопа Olympus (MVX10) и визуально подтверждали расположение канюль. Гистологическая проверка размещения микроинъекций для всех экспериментов показана в дополнительных материалах (рис. S5, S6). Крысы с нецелевой канюлей были исключены из анализа. Успешные двусторонние и односторонние (из-за окклюзии канюли) микроинъекции были включены в окончательный набор данных после того, как дополнительный анализ выявил эквивалентные тенденции в эффектах восстановления в разделенных данных (рис. S6).

Статистический анализ

GraphPad Prism версии 9.0.1 (Сан-Диего, Калифорния, США) использовался для статистического анализа. Данные были проанализированы с использованием 1- или 2-факторного дисперсионного анализа или с использованием моделей смешанных эффектов, соответствующих каждому эксперименту (дополнительные сведения см. в дополнительных материалах). Тесты Тьюки или Сидака post-hoc применялись для множественных сравнений, и p <0,05 считались статистически значимыми. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM).В основном тексте данные для каждого пола представлены отдельно, но прямые сравнения между самцами и самками можно найти на дополнительных рисунках (рисунки S1, S3, S4 и S5).

Результаты

Эквивалентное самостоятельное введение кокаина самцам и самкам крыс Sprague Dawley

Хронология эксперимента представлена ​​на рисунке 1А. Самцов и самок крыс обучали самостоятельно принимать кокаин, а затем гасили на 7-14 дней (рис. 1В, С). Крысы самостоятельно вводили одинаковое количество инфузий в день в течение 10 сеансов (рис. 1D), и нажатие рычага не различалось между полами (рис. S3A, B).При сравнении индекса дискриминации мужчин и женщин с помощью анализа смешанных эффектов был выявлен основной эффект сеанса [F(5,948,99,30)=4,363, p=0,0006], основной эффект пола [F(1,20)=5,621]. , p = 0,0279] и значительный сеанс полового взаимодействия [F (23,384) = 3,120, p <0,0001] (рис. 1E). В то время как самцы крыс демонстрировали снижение различения во время фазы угасания, самки крыс сохраняли предпочтительную реакцию на ранее усиленный рычаг. Эстральный цикл контролировали с помощью вагинальной цитологии на протяжении всего эксперимента.Не было никакого влияния стадии эстрального цикла на активное нажатие рычага (рис. 1F) или инфузии кокаина (рис. 1G) во время фазы самостоятельного введения. Анализ угашения активного нажатия на рычаг в 1-й день в сочетании с проэструсом и эструсом (фолликулярная фаза) по сравнению с метэструсом и диэструсом (лютеиновая фаза) с учетом ограниченного числа наблюдений. Самки крыс в проэструсе/течке показали более высокие уровни угашения в первый день активного нажатия на рычаг по сравнению с метеструсом/диэструсом [рис. 1H; Т(10)=2,663, р=0.0236], но половых различий не наблюдалось.

Рисунок 1.

Самостоятельное введение кокаина самцам и самкам крыс Sprague Dawley. A. Экспериментальный график самостоятельного приема кокаина, исчезновения и восстановления. B. Активное и неактивное нажатие на рычаг у мужчин. C. Активное и неактивное нажатие на рычаг у женщин. D. Ежедневные инфузии кокаина в течение 10 дней самостоятельного введения по критериям не отличались между самцами и самками крыс. E. Индекс дискриминации оставался выше у самок крыс по сравнению с самцами в фазе угасания, *p<0.05, n=10-12 каждого пола. F. Активное нажатие на рычаг самостоятельного введения не зависит от стадии эстрального цикла. G. Инфузии кокаина, доставляемые во время самостоятельного введения, не различались в зависимости от стадии эстрального цикла. В F и G каждая точка данных представляет собой среднее значение крысы для каждой стадии цикла. H. Активное нажатие на рычаг в день угасания 1 было выше в фолликулярную фазу (P/E = проэструс/эструс) по сравнению с лютеиновой фазой (M/D = метэструс/диэструс), *p<0,05, n=3-4 в фаза. Все данные выражены как среднее ± SEM.

Метформин уменьшает индуцированное сигналом восстановление поиска кокаина

Индуцированное сигналом восстановление поиска кокаина было протестировано с использованием рандомизированного перекрестного исследования внутри субъектов, сравнивающего микроинъекцию физиологического раствора и метформина в NAcore. Был основной эффект рычага [F(1,18)=53,51, p<0,0001], основной эффект условия [F(1,494,26,89)=6,930, p=0,0013] и значимое взаимодействие [F(2 ,36) = 8,018, p = 0,0013] для индуцированного сигналом восстановления поиска кокаина у мужчин по оценке двустороннего дисперсионного анализа (рис. 2А).Тестирование множественных сравнений Тьюки показало значительное увеличение активного нажатия на рычаг во время восстановления по сравнению с угасанием после микроинъекции физиологического раствора (p = 0,0075). После микроинъекции метформина восстановление активного нажатия на рычаг существенно не отличалось ни от уровней угасания (p = 0,1583), ни от предварительной обработки физиологическим раствором (p = 0,2655) (рис. 2А). Мы интерпретировали это как отсутствие восстановления в состоянии метформина. Кумулятивные реакции рычага оценивались во время испытаний по восстановлению, вызванных сигналом, чтобы определить, были ли эффекты метформина, зависящие от времени.У самцов крыс анализ активного нажатия на рычаг показал основной эффект лечения [F(1,18)=5,021, p=0,0379], основной эффект времени [F(1,498,26,96)=22,46, p<0,0001]. , и значимое взаимодействие лечения и времени [F(23,414)=5,006, p<0,0001] (рис. 2C). Влияние метформина на поиск наркотиков проявилось после первого часа восстановления. При отдельном исследовании активное нажатие рычага во время восстановления не имело существенных различий при лечении физиологическим раствором и метформином в течение первого часа (p=.1518), но этот эффект проявился уже на втором часу (р=0,0207). Лечение метформином существенно не изменило неактивное нажатие рычага во время восстановления (рис. 2Е).

Рисунок 2.

Эффекты метформина на вызванное сигналом восстановление поиска кокаина. A. Количество активных и неактивных нажатий на рычаг во время угасания (EXT) или индуцированных кокаиновыми сигналами во время восстановления у самцов крыс, n = 10. **p<0,01 при сравнении физиологического раствора (SAL) с угасанием (MET = метформин). B. Количество активных и неактивных нажатий на рычаг во время угасания или вызванных кокаиновыми сигналами во время восстановления у самок крыс, n = 12.****p<0,0001 при сравнении физиологического раствора с угасанием; **p<0,01 при сравнении метформина с экстинкцией или физиологическим раствором. C. Кумулятивное активное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время восстановления, вызванного сигналом, у самцов крыс. *p<0,05 при сравнении физиологического раствора с метформином. D. Кумулятивное активное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время вызванного сигналом восстановления у самок крыс. *p<0,01 при сравнении физиологического раствора с метформином. E. Кумулятивное неактивное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время вызванного сигналом восстановления у самцов крыс. F. Кумулятивное неактивное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время восстановления, вызванного сигналом, у самок крыс.Все данные выражены как среднее ± SEM.

