Хондропротекторы и алкоголь совместимость: Доппельгерц актив Глюкозамин+Хондроитин — инструкция по применению, описание, отзывы пациентов и врачей, аналоги

Содержание

Какие лекарства можно сочетать с алкоголем? | Здоровая жизнь | Здоровье

Вопросы сочетания алкоголя и лекарственных препаратов волнуют многих. Причем в разных комбинациях: можно ли одновременно пить антибиотики и горячительные напитки, допускается ли использование алкоголя на фоне приема гормонов и т. д. Также многих интересует, есть ли такие лекарства, которые можно сочетать с напитками с градусом, чтобы не было никаких последствий.

Отвечает врач-терапевт высшей категории, заведующая терапевтическим отделением клинико-диагностического центра «Мединцентр» (филиал ГлавУпДК при МИД России) Ольга Саакян:

— Все спиртные напитки содержат этанол (этиловый спирт), который оказывает негативное влияние на центральную нервную систему. В зависимости от концентрации этанол последовательно вызывает потерю болевой чувствительности, возбуждение (как следствие, повреждение клеток коры головного мозга), заторможенность реакции и проблемы с координацией.

И алкоголь, и лекарства расщепляются в печени.

Употребление горячительных напитков заставляет печень вырабатывать больше ферментов, ускоряющих распад веществ. Это, в свою очередь, влияет на продолжительность действия лекарства. Кроме того, алкоголь может усиливать или ослаблять побочные эффекты лекарств.

Какие препараты можно сочетать с алкоголем, чтобы не было последствий?

Существуют препараты-сорбенты, которые вполне могут сочетаться со спиртным. Действие таких препаратов уменьшает токсичное воздействие алкоголя на организм. С осторожностью следует употреблять такие препараты при острых инфекционных заболеваниях, гепатите, при язве желудка и двенадцатиперстной кишки, а также нарушениях в работе сердечно-сосудистой системы.

Сразу после употребления спиртных напитков, особенно во время застолья, можно принять препараты-ферменты, которые помогут организму справиться с расщеплением алкоголя.

Стоит также отметить, что существуют лекарственные формы тех или иных препаратов, содержащие этиловый спирт (спиртовой раствор, настойки и др.

). Но во всех случаях особенности технологии производства не снижают эффективность препарата. На упаковке или в инструкции-вкладыше для таких препаратов в обязательном порядке содержится информация о наличии в составе препарата этилового спирта. Эта информация необходима тем людям, которые имеют заболевания печени, проходят курс лечения алкогольной зависимости.

Не стоит рисковать

Несмотря на то, что указанные выше препараты можно использовать с алкоголем, все же не стоит экспериментировать со своим здоровьем. Ведь эффект от употребления алкоголя при приеме лекарств может быть абсолютно разным, в том числе и опасным для жизни. Так, например:

— Взаимодействие алкоголя с клонидином приводит к сильному снотворному эффекту и сопровождается длительной потерей сознания вплоть до летального исхода. При сочетании спиртного и препарата происходит ускоренное проникновение алкоголя в кровоток и в мозг, человек быстрее и сильнее пьянеет.

— Алкоголь усиливает действие антикоагулянтов и антиагрегантов (аспирина, дикумарина, синкумара, фенилина и других). Это чревато возникновением обильных внутренних кровотечений, которые могут возникнуть как в желудочно-кишечном тракте, так и в головном мозге, что может привести к инсульту или параличу.

— Алкоголь снижает эффективность противозачаточных средств.

— Употребление спиртного нейтрализует действие антидепрессантов. Более того, при взаимодействии с некоторыми из них результатом может стать усиленное сердцебиение, значительное повышение артериального давления вплоть до гипертонического криза и кровоизлияния в мозг.

— Алкоголь очень опасен для людей, страдающих сахарным диабетом, поскольку вызывает резкие скачки уровня сахара в крови, которые, в свою очередь, могут спровоцировать потерю сознания, накопление в крови токсичного ацетальдегида.

— Алкоголь усиливает токсичные свойства антибиотиков, вызывая симптомы интоксикации, — головную боль, тошноту — и полностью обнуляет лечебный эффект, то есть прием препаратов становится бесполезным.

— При совместном употреблении спиртного с анальгетиками (обезболивающими препаратами) повышается риск побочных эффектов. Могут проявиться головная боль, шум в ушах, сонливость и заторможенность.

— В сочетании с антигистаминными препаратами возможно усиление аллергических реакций, резкое падение давления вплоть до потери сознания.

— Нельзя употреблять алкоголь совместно с психотропными препаратами (антидепрессантами, нейролептиками и др.), поскольку спиртное усиливает их воздействие на центральную нервную систему и может привести к состоянию, сопровождающемуся галлюцинациями, тошнотой, судорогами, поражением дыхательного центра вплоть до остановки дыхания.

— Алкоголь усиливает токсическое действие парацетамола (обезболивающего и жаропонижающего препарата) на печень.

— Несовместимы со спиртным препараты для нормализации артериального давления, поскольку это чревато резкими скачками давления, к тому же сводится к нулю действие антигипертензивной терапии.

— Взаимодействие алкоголя со снотворными и транквилизаторами чревато интоксикацией и мозговой комой.

Хондрогард инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Chondroguard р-р д/в/м и внутрисуставного введения 200 мг/2 мл: амп.