Рисунок 3.

Двигательная активность. А. Двигательная активность самцов крыс сразу после микроинъекции физиологического раствора или метформина, n=5 на лечение. Б. Двигательная активность самок крыс сразу после микроинъекции физиологического раствора или метформина, n=5-7 на курс. C. Двигательная активность у самцов крыс после 1-часовой предварительной обработки после микроинъекции физиологического раствора или метформина, n=7 на обработку. Все данные выражены как среднее ± SEM.

У самок крыс наблюдался основной эффект рычага [F(1,22)=99.36, p<0,0001], основной эффект состояния [F(1,718,34,37)=42,39, p<0,0001] и значимое взаимодействие [F(2,40)=36,07, p<0,0001] для восстановления, вызванного сигналом поиска кокаина (рис. 2B). Тестирование множественных сравнений Тьюки показало значительное увеличение активного нажатия на рычаг во время восстановления по сравнению с угасанием после микроинъекции как физиологического раствора (p <0,0001), так и метформина (p = 0,0050), что указывает на восстановление, вызванное сигналом, в обоих условиях (рис. 2B). Нажатие на рычаг также было значительно ниже после предварительной обработки метформином по сравнению с физиологическим раствором (p = 0.0007) (Фигура 2В). Когда у самок крыс был проведен временной интервальный анализ, был выявлен основной эффект лечения [F(1,20)=8,751, p=0,0078], основной эффект времени [F(2,512,50,24)=73,16, p< 0,0001] и значимое взаимодействие лечения и времени [F(23,460)=14,55, p<0,0001] (рис. 2D). Активное нажатие рычага во время восстановления было значительно выше при лечении физиологическим раствором по сравнению с лечением метформином как в первый час (p = 0,0171), так и во второй час (p = 0,0070). Лечение метформином существенно не изменило неактивное нажатие рычага во время восстановления (рис. 2F).Эти результаты показывают, что метформин в составе NAcore может уменьшить индуцированное сигналом восстановление поиска кокаина у самцов и самок крыс (рис. S4).

Метформин не влияет на поддержание или прекращение самостоятельного приема кокаина или на спонтанную двигательную активность

Микроинъекция метформина в NAcore не повлияла на продолжающийся самостоятельный прием кокаина, что было оценено в отдельной подгруппе самок крыс. Не было никакого основного эффекта лечения метформином на неактивные жимы рычагами, активные жимы рычагами или инфузии во время поддерживающей терапии (рис. S7).Точно так же предварительная обработка метформином не влияла на нажатие рычага раннего угасания (рис. S7). В качестве контрольного эксперимента после микроинъекции физиологического раствора или метформина отслеживали двигательную активность. Внутричерепное введение метформина не влияло на спонтанную двигательную активность у самцов крыс [основной эффект времени [F(1,470, 11,76) = 6,258, p = 0,0197]] или у самок крыс [основной эффект времени F(2,029, 20,29) = 4,676 p = 0,021]. ] тестировали сразу после внутричерепной инфузии, и не наблюдалось половых различий в эффектах метформина на двигательную активность (рис. S5C, D).В солевых условиях самцы и самки крыс демонстрировали одинаковые уровни локомоторной активности и эквивалентное локомоторное привыкание (рис. S5A, B). Учитывая, что влияние метформина на вызванное сигналом восстановление поиска кокаина было очевидным только в течение второго часа восстановления, у отдельных субъектов мужского пола мы исследовали влияние внутричерепного метформина на локомоцию, учитывая 1-часовое время инкубации в домашней клетке. В этом эксперименте метформин также не влиял на двигательную активность [основной эффект времени F(1.645,6,578)=7,86, р=0,0205]; хотя локомоция была заметно низкой в ​​экспериментальной (метформин) и контрольной (физиологический раствор) группах на протяжении всего 45-минутного сеанса.

Самостоятельное введение сахарозы самцам и самкам крыс Sprague Dawley

Хронология эксперимента представлена ​​на рис. 4А и отражает эксперимент с кокаином. Самцов и самок крыс обучали самостоятельно вводить сахарозу по графику FR1 в течение первых 5 дней с увеличением потребности до FR3 в течение последних 5 дней (рис. 4B, 4C).Активное и неактивное нажатие рычага для самостоятельного введения сахарозы различалось между полами: самки крыс демонстрировали более высокое активное нажатие рычага [F (1,14) = 5,786, p = 0,0305] и более низкое неактивное нажатие рычага [F (1,14) = 16,64, p = 0,0011] по сравнению с самцами крыс (рис. S3C, D). При сравнении индекса различения между самцами и самками крыс было выявлено основное влияние сеанса [F(4,352,52,64)=4,105, p=0,0046], основное влияние пола [F(1,14)=20,79, p=0,0004]. ] и значительное взаимодействие секса и сеанса [F(21,254)=2.340, р = 0,0011] (рис. 4Е). У самок крыс наблюдалась тенденция поддерживать более высокий уровень различения рычагов во время самостоятельного введения и вымирания. При самостоятельном введении наблюдалось основное влияние времени [F(2,510, 34,03)=4,377, p=0,0143] и основное влияние пола [F(1,14)=13,36, p=0,0026] на введенные гранулы сахарозы. в день (рис. 4D). Самки крыс зарабатывали больше гранул сахарозы, чем крысы-самцы (31,20 ± 5,6 против 57,51 ± 4,9). Как и в случае с поиском кокаина, стадия эстрального цикла не влияла на активное нажатие рычага для получения сахарозы (рис. 4F) или полученных гранул (рис. 4G) во время фазы самостоятельного введения.Активное нажатие на рычаг в день угасания не различалось в зависимости от эстрального цикла, но было выше у самок крыс по сравнению с крысами-самцами (p = 0,0043), что согласуется с общим более высоким активным нажатием на рычаг во время самостоятельного введения сахарозы (рис. 4H).

Рисунок 4. Самостоятельное введение

сахарозы самцам и самкам крыс Sprague Dawley. A. Экспериментальный график самостоятельного введения сахарозы, исчезновения и восстановления. B. Активное и неактивное нажатие на рычаг у мужчин. C. Активное и неактивное нажатие на рычаг у самок (среднее значение ± стандартная ошибка среднего).D. Ежедневное количество гранул сахарозы, полученных в течение 10 дней самостоятельного введения, было выше у самок крыс по сравнению с самцами, **p<0,05, n=7-10. E. Индекс различения был выше у самок крыс по сравнению с самцами, ***p<0,001, n=7-10 каждого пола. F. Активное нажатие на рычаг самостоятельного введения не зависит от стадии эстрального цикла. G. Гранулы сахарозы, доставленные во время самостоятельного введения, не различались в зависимости от стадии эстрального цикла. В F и G каждая точка данных представляет собой среднее значение крысы для каждой стадии цикла. H. Активное нажатие на рычаг в 1-й день угашения не различалось между группами, n=5-7 на фазу.P/E = проэструс/эструс и M/D = метэструс/диэструс. Все данные выражены как среднее ± SEM.