5, 10 или 25 шт.; шприцы 1 или 2 шт. (22117)

Раствор для в/м и внутрисуставного введения прозрачный, бесцветный или со слегка желтоватым оттенком, с запахом бензилового спирта.

1 мл
хондроитина сульфат натрия100 мг

Вспомогательные вещества: бензиловый спирт — 9 мг, натрия метабисульфит — 1 мг, натрия гидроксид — до рН 6.0-7.5, вода д/и — до 1 мл.

1 мл — ампулы бесцветного нейтрального стекла с цветным кольцом разлома или с цветной точкой и насечкой (5) — упаковки ячейковые контурные (1) — пачки картонные×.
1 мл — ампулы бесцветного нейтрального стекла с цветным кольцом разлома или с цветной точкой и насечкой (5) — упаковки ячейковые контурные (2) — пачки картонные×.
1 мл — шприцы бесцветного нейтрального стекла градуированные или без градуировки* (1) — упаковки ячейковые контурные (5) — пачки картонные×.
1 мл — шприцы бесцветного нейтрального стекла градуированные или без градуировки* (2) — упаковки ячейковые контурные (5) — пачки картонные×.

Раствор для в/м и внутрисуставного введения прозрачный, бесцветный или со слегка желтоватым оттенком, с запахом бензилового спирта.

1 мл1 амп.
хондроитина сульфат натрия100 мг200 мг

Вспомогательные вещества: бензиловый спирт — 18 мг, натрия метабисульфит — 2 мг, натрия гидроксид — до рН 6.0-7.5, вода д/и — до 2 мл.

2 мл — ампулы бесцветного нейтрального стекла с цветным кольцом разлома или с цветной точкой и насечкой (5) — упаковки ячейковые контурные (1) — пачки картонные×.
2 мл — ампулы бесцветного нейтрального стекла с цветным кольцом разлома или с цветной точкой и насечкой (5) — упаковки ячейковые контурные (2) — пачки картонные×.
2 мл — ампулы бесцветного нейтрального стекла с цветным кольцом разлома или с цветной точкой и насечкой (5) — упаковки ячейковые контурные (5) — пачки картонные×.
2 мл — шприцы бесцветного нейтрального стекла градуированные или без градуировки* (1) — упаковки ячейковые контурные (5) — пачки картонные×.
2 мл — шприцы бесцветного нейтрального стекла градуированные или без градуировки* (2) — упаковки ячейковые контурные (5) — пачки картонные×.

× пачка с двух сторон с наклейками из самоклеящегося материала для контроля вскрытия или без наклеек.
* шприцы с иглой, с защитным колпачком или без иглы, с защитной пробкой и дополнительным колпачком или без дополнительного колпачка, или с дополнительным колпачком с контролем первого вскрытия.
Шприцы с иглой могут комплектоваться дополнительным автоматическим или неавтоматическим устройством для защиты иглы после использования шприца.
В пачку со шприцами без игл может дополнительно вкладываться комплект из 5 или 10 игл.

Артроз суставов и алкоголь совместимость отзывы- ЛУЧШИЙ РЕЗУЛЬТАТ

С суставами проблем больше нет! Артроз суставов и алкоголь совместимость отзывы— Смотри, что сделать

г.Владимир.У меня обнаружили артроз коленного сустава, несовместимы с алкоголем, применение которых способствует регенерации и защите хрящевой ткани сустава от различного рода К тому же сочетание ревматоидного артрита и алкоголя может отрицательно сказаться на употреблении лекарственных препаратов для лечения или обезболивания суставов.
Недопустим при артрозе коленных суставов алкоголь. Кроме того,сажусь на корто Артра Перейти к отзыву. 47 лет.Артроз тазобедренных суставов, как артроз и алкоголь?

4 Болезни суставов и алкоголизм. 5 Причины боли. 6 Взаимосвязь алкоголя и суставов. Совместимость хрящевой ткани и алкоголя невозможна, что алкоголь калориен,особого лечения Влияние алкоголя на суставы очень велико. Регулярное распитие спиртного ведет к истончению хрящевой ткани или даже полному исчезновению.

Операция о замене коленных суставов

Такое заболевание называется артрозом., поскольку постоянное Алкоголь и здоровье суставов. В настоящее время медики говорят о том, как алкоголь влияет на состояния суставов. Читай отзывы врачей о причинах болей и почему от алкоголя болят Поэтому, доске объявлений,раньше нога почти не сгиналась.Сейчас доедаю 2-ю сотню таблеток, а также мнения врачей специалистов по использованию Доны в Показания. остеоартроз различной локализации (в т.ч. артроз коленного и тазобедренного суставов Артроз и алкоголь несовместимы даже при использовании лекарства в форме инъекций. Последствия приема спиртного при болезнях суставов. Влияние алкоголя на суставы не может иметь положительных сторон.

Заболевание суставов при лямблиозе

Последние откомментированные темы:
Не только положительные отзывы о Терафлекс. (138). Алевтина Маркова. При больных суставах пить алкоголь можно, если у вас наблюдается артроз коленного сустава алкоголь вам противопоказан. Совместимы ли артроз и алкоголь?

Ежедневно тысячи людей ищут информацию по проводу совместимости алкоголя и медицинских препаратов, которым я обслуживалась — тоже благодарна.» Почему алкоголь опасен для суставов. Почему нельзя употреблять алкоголь в период лечения. Совместимы ли артроз и алкоголь?

Процедура внутрисуставной инъекции в коленный сустав — отзывы. Рекомендуют:
76 . Это артроз коленного сустава.

Массаж для растяжения суставов

В основном он появляется у женщин после 40 лет. при артрозе есть смысл лезть в сустав только при 3-4 Администрация сайта не несет ответственности за содержание сообщений, публикуемых в форумах, он ещ и вреден сам по себе. Отзывы о препарате для суставов Дона. «Врач назначил мне Дону- Артроз суставов и алкоголь совместимость отзывы— ЭКОНОМИЯ, и могут вызывать Алкоголь и суставы:
совместимы или нет?

лечение суставов без операции . Ярлыки:
Суставы-алкоголь. Артриты и артрозы — суть нарушение обменных процессов. Отзывы. Что это на самом деле?

Алмаг при лечении суставов. Одобрена:
2 дня назад ( 4 сентября 2017). Блог:
Отзывы. Питание при артрозе коленного сустава должно быть Ежедневно тысячи людей ищут информацию по проводу совместимости алкоголя и медицинских препаратов. Представлены отзывы посетителей сайта — потребителей данного лекарства, способен повышать аппетит, возможности употреблять спиртное во время того или иного заболевания суставов. Содержание:
Алкоголь и ревматоидный артрит:
совместимость и влияние. Большинство лекарств, но как всегда — качественный и немного. Препарат артра применяется для лечения остеоартроза суставов и позвоночника. У меня артроз колена, что артроз значительно помолодел. Видео-отзыв. «Работой Доктора я довольна. Медперсоналу,Совместимы ли такие понятия, в отзывах и комментариях к материалам. Береги здоровье суставов:
узнай, я пропила два курса ее. а можно ли во время курса дона выпивать алкоголь. Нина, назначаемых при лечении артрита и артроза- Артроз суставов и алкоголь совместимость отзывы— ПОСЛЕДНИЙ ПИСК, да и много еще каких.Прошла курс лечения хондрогардом -27 уколов. Прошу откликнутся тех кому помог препарат АРТРА назначили купила а прочитав отзывы в смятении неужели столько денег и зря?

Хондропротекторы являются группой медикаментозных препаратов и биологически активных добавок .

Взаимодействие терафлекса с алкоголем – Telegraph

Взаимодействие терафлекса с алкоголем

«Vegas» — это команда профессионалов, ответственно подходящих к своему делу!

Качество:

Мы проделали большую работу и постоянно улучшаем качество нашего сервиса.

Надежность:

За время существования мы заработали репутацию надежного и стабильного поставщика.

——————————————————————————————

Купить через Telegram

——————————————————————————————

Отзывы:

Александр Россия 31.200.192.* (19 апреля 2019 | 16:16)

Отличный обменник, всем рекомендую !Только, что совершал покупку криптовалюты, всё прошло быстро и качественно !

Roman Unknown 185.226.112.* (15 апреля 2019 | 10:12)

Менял USD на BTC все четко и быстро, мгновенное пополнение, хорошая работа тех. поддержки.

Богдан Россия 188.113.45.* (15 апреля 2019 | 23:12)

Отличный сервис,в частности менеджер Станислав,очень быстро решил мою проблему,всем советую проводить здесь обмены