Влияние метформина на вызванное сигналом восстановление поиска сахарозы

Индуцированное сигналом восстановление поиска сахарозы было проведено для изучения специфичности эффекта метформина в отношении кокаинового вознаграждения. Был основной эффект рычага [F(1,16)=50,54, p<0,0001], основной эффект условия [F(1,573,18,87)=6,941, p=0,0084] и значимое взаимодействие [F(2 ,24) = 7,042, p = 0,0039] для индуцированного сигналом восстановления поиска сахарозы у самцов крыс (фиг. 5А).Множественные сравнительные тесты Тьюки показали значительное вызванное сигналом восстановление активного нажатия на рычаг по сравнению с угасанием после микроинъекций физиологического раствора (p = 0,0093) и метформина (p = 0,0382) без различий в поиске сахарозы между условиями предварительной обработки физиологическим раствором и метформином (p = 0,9998). ). Не было никакой разницы в кумулятивных активных (рис. 5C, [основной эффект времени F(2,080, 27,05) = 25,67, p <0,0001]] или неактивных реакциях рычага (рис. 5E [основной эффект времени F(2,690, 34,97) = 15,67, р<0.0001)]) во время восстановления между обработкой физиологическим раствором и метформином у самцов крыс. У самок крыс наблюдался основной эффект рычага [F(1,12)=16,78, p=0,0015], основной эффект условия [F(1,248,14,97)=8,193, p=0,0087] и значимое взаимодействие [F (2,24) = 8,113, p = 0,002] для индуцированного сигналом восстановления поиска сахарозы (рис. 5B). Тестирование множественных сравнений Тьюки показало значительное увеличение восстановления активного нажатия на рычаг по сравнению с угасанием только после микроинъекции физиологического раствора (p = 0. 0299). Когда анализ бинов времени был проведен у самок крыс, был выявлен основной эффект лечения [F(1,10)=7,989, p=0,018], основной эффект времени [F(1,57,15,70)=10,23, p= 0,0024] и значимое взаимодействие [F(23,30)=4,016, p<0,0001] (рис. 5D). Лечение метформином существенно не изменило неактивное нажатие рычага во время восстановления (рис. 5F). Эти результаты показывают, что метформин в NAcore уменьшает индуцированное сигналом восстановление поиска сахарозы у самок, но не у самцов крыс.

Рисунок 5.

Эффекты метформина на вызванное сигналом восстановление поиска сахарозы. A. Количество активных и неактивных нажатий на рычаг во время угашения или индуцированных сигналами, связанными с сахарозой, во время восстановления у самцов крыс, n = 10. *p<0,05 при сравнении угасания (EXT) с физиологическим раствором (SAL) и метформином (MET). B. Количество активных и неактивных нажатий на рычаг во время угашения или индуцированных сигналами, связанными с сахарозой, во время восстановления у самок крыс, n = 7. *p<0,05 при сравнении физиологического раствора с угасанием. C. Кумулятивное активное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время восстановления, вызванного сигналом, у самцов крыс.D. Кумулятивное активное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время восстановления, вызванного сигналом, у самок крыс. *p<0,05 при сравнении физиологического раствора с метформином. E. Кумулятивное неактивное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время восстановления, вызванного сигналом, у самцов крыс. F. Кумулятивное неактивное нажатие рычага в 5-минутных ячейках во время восстановления, вызванного сигналом, у самок крыс. Все данные выражены как среднее ± SEM.

Обсуждение

Здесь мы показываем, что метформин, введенный непосредственно микроинъекцией в NAcore, снижает индуцированное сигналом восстановление поиска кокаина у самцов и самок крыс.Влияние внутричерепного метформина на поиск кокаина не зависело от влияния на двигательную активность. Отклоняясь от ожиданий, мы обнаружили эффект лечения, зависящий от пола, при котором метформин избирательно снижал индуцированный сигналом поиск кокаина у самцов крыс, но в целом также уменьшал индуцированный сигналом поиск сахарозы у самок крыс. Наряду с этим эффектом «лечение x пол» мы сообщаем о других половых различиях в поведении при самостоятельном приеме кокаина и сахарозы, согласующихся с половыми различиями в системе вознаграждения.

Метформин и аналогичные бигуаниды десятилетиями применялись клинически из-за их эффекта снижения уровня глюкозы в крови, но в последнее время они вызвали интерес для многих других целей, включая лечение рака, сердечно-сосудистых заболеваний, ожирения, нейродегенерации и нейрокогнитивных расстройств. ^7,21 Несмотря на длительное применение, механизм действия метформина до конца не выяснен. В биологически значимых дозах метформин способствует образованию гетеротримерного комплекса AMPK, облегчая фосфорилирование альфа-субъединицы и стимулируя активность киназы более чем в 100 раз. ²² Влияние метформина на центральную нервную систему недостаточно изучено по сравнению с его периферическим действием. Точно так же роль AMPK и других клеточных датчиков энергии в важных нейронных процессах, таких как обучение и память, с явной связью с поведением, связанным с вознаграждением, только недавно начали осознавать. ²³ Таким образом, активация AMPK предлагает многообещающий механизм воздействия метформина на обработку вознаграждения.

Одним из ограничений нашего текущего исследования является то, что мы не подтвердили зависимость действия метформина от AMPK в нашей модели.Гао и его коллеги продемонстрировали снижение pAMPK и увеличение белка pERK1/2 в NAcore после самостоятельного приема кокаина и парадигмы угасания, аналогичной нашей. ⁹ Вливание AICAR в сердцевину увеличивает pAMPK и снижает pERK1/2. ⁹ Мы наблюдали аналогичную картину при внутричерепной доставке метформина (рис. S2). Тем не менее, мы, конечно, не можем исключить возможность того, что эффекты метформина на вызванное сигналом восстановление, наблюдаемое здесь, не зависят от активации AMPK и вместо этого зависят от одного из других предполагаемых механизмов ниже по течению от метформина, которые мы обсуждаем более подробно ниже.Будущие исследования потребуются для изучения роли AMPK и влияния метформина на индуцированную кокаином нейроадаптацию в NAcore, что может объяснить наши результаты.