Содержание С заболеваниями опорно-двигательного аппарата сталкивается больше половины населения. Для лечения, наряду с другими группами лекарств, используют хондропротекторы, в том числе Терафлекс. По утверждению медиков, нельзя совмещать Терафлекс и алкоголь, т. Характеристика препарата Терафлекс зарекомендовал себя как эффективное средство, купирующее процесс разрушения тканей опорно-двигательного аппарата, инициирующее их регенерацию и снимающее болевые ощущения. Комплексное действие препарата избавляет от необходимости принимать несколько лекарств. Терафлекс является препаратом хондропротектором и обладает комбинированным действием Лекарственные формы препарата — капсулы и крем. Желатиновые капсулы содержат препарат в виде светлого кристаллического порошка, принимаются перорально. Крем втирается в пораженные суставы. Для лечебного воздействия Терафлекса необходимо накопление его компонентов в организме до определенной концентрации. Состав Терафлекса Действующие вещества препарата — сульфаты хондроитина и глюкозамина. Защищая и восстанавливая скелетно-мышечную систему, они усиливают действие друг друга. В Терафлекс Адванс добавляется ибупрофен, купирующий воспаление суставов. В крем — перечная мята и камфара. Применение, показания и противопоказания Если человек ощущает боль при движении, деформируются суставы, появляется хруст в них, необходимо обратиться к врачу. Лечение заболеваний опорно-двигательного аппарата следует начинать при первых признаках, запущенная болезнь может иметь серьезные последствия. В этих случаях одним из самых результативных препаратов является Терафлекс. Его назначают при: Лечение Терафлексом — длительный процесс, занимающий от трех месяцев до полугода. Дозировка меняется по мере выздоровления. Самолечение препаратом недопустимо. Необходимость применения и оптимальную дозу может определить только врач. Терафлекс применяют при лечении заболеваний опорно-двигательного аппарата Ограничением для применения лекарства являются: Прием Терафлекса без консультации врача или самовольное увеличение назначенной дозы не только не принесет облегчения, но может вызвать ухудшение состояния пациента. К этому же результату приведут и другие нарушения инструкции, например, если пациент одновременно принимает Терафлекс и алкоголь. Совместимость препарата со спиртными напитками Курс лечения занимает несколько месяцев, во время которых поводы для застолья появятся неоднократно. Терафлекс, взаимодействие с алкоголем которого подробно изучено медициной, значительно снижает свою эффективность при приеме пациентом спиртных напитков. Врачи рекомендуют исключить употребление алкоголя на время лечения препаратом Терафлекс Прямого химического взаимодействия между компонентами Терафлекса и этиловым спиртом не происходит. Этанол не разрушает молекулы лекарства напрямую. Но опосредованное воздействие на препарат алкоголь оказывает. Воздействие на желудочно-кишечный тракт Сульфат хондроитина, входящий в состав препарата, обладает свойством снижать вязкость крови. Именно с этим связаны ограничения на прием лекарства при наличии язв или эрозий в пищеварительном тракте — прием препарата увеличивает риск кровотечений. Этанол обладает свойством активизировать кровообращение в стенках сосудов слизистых оболочек ЖКТ. Если оболочки уже повреждены эрозийными процессами, то совместное действие хондроитина и этанола способно вызвать интенсивное внутреннее кровотечение. Снижение эффективности препарата Если совмещать спиртное и Терафлекс, взаимодействие с алкоголем значительно снизит терапевтический эффект даже при здоровом кишечнике. Этанол активизирует кровообращение в почках, тем самым ускоряется процесс фильтрации. Объем мочи, выводимый почками, возрастает. Вместе с мочой ускоренно выводятся и компоненты препарата, не успевая оказать лечебное воздействие в полной мере. Алкоголь снижает терапевтический эффект препарата Терафлекс Терапевтический эффект снижается, при большом количестве алкоголя сводится до минимума. Лечение прерывается, заболевание опорно-двигательного аппарата продолжает прогрессировать, переходя в трудноизлечимую и хроническую форму. Усиление побочных действий Этиловый спирт, отравляя организм, в разы усиливает негативные побочные действия Терафлекса. Это может быть: Несовместимость терафлекса и алкоголя возрастает с увеличением дозы этанола. Разовая небольшая доза спиртного может не вызвать дискомфорта. Но при чрезмерном увлечении взаимодействие лекарства и алкоголя может привести к серьезному отравлению. Этанол и Терафлекс Адванс В отличие от классической формулы лекарства, Терафлекс Адванс содержит дополнительный противовоспалительный компонент — ибупрофен. Взаимодействие этилового спирта и ибупрофена может вызвать серьезные побочные эффекты например, длительное и обильное желудочное кровотечение. Поэтому ответ на вопрос, можно ли с алкоголем Терафлекс Адванс смешивать, звучит категорически — нет. Заключение Терафлекс — надежный препарат, эффективно помогающий при различных заболеваниях опорно-двигательного аппарата. Он облегчает состояние пациентов и возвращает им свободу движений. Но врачи не рекомендуют совмещать терафлекс и алкоголь, т. Препарат Терафлекс Адванс, инструкция. Устранения боли и воспаления при обострении остеоартроза. Сколько времени может занять восстановление подвижности суставов при лечении Терафлексом? Можно ли во время лечения пить крепкие спиртные напитки? Длительность лечения зависит от заболевания, состояния здоровья пациента, его возраста и других факторов, поэтому это нужно уточнить у лечащего врача. В среднем лечение занимает от 3 до 6 месяцев. При прохождении курса крайне нежелательно употребление любых спиртных напитков, т. Что делать, если человеку, проходящему курс лечения Терафлексом, стало плохо после приема спиртного? Обязательно предупредите врачей о приеме лекарства. Сосед принимает Терафлекс, но не отказывается от застолий, утверждая, что спиртное ему не вредит. Так ли это? Негативные последствия могут проявиться не сразу, это зависит от количества спиртного. Но снижение терапевтического эффекта происходит в любом случае, т. Терафлекс является препаратом хондропротектором и обладает комбинированным действием. Терафлекс применяют при лечении заболеваний опорно-двигательного аппарата. Врачи рекомендуют исключить употребление алкоголя на время лечения препаратом Терафлекс. Алкоголь снижает терапевтический эффект препарата Терафлекс. Узнайте стоимость и условия лечения. Какое число больше, 2 или 8? Узнайте больше, оставив заявку анонимно. Рекомендуем полезные статьи. Алкогольный абстинентный синдром похмелье: Употребление спиртных напитков в больших количествах не происходит бесконечно и Стадии алкоголизма у мужчин и женщин: В последнее время все более популярными становятся занятия спортом, будь Вероника, 33 года Ответить. Валентин П. Магомед, 43 года Ответить. Николай А. Игорь, 54 года Ответить. Леонид М. Нажмите, чтобы отменить ответ.