Наше основное открытие заключается в том, что метформин снижает индуцированный сигналом поиск кокаина. Поведение, подобное рецидиву, регулируется дофаминергическими и глутаматергическими механизмами, ^{, 24,} , хотя прямых доказательств роли дофаминовой передачи в NAcore в обусловленном реакцией восстановлении, на удивление, мало. Одно исследование продемонстрировало, что антагонист D1 и полный агонист дозозависимо уменьшают вызванное сигналом восстановление кокаина, в то время как в низких дозах агонист также независимо способствует восстановлению ответа в отсутствие сигналов. ²⁵ Пассивное предъявление кокаинового стимула (CS) вызывает высвобождение дофамина в NAc. ²⁶ Напротив, обусловленное реакцией представление CS после самостоятельного введения кокаина, подобное экспериментальным условиям здесь, не увеличивает высвобождение NAc дофамина. ^26,27 Оба состояния могут способствовать поиску кокаина. Эти данные могут указывать на некоторый уровень диссоциации между NAc дофамином и различными формами восстановления, связанными с сигналом. Системный метформин увеличивает дофамин в полосатом теле и защищает от истощения дофамина, вызванного нейротоксинами ^28,29 , но см. ³⁰ .И наоборот, селективная активация AMPK в препаратах срезов среднего мозга потенцирует токи K-ATP в предполагаемых дофаминовых нейронах в вентральной области покрышки и черной субстанции, действие, которое, как ожидается, ингибирует возбудимость нейронов и высвобождение дофамина. ³¹ Если модулирование дофамина связано с эффектами наших микроинъекций метформина, последний механизм (то есть снижение высвобождения дофамина) может быть связан с действием метформина на дофаминовые терминали.

Считается, что используемая здесь модель восстановления рецидива, вызванная сигналом, основана на передаче глутамата.Самостоятельный прием и угасание кокаина нарушает гомеостаз глутамата в NAcore, включая снижение базального уровня глутамата, снижение поглощения глутамата глиальным переносчиком глутамата (GLT-1/EAAT2) и снижение пресинаптической передачи сигналов mGluR2/3. ^32,33 Конечным эффектом является повышенное распространение синаптического глутамата в NAcore во время восстановления, вызванного сигналом. ³⁴ Метформин может корректировать некоторые из этих нарушений глутаматергической передачи. Например, повторный прием метформина снижал повышенную передачу глутамата в пирамидных нейронах СА1 в мышиной модели депрессии, вызванной ЛПС. ³⁵ В генетической мышиной модели синдрома ломкой Х-хромосомы длительное лечение метформином улучшило поведенческие нарушения и скорректировало аберрантную морфологию дендритов и возбуждающую синаптическую активность в гиппокампе. ³⁶ Точно так же метформин может восстанавливать гомеостаз глутамата в NAcore после употребления кокаина, что уменьшит вызванное сигналом восстановление за счет ограничения избытка глутамата. В качестве альтернативы, метформин может уменьшить потребность в кокаине за счет снижения окислительного стресса ^37,38 хотя см. ³⁹ .Кокаин способствует окислительному стрессу, в том числе в вентральном стриатуме, а лечение антиоксидантами может уменьшить вызванное сигналом восстановление поиска кокаина. ³³ Потребуются дополнительные механистические исследования, чтобы понять, какой из этих механизмов (например, дофаминергический, глутаматергический, антиоксидантный или другой) вовлечен в эффекты метформина, регулирующие восстановление кокаина.

В наших экспериментах мы наблюдали несколько интересных половых различий в поведении. У людей женщины, как правило, употребляют кокаин чаще, чем мужчины, и быстрее прогрессируют от начала употребления кокаина до начала лечения. ^1,4 Мужчинам труднее поддерживать воздержание после лечения. ⁴⁰ Нейробиологические механизмы, такие как половая диморфная организация мозга или лекарственная структурная адаптация, способствуют этим различиям. ⁴ В наших экспериментах с самостоятельным введением кокаина количество заработанных вливаний не различалось в зависимости от пола, но самки крыс потребляли большее количество кокаина, учитывая их более высокую стандартную дозу с поправкой на вес. При самостоятельном приеме одной и той же стандартной дозы женщины, соответственно, вводят больше доз кокаина. ⁴¹ Мы также наблюдали половые различия в индуцированном сигналом восстановлении поиска кокаина у самок крыс, демонстрирующих более высокие уровни активного нажатия на рычаг по сравнению с самцами после предварительной обработки физиологическим раствором (рис. S4A), хотя общая картина реакции в течение 2-часового сеанса была сходны между полами, что указывает на одинаковое исчезновение внутри сеанса (рис. S4C). В соответствии с экспериментами по самостоятельному введению кокаина и сахарозы, самки крыс сохраняли более высокую дискриминацию рычага во время угасания, что может отражать разницу в мотивации, возникающую при отсутствии подкрепления, независимого от первоначального подкрепления.

Доклиническая литература предполагает, что женщины могут быть более чувствительны к естественному вознаграждению, чем мужчины. Самки крыс продемонстрировали более высокое предпочтение камер в сочетании с вкусной пищей (с высоким содержанием жира, высоким содержанием сахара) ⁴² и более высокий спрос на самостоятельное введение вкусной пищи по нулевой цене по сравнению с крысами-самцами. ⁴³ В соответствии с этой литературой, наши самки крыс самостоятельно принимали больше сахарозы и демонстрировали более активное нажатие на рычаг во время самостоятельного введения сахарозы (рис. S3C, D).Хотя наше самостоятельное введение сахарозы и восстановление стимула было разработано как контрольное исследование, чтобы определить, снижает ли введение метформина выборочно вызванное стимулом восстановление поиска кокаина, в конечном итоге этот эксперимент получил некоторые из наиболее интересных результатов. Мы обнаружили эффект лечения, зависящий от пола, при котором метформин уменьшал индуцированный сигналом поиск сахарозы у самок, но не у самцов крыс. Это может указывать на повышенную чувствительность к влиянию метформина на стремление к вознаграждению у женщин.Будет важно определить, можно ли откалибровать дозу метформина у женщин, чтобы снизить риск развития ангедонии. В качестве альтернативы, эти результаты могут больше говорить о половых различиях в метаболизме сахарозы и/или обработке вознаграждения между самцами и самками крыс, связанных с различной поведенческой чувствительностью к вкусной пище, описанной выше. ^42,43 Не совсем ясно, может ли и как может быть задействована активация AMPK. Одно исследование показало, что самки крыс были более чувствительны, чем самцы, к пагубным метаболическим эффектам хронического употребления фруктозы, а AMPK избирательно активировалась в печени самок крыс, получавших фруктозу. ^18,44 Хотя наши результаты восстановления кокаина предполагают, что кокаин одинаково регулирует активность AMPK в NAcore у мужчин и женщин ⁹ , самостоятельный прием сахарозы может вызывать различные нейрохимические изменения, которые еще предстоит исследовать. ICV метформин ингибирует прием пищи, но считается, что этот эффект опосредован ингибированием нейропептида Y в гипоталамусе. ¹⁸ Гипоталамус регулирует гомеостатическое питание, в то время как прилежащее ядро ​​модулирует прием вкусной пищи. ^45,46 Таким образом, роль внегипоталамической AMPK как в гомеостатическом, так и в гедоническом механизмах питания требует дальнейшего изучения.