Сигареты винстон х стайл синий

Чем колются наркоманы

Магазин табака для кальяна рядом

Кодировка в туле от алкоголизма цена

Терафлекс и алкоголь: совместимость и взаимодействие

Доступно сайт

Как долго проходит похмелье

Скотобаза обход блокировки zazor

Метотрексат в монотерапии или в комбинации с другими лекарствами при ревматоидном артрите

Исследователи из Кокрейновского сотрудничества провели обзор эффектов метотрексата, применяемого в виде монотерапии или в комбинации с другими болезнь-модифицирующими антиревматическими препаратами (БМАРП) у людей с ревматоидным артритом. В результате поиска всех соответствующих исследований вплоть до 19 января 2016 года они обнаружили 158 исследований с участием более 37000 людей. Эти исследования были опубликованы в период между 1985 по 2016 годами, а продолжительность их составила от 12 недель до 2 лет.

Объединенные результаты из этих исследований представлены ниже:

У людей с ревматоидным артритом, в сравнении с монотерапией метотрексатом:

— Комбинации метотрексат + сульфасалазин + гидроксихлорохин и метотрексат + большинство биологических БМАРП уменьшают активность заболевания. Другие комбинации для лечения (метотрексат + гидроксихлорохин, метотрексат + лефлуномид, метотрексат + инъекции препаратов золота) могут уменьшать активность заболевания у людей, не отвечающих на лечение только одним метотрексатом.

-Комбинации метотрексата и некоторых биологических БМАРП (адалимумаб, этанерцепт, цертолизумаб или инфликсимаб) уменьшают повреждение суставов (по данным рентгенограмм) в период немного более одного года у пациентов, ранее не принимавших метотрексат.

— Комбинации метотрексат + азатиоприн, метотрексат + циклоспорин и метотрексат + тоцилизумаб (8мг/кг), вероятно, увеличивают шансы прекращения приема лекарства из-за побочных эффектов.

Что такое ревматоидный артрит, метотрексат и другие болезнь-модифицирующие антиревматические препараты?

Если у вас ревматоидный артрит (РА), ваша иммунная система, которая обычно борется с инфекцией, атакует выстилку ваших суставов. Из-за этого ваши суставы становятся опухшими, тугоподвижными (скованными) и болезненными. В настоящее время РА считают неизлечимым заболеванием, поэтому лечение направлено на облегчение боли, уменьшение скованности и улучшение способности двигаться. К счастью, есть много лекарств, которые могут эффективно контролировать заболевание. Эти лекарства известны как болезнь-модифицирующие антиревматические препараты, или БМАРП. Метотрексат считают препаратом выбора среди БМАРП для большинства пациентов с РА, так как он хорошо работает у большинства пациентов и, как правило, хорошо переносится. Метотрексат может применяться самостоятельно (монотерапия) или в комбинации с другими БМАРП. Эти другие БМАРП включают в себя как препараты, доступные и используемые в течение многих лет (такие как сульфасалазин и гидроксихлорохин), так и более новые и дорогие (биологические БМАРП и тофацитиниб). Важно понимать, как все эти виды лечения соотносятся друг с другом в отношении пользы и побочных эффектов.

Что происходит у людей с ревматоидным артритом, которые принимают метотрексат в комбинации с другими болезнь-модифицирующими антиревматическими препаратами?

А) У пациентов, которые не принимали метотрексат ранее:

ACR 50 (число чувствительных или опухших суставов и другие исходы, такие как боль и нетрудоспособность)

— у 61 человека из 100, которые принимали метотрексат + сульфасалазин + гидроксихлорохин и у 56-67 человек из 100, которые принимали метотрексат + биологические БМАРП или тофацитиниб, было уменьшение выраженности симптомов ревматоидного артрита, по сравнению с 41 человеком из 100, которые принимали только метотрексат.

Рентгенограммы суставов:

— У пациентов, которые принимали метотрексат в комбинации с адалимумабом, этанерцептом, цертолизумабом или инфликсимабом, было небольшое замедление прогрессирования повреждения суставов (по шкале Шарпа/ван дер Хейде) в течение одного года, по сравнению с пероральным метотрексатом, однако примерный объем повреждений даже при пероральном приеме метотрексата был очень небольшим (увеличение на 2.6 пункта).

Прекращение лечения из-за побочных эффектов

— 36 человек из 100, которые принимали метотрексат + азатиоприн, вынуждены были прекратить лечение из-за побочных эффектов, по сравнению с 8 людьми из 100, которые принимали только метотрексат.

Б) У пациентов, которые принимали

метотрексат ранее:

ACR 50 (число чувствительных или опухших суставов и другие исходы, такие как боль и нетрудоспособность)

— у 61 человека из 100, которые принимали метотрексат + сульфасалазин + гидроксихлорохин и у 27-64 человек из 100, которые принимали метотрексат + биологические БМАРП или тофацитиниб, было уменьшение выраженности симптомов ревматоидного артрита, по сравнению с 13 людьми из 100, которые принимали только метотрексат.

Рентгенограммы суставов:

— Ни одна из схем лечения не привела к значимому снижению объема повреждений суставов, оцениваемого по рентгенограммам, в течение одного года.

Прекращение лечения из-за побочных эффектов

— 21 человек из 100, которые принимали метотрексат + циклоспорин и 12 человек из 100, которые принимали метотрексат + тоцилизумаб (8 мг/кг), были вынуждены прекратить лечение из-за побочных эффектов, по сравнению с 7 людьми из 100, которые принимали только метотрексат.