Фармакодинамика метформина не зависит от пола у здоровых людей из контрольной группы, ¹¹ , но есть несколько примеров метформина, вызывающего эффекты, специфичные для пола, при определенных условиях. ^47,48 Например, метформин оказывает более благотворное влияние на метаболизм глюкозы у мужчин с диабетом по сравнению с женщинами. ⁴⁹ Между метформином, AMPK и половыми стероидными гормонами существует механическая связь.Половые различия были обнаружены в экспрессии переносчика органических катионов (OCT2), одного из переносчиков, ответственных за перемещение метформина через клеточную мембрану. ⁵⁰ Более высокая экспрессия мРНК была обнаружена в коре головного мозга и гиппокампе самок по сравнению с самцами мышей, хотя на уровне белка не наблюдалось половых различий. ⁵⁰ Эстроген снижает активность OCT2 у самцов, в то время как тестостерон повышает активность OCT2 как у самцов, так и у самок в почках крыс. ⁵¹ Неизвестно, присутствует ли аналогичная гормональная регуляция OCT2 (или других членов семейства OCT) в головном мозге.Если это присутствует, это может значительно повлиять на эффекты метформина на нейробиологические процессы. Иммунореактивность OCT2 наблюдается на высоких уровнях в крысином NAc и демонстрирует значительное совпадение с окрашиванием везикулярного переносчика ацетилхолина (VAChT) и переносчика дофамина (DAT). ⁵² Функционально OCT2 участвует в клиренсе серотонина и норадреналина в полосатом теле мыши. ⁵³ В совокупности потенциальная двойная роль этого транспортера в регуляции нейротрансмиссии и опосредовании фармакологического ответа на метформин делает этот белок интересной мишенью для будущих исследований.

Мы могли бы предсказать взаимодействие между стадией эстрального цикла и лечением метформином для вызванного сигналом восстановления, учитывая, что 17⊓-эстрадиол (E2) влияет на активацию AMPK. ⁵⁴ Анализ зависимых от эстрального цикла эффектов, связанных с рецидивом пристрастия к кокаину, демонстрирует основной эффект лечения (рис. S4D, [F(1,18)=9,922, p=0,0055]), но не основной эффект стадии эстрального цикла или взаимодействие. Тем не менее, многочисленные сравнения Сидака показывают, что способность метформина снижать вызванное сигналом восстановление поиска кокаина у женщин было обусловлено эффектами, наблюдаемыми во время диэструса/метэструса.В данных выявлено несколько других эффектов, зависящих от стадии эстрального цикла. Мы наблюдали значительно более активное нажатие рычага во время первого кокаинового угашения, когда самки крыс находились в проэструсе/течке, а не в метэструсе/диэструсе (рис. 1H). Фолликулярная фаза (проэструс/эструс) характеризуется повышением уровня эстрогенов и снижением уровня прогестерона. Это примечательно, поскольку было обнаружено, что эстроген играет роль в усилении подкрепляющих эффектов психостимуляторов.55 Напротив, прогестерон, пик которого приходится на лютеиновую фазу, ослабляет положительные подкрепляющие эффекты психостимуляторов. 56 Интересно, что мы не обнаружили каких-либо зависимых от эстрального цикла различий в активном нажатии на рычаг во время первого сеанса угашения после приема сахарозы. У нас также не было достаточно наблюдений, чтобы обнаружить существенные различия во время вызванного сигналом восстановления поиска сахарозы.

Расстройство, связанное с употреблением кокаина, остается без какой-либо доступной фармакотерапии. Эти данные представляют собой первый шаг в процессе исследования метформина на предмет его потенциала в лечении расстройств, связанных с употреблением кокаина.Нас обнадежило наблюдение, что внутричерепное введение метформина снижает индуцированное сигналом восстановление после самостоятельного приема кокаина и его прекращения. В будущих исследованиях будет важно распространить эти данные на другие способы восстановления (контекст, кокаин, вызванный стрессом), потому что, хотя эти модели имеют общие важные механизмы цепи, они не полностью перекрываются.57 Эти различия могут указать точные обстоятельства при что метформин может быть наиболее эффективным в качестве терапевтического варианта.Точно так же здесь мы протестировали только внутричерепное введение метформина, сосредоточив внимание на месте действия в NAcore из-за его хорошо известной роли в восстановлении, вызванном сигналом. Эта стратегия непрактична для человеческого перевода; следовательно, необходимо определить, может ли системное введение метформина остро или хронически изменить поиск кокаина. Внутричерепное введение метформина оказывало зависящее от пола влияние на индуцированный сигналом поиск сахарозы, снижая стремление к вознаграждению у женщин, но не у мужчин.Необходимы дополнительные исследования, чтобы проанализировать влияние на естественное вознаграждение. Учитывая плейотропные эффекты метформина на весь организм и мозг, мы постараемся в конечном итоге выяснить, какой предполагаемый молекулярный механизм объясняет терапевтические преимущества в нашей модели. Кроме того, может существовать потенциал для распространения этой фармакотерапии на другие амфетаминоподобные психостимуляторы, учитывая заметное влияние этих препаратов на энергетический метаболизм мозга.

Влияние метформина на синдром отмены сигарет и воздержание от курения у пациентов с раком легких; Двойное слепое плацебо-контролируемое исследование | Международный журнал по борьбе с раком

3.1. Пациенты и дизайн

Текущее исследование представляло собой двойное слепое плацебо-контролируемое исследование с 6-месячным последующим наблюдением, зарегистрированное в Иранском реестре клинических испытаний (IRCT: IRCT20160218026628N1). Данные собирались с февраля 2018 г. по май 2019 г.

Среди людей с РЛ, которые были направлены в 6 центров по прекращению курения в провинции Тегеран, 60 участников прошли скрининг с помощью выборки, управляемой респондентами (RDS), и получили точку отсечения, равную 3 или более 3 в тесте Фагерстрема. для никотиновой зависимости (FTND).

Критерии включения включали возрастной диапазон от 18 до 65 лет, диагноз злокачественного новообразования легкого на основании Международной классификации болезней (МКБ)-10 (С34), средний показатель курения не менее 5 сигарет в день (ПКД) для не менее 1 года, воздержание от курения на этапе зачисления в течение как минимум семи дней, индекс массы тела (ИМТ) в диапазоне 18–35, отказ от приема каких-либо психиатрических препаратов или проведения психологических вмешательств в течение 3 месяцев, предшествующих исследование и желание сократить или бросить курить и получить информированное согласие.Критерии исключения включали диагноз сахарного диабета или высокого кровяного давления или любые побочные эффекты, такие как судороги или головокружение, заболевания печени и почек, тяжелая инфекция, предрасположенность к лактоацидозу, эпилепсия или любое состояние, которое может снизить судорожный порог.

После получения критериев включения и получения информированного согласия они вступили в процесс исследования. Семь участников были исключены из-за побочных эффектов.Наконец, 27 участников в группе метформина и 26 участников в группе плацебо (контроль списка ожидания (WLC)) были случайным образом распределены посредством блочной рандомизации (BR) (рис. 1).

Рис. 1. Блок-схема прохождения этапов плацебо-контролируемого клинического исследования.

3.2. Размер образца

Объем выборки составил 60 человек. Это исследование было выполнено с учетом предположения Z = 1,96, d = 0,25, a = 0,05, а также мощности теста 1-B = 0,84 и возможного попадания выборки в следующую формулу: (12).

n=z+1-βd2=1,645+0,8420,25=24,7≈25

Принимая во внимание возможность исключения испытуемого, к размеру выборки добавили 10 участников и рассмотрели 60 участников.

3.3. Вмешательство

Метформин был начат в суточной дозе 500 мг (одна таблетка 500 мг) в первую неделю и вводился в суточной дозе 1000 мг (Ария, Иран) в течение 12 недель участникам экспериментальной группы. Препарат и плацебо вводили две медсестры, которые не знали об исследуемых группах.Все участники прошли краткую поведенческую терапию повышения комплаентности (BBCET).

Контрольный демографический список: исследователь использовал этот вопросник для сбора личной информации, такой как возраст, образование, семейное положение, род занятий и продолжительность употребления никотина (13).

Структурированное клиническое интервью для DSM-4 (SCID-4): это клиническое интервью, которое используется для диагностики дисфункций оси 1 на основе DSM-IV (14, 15).

Опросник истории курения: Этот опросник использовался для оценки количества лет курения и среднего ежедневного курения в течение последней недели.

Шкала отказа от сигарет (CWS-21): этот инструмент содержит 21 пункт и оценивает синдром отмены по 6 компонентам: депрессия-тревога, тяга, раздражительность-энтузиазм, повышенный аппетит-вес, бессонница и трудности с концентрацией внимания.Это многомерный валидный тест (альфа Кронбаха = 83-96) синдрома отмены сигарет, который чувствителен к изменениям с течением времени и является предиктором рецидива курения (16).

Оценка котинина в моче и уровень выдыхаемого монооксида углерода (eCO): для обеспечения воздержания от никотина использовались оценки котинина в моче и уровни eCO. Детектор Micro CO также использовали для оценки концентрации альвеолярного eCO в частях на миллион (ppm).Уровни котинина в моче анализировали с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС). ГХ-МС — это аналитический метод, сочетающий в себе функции газовой хроматографии и масс-спектрометрии для идентификации различных веществ в исследуемом образце.

Антропометрические измерения (измерения массы тела и телесного жира): Что касается зависимости эффектов метформина от массы тела и телесного жира, все участники были обследованы с точки зрения двух индексов Seca Supra plus 720 (Seca, Гамбург, Германия), и данные были проанализировано с помощью анализа биоэлектрического сопротивления (BIA) (17).

3.4. Статистический анализ

Данные были проанализированы для нормализации с использованием критерия Шапиро-Уилка. Распределение антропометрических и клинических переменных было ненормальным в обеих группах. Обобщенное оценочное уравнение (GEE) использовалось для проверки различий между двумя группами в отношении никотиновой абстиненции, котинина в моче и уровня eCO через несколько интервалов.Пороговое значение теста Фагерстрема для никотиновой зависимости составило 5 баллов. Кроме того, концентрации котинина в моче 50 нг/мл и 8 частей на миллион eCO были пороговыми точками для подтверждения воздержания от курения (согласно Moreno-Coutiño и Villalobos-Gallegos, (18). Демографические характеристики сравнивались с критерием хи-квадрат. в двух группах, а качественные результаты, включая побочные эффекты, были проанализированы с помощью программного обеспечения Atlas-Ti5.Уменьшение синдрома отмены сигарет в течение 12 недель лечения считалось первичным результатом, а оценка котинина в моче и уровни eCO один раз в неделю считались вторичными результатами. .В начале исследования и в виде мультибазовых показателей оценивались переменные. Изменения лактоацидоза также оценивались как возможный побочный эффект метформина. Данные были проанализированы статистическим пакетом программного обеспечения для социальных наук (SPSS) (версия 22), критерий значимости составил 0,05.

3.5. Этическое одобрение

Это исследование было частью исследовательского проекта, одобренного Комитетом по медицинской этике Университета медицинских наук Шахида Бехешти (IR.СБМУ.КПР.РЕЦ.1399.035). Все интервью были записаны в цифровом виде и скопированы со слов и закодированы. Все этапы исследования проводились после получения информированного согласия пациента и на основании Хельсинкской декларации (DoH) (19).

Лечение боли при ревматоидном артрите с помощью метформина

Противовоспалительные эффекты метформина предполагают новый и захватывающий путь облегчения боли у пациентов с ревматоидным артритом, включая возможность его использования в качестве дополнительного лечения к метотрексату.

Метформин обычно используется в качестве препарата первой линии для лечения сахарного диабета 2 типа. Агент действует через различные механизмы для достижения снижения уровня глюкозы в крови. Эти механизмы широко связаны с влиянием на клеточный цикл, а также на сигнальные пути, включая m-TOR и AMPK.

Противовоспалительные эффекты метформина

В исследовании 2019 года, проведенном Chen et al., изучались механистические возможности метформина при ревматоидном артрите (РА), сосредоточенные на влиянии синовиальных фибробластоподобных клеток (FLS) на прогрессирование РА, которые были описаны как ключевой тип клеток, способствующий разрушению суставов. ^1,2 Метформин ингибирует пролиферацию FLS за счет индукции клеточного цикла, а также регуляции пути m-TOR и активации AMPK. ¹ Это ингибирование свидетельствует о противовоспалительных эффектах, которые могут быть полезными при лечении симптомов РА. В 2020 году Salvatore et al. дополнительно продемонстрировали возможные преимущества метформина через пути m-TOR и AMPK, сосредоточив внимание на провоспалительном цитокине интерлейкине IL-17, который продуцируется клетками Th27, среди других механизмов.Команда Сальваторе утверждала, что AMPK и m-TOR могут быть связаны с подавлением клеток Th27, что приводит к противовоспалительным эффектам. ³

В рекомендациях

Американского колледжа ревматологов (ACR) по лечению ревматоидного артрита рекомендуется подход «лечение до достижения цели». (Изображение: iStock)

 

Рекомендации ACR по лечению ревматоидного артрита

Руководящие принципы Американского колледжа ревматологов (ACR) по лечению ревматоидного артрита рекомендуют подход «лечение до цели», по существу рекомендуя, чтобы клинические решения были персонализированы в зависимости от случая пациента.В настоящее время даже лицам с легкой степенью тяжести заболевания, которые никогда не принимали болезнь-модифицирующие антиревматические препараты (БМАРП) при РА, рекомендуется назначать монотерапию БМАРП, предпочтительно метотрексатом. (См. также рекомендации ACR по охране репродуктивного здоровья для людей с ревматическими заболеваниями.)