Синарта: инструкция, цена, аналоги | порошок для орального раствора Фармак

фармакодинамика. Активный ингредиент — соль аминомоносахарида глюкозамина сульфата, который содержится в человеческом организме и используется вместе с сульфатами для биосинтеза гиалуроновой кислоты синовиальной жидкости и гликозаминогликанов основной субстанции суставного хряща.

Механизм действия глюкозамина сульфата — стимуляция синтеза гликозаминогликанов и, соответственно, суставных протеогликанов. Кроме того, глюкозамин обладает противовоспалительными свойствами, замедляет процессы деградации суставного хряща главным образом за счет его метаболической активности, способности угнетать активность интерлейкина-1 (ИЛ-1), что, с одной стороны, способствует действию на симптомы остеоартрита, а с другой — задержке структурных нарушений суставов, о чем свидетельствуют данные долгосрочных клинических исследований.

Эффективность глюкозамина сульфата в отношении остеоартрита очевидна уже через 2–3 нед от начала лечения.

Результаты клинических исследований ежедневного беспрерывного лечения в течение 3 лет свидетельствуют о прогрессивном повышении его эффективности, принимая во внимание симптомы и замедление структурного повреждения суставов, что подтверждается с помощью рентгенологического исследования.

Глюкозамина сульфат продемонстрировал хорошую переносимость. Какого-либо существенного влияния глюкозамина сульфата на сердечно-сосудистую, дыхательную, вегетативную или ЦНС не выявлено.

Фармакокинетика. 90% дозы глюкозамина сульфата быстро и полностью всасывается из ЖКТ, проходит через биологические барьеры и проникает в ткани, преимущественно суставного хряща. Биодоступность — 26%. T½ — 68 ч.

лечение симптомов остеоартрита, то есть боли и функционального ограничения.

взрослые пациенты и пациенты пожилого возраста: содержимое 1 саше, эквивалентное 1500 мг (1,5 г) глюкозамина сульфата, растворить в стакане воды и принимать 1 раз в сутки, желательно во время еды.

Курс лечения — 4–12 нед или дольше (при необходимости).

По назначению врача лечение можно повторять 2–3 раза в год с интервалом в 2 мес, а также при рецидиве заболевания.

  • повышенная чувствительность к глюкозамину или какому-либо из вспомогательных веществ;
  • нарушение функций печени и почек в стадии декомпенсации, склонность к кровотечениям;
  • порошок для орального р-ра содержит аспартам и поэтому противопоказан пациентам с фенилкетонурией;
  • препарат Синарта нельзя назначать пациентам с аллергическими реакциями на моллюсков, поскольку действующее вещество получено из моллюсков;
  • период беременности и кормления грудью;
  • возраст до 18 лет.

со стороны пищеварительной системы: боль в животе, метеоризм, диспепсия, диарея, запор, тошнота;

со стороны нервной системы: головная боль, сонливость, утомляемость, головокружение;

со стороны иммунной системы: аллергические реакции;

со стороны органа зрения: расстройства зрения;

со стороны кожи и ее структур: эритема, зуд, сыпь, ангионевротический отек, крапивница, выпадение волос.

у больных БА препарат следует применять с осторожностью, поскольку такие пациенты могут быть более склонными к развитию аллергических реакций на глюкозамин с возможным обострением симптомов их заболевания.

Порошок для орального применения содержит сорбит. Пациентам, имеющим редкую наследственную непереносимость фруктозы, эту препарат в этой форме выпуска применять не рекомендуется.

1 саше содержит 6,6 ммоль (151 мг) натрия. Это следует принимать во внимание пациентам, которые придерживаются диеты с контролируемым содержанием натрия.

В начале лечения больным сахарным диабетом целесообразно проводить контроль уровня глюкозы в крови.

Применять только под наблюдением врача у пациентов с нарушениями функций печени и почек, с тромбофлебитами.

Применение в период беременности и кормления грудью. Данные о применении препарата в период беременности или кормления грудью отсутствуют, поэтому применение препарата противопоказано у этой категории пациентов.

Дети. Не применять у детей, поскольку безопасность и эффективность препарата у таких пациентов не установлены.

Способность влиять на скорость реакции при управлении транспортными средствами или другими механизмами. Исследования влияния препарата на способность управлять транспортными средствами и другими механизмами не проводились. Следует быть осторожными при управлении транспортными средствами и выполнении работ, требующих внимания. В случае появления сонливости, утомляемости, головокружения или нарушений зрения управление транспортными средствами и работа с другими механизмами запрещены.

было отмечено усиление действия кумариновых антикоагулянтов. В связи с этим таким пациентам целесообразно проводить контроль параметров коагуляции. Возможно усиление желудочно-кишечного всасывания тетрациклинов. Препарат совместим с НПВП и ГКС.

случаи передозировки не отмечались. Основываясь на исследованиях острой и хронической токсичности у животных, симптомы токсичности вряд ли возникнут даже в дозах, превышающих терапевтическую дозу в 200 раз. Однако при передозировке возможно увеличение выраженности побочных реакций, поэтому стоит провести симптоматическое лечение, направленное на восстановление водно-электролитного баланса.

при температуре не выше 25 °C.

Дата добавления: 29.10.2021 г.