В качестве альтернативы или более поздних вариантов в руководствах ACR рекомендуется комбинировать традиционные БПВП, ингибиторы фактора некроза опухоли (ФНО) или биологические препараты, отличные от ФНО. Подходы последней линии нацелены на использование различных комбинаций этих механизмов.В настоящее время нет доступных лекарственных механизмов, которые специально используют пути m-TOR или AMPK для нацеливания на FLS. ⁴

Влияние РА на здоровье населения и качество жизни подтверждает важность открытия и разработки новых методов лечения. Пятнадцать миллионов взрослых американцев сообщают о сильной боли в суставах из-за артрита. Ревматические заболевания и артрит являются основной причиной пропуска работы, при этом риск падений увеличивается в 2,5 раза, а расходы на здравоохранение, связанные с артритом, составляют 304 миллиарда долларов. ⁵ Таким образом, новый механизм лечения ревматоидного артрита был бы полезен.

Метформин в качестве дополнительной терапии к метотрексату: данные

Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование 2021 года, проведенное Abdallah et al., попыталось определить, превосходит ли метформин в качестве дополнения к терапии метотрексатом по сравнению с монотерапией метотрексатом. Первичным результатом была частота ответов по критериям улучшения ACR 20% (ACR20), которая представляет собой совокупность, включающую количество опухших или болезненных суставов, оценку боли, оценку функциональных возможностей, общую оценку артрита пациентом и врачом и уровень С-реактивного белка. через 12 недель.Вторичные результаты включали улучшение ACR на 50% (ACR50) и улучшение ACR на 70% (ACR70) в дополнение к оценке активности заболевания в 28 суставах (DAS). DAS указывает на активность заболевания РА, учитывая количество опухших или болезненных суставов и воспалительные маркеры.

Субъекты, участвовавшие в исследовании Абдаллы, должны были быть в возрасте от 24 до 58 лет с активным РА при любой продолжительности заболевания. К участию допускались лица, получающие метотрексат, НПВП, ацетаминофен, селективные ингибиторы ЦОГ-2 и пероральные кортикостероиды в низких дозах.Исключались те, кто принимал биологические DMARD, с тяжелой анемией или активной инфекцией, беременные или кормящие, застойная сердечная недостаточность, высокие дозы стероидов или клинически значимое заболевание почек или печени. Шестьдесят пациентов (60) получали метотрексат 7,5 мг внутримышечно один раз в неделю плюс метформин пролонгированного действия 1000 мг один раз в день во время еды в течение 12 недель. Еще 60 пациентов получали таблетку плацебо плюс метотрексат 7,5 мг внутримышечно один раз в неделю. ⁶

Результаты показали, что в группе вмешательства было всего 80 человек.8% пациентов достигли ответа ACR20 через 12 недель, в то время как в группе плацебо в общей сложности было 54,7% пациентов ( P = 0,001; NNT = 4). Ответ ACR50 через 12 недель также был значительно выше в группе вмешательства (32,1% против 13,5%; P = 0,0047). Ответ ACR70 через 12 недель также был значительно выше в группе вмешательства (16,4% против 6,8%; P = 0,0038). Субъекты с высокой активностью заболевания на исходном уровне (DAS> 5,1) также продемонстрировали увеличение ремиссии DAS в группе вмешательства через 12 недель (50.7% против 21,5%; P = 0,004). У лиц с низкой активностью заболевания также были значимые результаты (80,0% против 50,0%; P = 0,015). Кроме того, группа вмешательства показала значительное снижение сывороточного уровня экспрессии TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17A, NF-κB, TGG-β1, MDA, анти-CCP и IGF-IR. по сравнению с группой плацебо через 12 недель.

Кроме того, группа вмешательства показала значительное увеличение активности IL-10 и AMPK по сравнению с плацебо через 12 недель.Побочные эффекты включали тошноту, стоматит, вздутие живота, бессонницу, головную боль, выпадение волос, снижение лейкоцитов, фарингит, повышение уровня ферментов печени (АЛТ и АСТ), повышение уровня холестерина и триглицеридов в крови и повышение уровня ЛПНП. Частота этих событий варьировала от 5% до 15%. ⁶

Метформин для лечения ревматоидного артрита: практические выводы

Несмотря на многообещающие результаты исследования Абдаллы, существуют ограничения в отношении обобщаемости результатов.Пока рано рассматривать метформин в качестве вспомогательного средства для лечения РА из-за небольшого размера выборки, единственного исследуемого региона и короткой 12-недельной продолжительности исследования. Демографические данные были сбалансированы между группами в отношении тяжести заболевания, пола, возраста, массы тела, продолжительности заболевания, продолжительности предшествующей терапии метотрексатом и одновременного применения глюкокортикоидов и НПВП. Это увеличивает внутреннюю валидность и силу результатов. Однако исследователи не показали частоты других DMARD, таких как гидроксихлорохин.Кроме того, были включены только пациенты среднего возраста, а лица старше 58 лет были исключены. Требуются дальнейшие исследования с более длительным наблюдением, большими размерами выборки, большим разнообразием и стратификацией для вмешивающихся факторов.

Другие клинические испытания метформина при болевых синдромах продолжаются. В исследовании, зарегистрированном на сайте ClinicalTrials.gov, оценивается использование метформина при хронической боли после торакальной хирургии у пациентов с диабетом. Две группы — метформин и инсулин в качестве плацебо для контроля уровня глюкозы в крови.Первичным исследуемым исходом будет частота возникновения хронической боли через три месяца после операции. Завершение ожидалось в декабре 2020 года; однако никакой дополнительной информации в реестре нет. ⁷

Одно исследование, в котором в настоящее время участвуют пациенты, направлено на оценку использования метформина при болях в пояснице у пациентов без диабета. В этом испытании есть 4 группы сравнения: высокие и низкие дозы метформина, плацебо и контрольная группа из списка ожидания, которые будут рандомизированы в одну из других групп лечения.Основными изучаемыми исходами являются изменение числовой шкалы боли и изменение индекса нетрудоспособности Освестри за 15 месяцев. ⁸ Более раннее исследование 2019 года, в котором в настоящее время также проводится набор пациентов, направлено на изучение влияния метформина на РА. В этом испытании будут сравниваться стандартные БПВП с дополнительным метформином и те же самые БПВП плюс плацебо. Первичным результатом будет изменение показателей DAS через 6 месяцев. Январь 2020 года был предполагаемой датой завершения исследования.Никакой дополнительной информации в реестре нет. ⁹

Были изучены и другие состояния, но РА содержит наилучшие данные по применению метформина в литературе на сегодняшний день. Другие изученные расстройства включают остеоартрит, ^10,11 индуцированную химиотерапией периферическую невропатию ^12, связанную со статинами мышечную боль, ¹³ и боль, связанную с СПКЯ. ¹⁴  Другие изученные болевые синдромы не имеют достаточных доказательств в поддержку использования метформина. (См. также познание и РА.)

В целом, метформин представляет собой новый и захватывающий путь облегчения боли при ревматоидном артрите благодаря его механизму в сигнальных путях m-TOR и AMPK. Хотя ограниченные данные свидетельствуют о пользе метформина в качестве дополнения к метотрексату у пациентов с активным РА, необходимы дополнительные исследования для выяснения его роли в лечении. Использование метформина в настоящее время изучается в ходе многочисленных клинических испытаний, которые могут пролить больше света на его место в терапии людей с ревматоидным артритом.