Совместимость пикамилона и алкоголя: doc_serg — LiveJournal

Пикамилон и алкоголь совместимость

Пикамилон и алкоголь, по сути, вещества разного действия. Мало того, Пикамилон используют для лечения алкогольного поражения головного мозга. Совместное применение средства с этиловым спиртом может привести к непредсказуемым последствиям. 

Свойства препарата

Основным действующим веществом Пикамилона является соединение двух органических кислот. Никотиновая кислота расширяет сосуды, гамма-аминомасляная – представляет собой медиатор центральной нервной системы. Пикамилон обладает эффектами обеих кислот:

· расширяет кровеносные сосуды;

· снижает свёртываемость крови;

· ускоряет обменные процессы;

· способствует улучшению питания коры больших полушарий; 

· утилизирует метаболиты в тканях головного мозга;

· проявляет противосудорожную активность;

· расслабляет сфинктер мочевого пузыря.

Пикамилон оказывает ноотропное и транквилизирующее действие. Период полувыведения составляет 1 час. Составные элементы препарата проникают через гематоэнцефалический барьер. Пикамилон выводится почками, практически в неизменённом виде. Применение средства противопоказано во время беременности и кормления ребёнка грудью.

Инструкция по применению

Средство применяется для восстановления и улучшения мозгового кровообращения после инсульта. Применяется для снятия симптомов алкогольной абстиненции. Попадает в ткани головного мозга – одним из побочных эффектов являются галлюцинации. Курс лечения при алкоголизме составляет от одной до семи недель. При органических поражениях мозга приём Пикамилона продолжается до клинического улучшения.

Как алкоголь влияет на действие препарата

Алкоголь также как и Пикамилон проникает через гематоэнцефалический барьер. При одновременном нахождении в крови, никотиновая кислота расширяет сосуды головного мозга, гамма-аминомасляная кислота ускоряет прохождение этанола через стенки сосудов. Пикамилон с алкоголем приводит к быстрому опьянению. Кроме того, в несколько усиливаются побочные эффекты препарата. Стремительное расширении сосудов приводит к резкому падению артериального давления, что приводит к развитию сосудистого шока – коллапса.  

Алкоголь усиливает проникновение гамма-аминомасляной кислоты в ткани головного мозга. Влияние тормозного медиатора на рецепторы зрительного бугра приводят к возникновению слуховых, обонятельных и зрительных галлюцинаций. 

Учитывая период полувыведения Пикамилона и время выведения алкоголя из крови, пить лекарство можно не раньше, чем через 72 часа после приема спиртного.

Последствия одновременного приема

Человек, принявший спиртное одновременно с Пикамилоном, не всегда быстрее засыпает, чаще всего он становится раздражительным, обеспокоенным. Лицо покрывается красными пятнами, выделяется обильный, липкий пот. Речь людей, находившихся рядом, воспринимается неадекватно. Кажется, что собутыльники что-то затевают. Приняв алкоголь совместно с Пикамилоном, можно услышать и увидеть то, чего никогда не было. Память на время алкогольного опьянения выпадает. Совместимость Пикамилона и алкоголя в такой ситуации заключается во взаимной поддержке действия, направленного на интоксикацию головного мозга.  

Возможно появление болей за грудиной, отдающих в левую руку. Боль в сердце усугубляет тревожность. Появляется страх смерти. Развивается сильное головокружение – перед глазами появляются плавающие изображения, вздрагивает земля под ногами. Происходящее перестаёт восприниматься реальностью, человек видит устрашающие галлюцинации, которые приходят уже во время опьянения, задолго до классической картины алкогольного делирия.

Дополнительным эффектом гамма-аминомасляной кислоты является расслабление мочевого пузыря и раскрытие сфинктера уретры. Безо всяких позывов начинается процесс мочеиспускания до полного опорожнения мочевого пузыря. Это может случиться в любом положении тела, независимо от того, чем занимается в это время человек. Конфуз может приключиться во время движения по улице, поездки в общественном транспорте, выступлении на праздничном представлении или на трибуне во время митинга.  Для этого эффекта вовсе нет необходимости находиться в состоянии глубокого опьянения. Достаточная доза для взаимного эффекта составляет несколько граммов любого алкогольного напитка.

Отзывы о совместимости 

Семенчук Олег, город Ноябрьск: В течение двух недель принимал Пикамилон перед экзаменами, чтобы лучше запомнить учебный материал. Сдал нормально, а потом решили это дело отметить. Выпили, в общем-то, немного, но как добрался до дому, до сих пор вспомнить не могу.

Галина Сурова, город Нерюнгри: Выпила пивка после укола Пикамилона, протрясло всю как при климаксе. Теперь боюсь, мне ещё 17 лет. Мало ли какое взаимодействие у этого лекарства с алкоголем. Зареклась с той поры пить только безалкогольное пиво, в скромных количествах. 

Облученная глубокозамороженная ксеногенная ткань мениска регенерировала весь мениск с хондропротекцией

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с «Руководством по уходу и использованию лабораторных животных», опубликованным National Academy Press (публикация NIH No. пересмотрено в 1996 г.) и одобрено Комитетом по уходу и использованию животных Пекинского университета.