 

Последнее обновление: 8 сентября 2021 г.

Специальный отчет: Эволюция лечения ревматоидного артрита: от золота к генной терапии

Понимание вызванных беременностью изменений в распределении норбупренорфина, метформина и глибурида у мышей и людей для оптимизации лекарственной терапии во время беременности

Аннотация

Использование фармакотерапии во время беременности широко распространено и увеличивается. В современной клинической практике медицинские работники все чаще назначают бупренорфин (БУП) для лечения опиоидной зависимости, а также метформин и глибурид при гестационном сахарном диабете (ГСД).Из-за двойного риска и пользы для матери и плода важно понимать, как беременность влияет на утилизацию этих препаратов и их метаболитов. Чтобы понять влияние P-gp и Bcrp на распределение тканей во время беременности, а также влияние беременности на распределение лекарств, мы вводили норбупренорфин (NBUP), основной активный метаболит BUP, небеременным диким типам (WT), беременным WT. , беременные мыши с нокаутом P-gp (Mdr1a/1b) (KO) и беременные мыши P-gp/Bcrp (Mdr1a/1b/Abcg2) с нокаутом.Мы показали, что воздействие NBUP и норбупренорфин-3-β-D-глюкуронида (NBUP-G) на плод у беременных мышей составляет ~ 60% и ~ 700% воздействия материнской плазмы соответственно, что позволяет предположить, что воздействие двух этих веществ на плод основных активных метаболитов BUP является значительным, и, следовательно, следует соблюдать осторожность в отношении безопасности плода при использовании BUP во время беременности. Мы также продемонстрировали значительное дифференцированное влияние P-gp на воздействие NBUP на плод и головной мозг, с гораздо большей ролью P-gp в ограничении распределения NBUP через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) по сравнению с гематоплацентарным барьером (BPB).Впоследствии мы продемонстрировали, что системный клиренс (CL) NBUP у беременных мышей WT был примерно в 2,5 раза выше по сравнению с небеременными мышами WT. Собственный CL NBUP путем глюкуронирования в микросомах печени беременных мышей был примерно в 2 раза выше, чем у небеременных мышей. Целевая количественная оценка протеомики LC-MS/MS показала, что уровни белков печени Ugt1a1 и Ugt2b1 в том же количестве общих белков мембраны печени были значительно повышены (~ 50%) у беременных мышей по сравнению с небеременными мышами.В последнее время метформин и глибурид приобретают все большую популярность для лечения ГСД. Однако оптимальные режимы дозирования этих двух препаратов при беременности неизвестны. Мы провели многоцентровое проспективное рандомизированное исследование фармакокинетики фазы II с параллельным дизайном. Мы проанализировали фармакокинетику перорально вводимого метформина в равновесном состоянии у беременных женщин с ГСД и небеременных женщин с сахарным диабетом 2 типа (СД2), а также фармакокинетику перорального глибурида у беременных с ГСД после еды и натощак.В когорте метформина при дозах 500 мг и 1000 мг биодоступность, объем распределения, клиренс и почечный клиренс метформина увеличивались во время беременности. Для когорты глибурида одновременное потребление стандартизированной пищи увеличивало нормализованную по дозе глибурида AUC и уменьшало кажущийся пероральный объем распределения β, кажущийся пероральный клиренс и период полувыведения. В целом, этот объем информации дает представление о фармакокинетике и механистическом понимании использования бупренорфина, метформина и глибурида во время беременности, закладывая основу для оптимизации лечения опиоидной зависимости и гестационного сахарного диабета во время беременности.

Грант

NIH для изучения воздействия метформина на развитие плода

Содержание

Исследователи из Медицинского колледжа Бэйлора получили пятилетний грант в размере 7,8 млн долларов США, чтобы сосредоточиться на влиянии пренатального воздействия метформина, препарата, назначаемого для снижения уровня сахара в крови у пациентов с диабетом 2 типа. Ежегодно метформин назначают 50 миллионам американцев, в том числе широко используют во время беременности. Исследовательская группа будет изучать приматов и анализировать влияние воздействия метформина на развитие плода.
 
За последнее десятилетие использование метформина во время беременности неуклонно расширялось за пределы лечения явного диабета вне беременности. В настоящее время его использование включает лечение преддиабета и ожирения, синдрома поликистозных яичников, диабета 2 типа и гестационного диабета. В связи с его более широким использованием возникли вопросы о непреднамеренном, долгосрочном вреде для потомства, подвергшегося воздействию метформина в утробе матери. Приматам будут давать метформин или плацебо-контроль в дополнение к диете в западном стиле, и исследователи будут изучать отдельное и комбинированное воздействие на потомство
 
«Используя модель приматов, мы обладаем уникальной способностью не только понять, как метформин изменяет физиологию матери и плода, а также основные молекулярные механизмы, которые управляют этими физиологическими изменениями.Основываясь на наших предварительных данных, мы сосредоточимся на вызванных метформином эпигенетических изменениях печени, скелетных мышц и других тканей потомства. Кроме того, мы особенно заинтересованы в продолжении наших исследований роли использования метформина матерью в программировании стойких изменений в микробиоме ее потомства», — сказал д-р Кьерсти Аагаард, главный исследователь исследования и профессор кафедры акушерства и гинекологии отделения медицины матери и плода в Детской больнице Бейлора и Техаса.
 
Аагард возглавит группу совместных исследователей из нескольких учреждений, которая сформировалась за последние два десятилетия для продолжения работы над решением вопроса о воздействии метформина на плод и на раннем этапе развития. Другими ключевыми исследователями Бейлора в этом проекте являются доктора. Мелисса Сутер, Макс Сеферович и Майкл Джохум. Сотрудничающие учреждения включают Орегонский национальный исследовательский центр приматов, Университет Вандербильта, Университет Оклахомы, Университет Орегона и Университет Колорадо.
 
«При финансовой поддержке NIH и NIDDK для меня было привилегией работать с этой поистине удивительной совместной командой с тех пор, как я был научным сотрудником в Университете штата Юта. Мы накопили большой опыт в высокоэффективных исследованиях беременности у приматов, и нам посчастливилось сделать важные выводы, которые иначе не могли бы произойти. Например, предыдущая работа нашей команды привела к ключевым научным наблюдениям, оказавшим непосредственное влияние на наше понимание и рекомендации в отношении питания во время беременности.Наша команда пришла к пониманию того, что материнское питание в западном стиле, а не само ожирение матери, программирует плод на пожизненный риск резистентности к инсулину, диабета и ожирения», — сказал Аагаард.
 
Этот грант финансируется Национальным институтом здравоохранения, а новаторская работа будет проводиться в Орегонском национальном центре исследований приматов. Другие соисследователи включают доктора Пола Кивита, доктора Морин Гэннон, доктора Джеда Фридмана, доктора Кэрри МакКарди и доктора Уилсона.

No related posts.