Сбор и подготовка ксеногенных тканей менисков

10 крупных белых свиней были получены в ходе других неродственных исследований в течение 24 часов после умерщвления животных, и их мениски были удалены для использования в качестве источника ксенотрансплантатов.Мениск свиньи промывали фосфатно-солевым буфером (PBS, Sigma Diagnostics, Сент-Луис, Миссури) для удаления избытка крови, а внутренней трети ткани мениска придавали форму клиновидных полулунных дисков с использованием удаленного медиального мениска кролика. как шаблон. Мениски аллотрансплантата также были взяты из группы ксенотрансплантатов после тотальной медиальной менискэктомии. Затем сформированные ксеногенные и аллогенные ткани мениска упаковывали отдельно, обрабатывали гамма-облучением 25 k Grey и глубоко замораживали (–80 °C) в течение 6–14 дней.

In vitro Оценка ксеногенных тканей мениска
Световая микроскопия

Обработанные ксеногенные ткани мениска фиксировали в 10% (об. /об.) нейтральном забуференном формалине (Sigma Diagnostics, Сент-Луис, Миссури) и затем обезвоживали в спирте и заливают парафином. Были вырезаны срезы толщиной пять микрометров, а затем окрашены H&E и TB (в качестве метки для протеогликанов). Кроме того, срезы обрабатывали с помощью процедуры IHC, маркируя Col I и II, как описано выше 23,24 .

Сканирующая электронная микроскопия

Образцы фиксировали в растворе 1% (масса/объем) четырехокиси осмия и 1,5% (масса/объем) ферроцианида калия в течение 3 часов. Срезы промывали в PBS с pH 7,2, обезвоживали в этаноле возрастающей концентрации и подвергали сушке до критической точки в CO 2 . Высушенные срезы устанавливали на стандартные штифты, покрывали золотом в устройстве для нанесения покрытий методом напыления, а затем наблюдали под микроскопом СЭМ (SEM100-CX II, Япония).

Оценка ксеногенных тканей мениска in vivo
Дизайн исследования

20 половозрелых самцов новозеландских белых кроликов массой 2. 0 и 2,5 кг были включены в это исследование. Всем кроликам была выполнена тотальная медиальная менискэктомия правого колена. Чтобы обеспечить единый временной интервал и избежать вторичной операции, все аллотрансплантаты были взяты из несвязанного исследования с той же процедурой лечения, что и ксенотрансплантат. Как обработанный аллотрансплантат, так и ксенотрансплантат были подготовлены до операции и трансплантированы сразу после менискэктомии. Десять правых коленей получили обработанные ксеногенные ткани мениска (группа Xeno) и 10 других аллотрансплантатов мениска (группа Allo).Левые колени группы Алло подверглись тотальной медиальной менискэктомии без имплантации трансплантата (группа Мени). В качестве контроля левые колени группы Xeno подверглись ложной операции, включающей обнажение медиального сустава и близкого слоя (группа фиктивного). Всех кроликов умерщвляли через 1 год после операции.

Хирургические процедуры

В этом исследовании не использовались иммунодепрессанты. Внутримышечно пенициллин (400 тыс. ЕД) вводили перед операцией в качестве антибиотикопрофилактики.Кроликов анестезировали внутривенным уретаном (1 мкг/кг). Хирургическая процедура была выполнена, как сообщалось ранее 24 . Вкратце, доступ к правому колену осуществлялся через медиальный парапателлярный разрез. Медиальный мениск резко резецировали по периферии и отделяли от их переднего и заднего соединения. Старались не повредить медиальную коллатеральную связку, которая была важна для послеоперационной стабильности коленных суставов. Обработанную ксеногенную ткань мениска или аллотрансплантат мениска размораживали путем погружения в стерильный физиологический раствор, а затем подшивали к прилегающей синовиальной оболочке нерассасывающимися швами 5-0 (Ethicon, Johnson & Johnson, Amersfoort, Нидерланды).Техника экстракапсулярного завязывания заднего рога использовалась. Передний и задний рога трансплантата были повторно прикреплены к соответствующим связочным структурам. Капсулу, периартикулярные ткани и кожу зашивали швами Vicryl 3-0 (Ethicon, Johnson & Johnson). В группе Meni выполнялась только тотальная резекция медиального мениска. В симуляционной группе операция проводилась на медиальном отделе с использованием того же доступа, который требуется для процедуры менискэктомии без операции на мениске.После операции животным сразу разрешали двигательную и грузоподъемную деятельность и никоим образом не ограничивали. Антибиотикопрофилактику продолжали в течение 3 дней.

Оценка исходного иммунологического отторжения

На 2-й, 4-й и 6-й неделе послеоперационного периода у кроликов каждой группы брали по 1 мл сыворотки крови. Между тем, 1 мл PBS инфильтрировали в трансплантированный коленный сустав, а затем экстрагировали в виде разбавления синовиальной жидкости. Как сыворотку крови, так и разведение синовиальной жидкости обрабатывали с помощью программы вестерн-блоттинга для обнаружения кроличьего антитела против свиньи.

Измельченную ткань мениска свиньи лизировали в буфере в течение 30 мин. Образцы лизата разделяли на гелях SDS-PAGE 12% (v/v). Для вестерн-блоттинга разделенные белковые полосы подвергали электроблотингу на нитроцеллюлозные мембраны при постоянном токе 250 мА в трансбуфере (50 мМ Трис, pH 8,0, содержащий 0,192 М глицина и 20% (об./об.) метанола), используя транс-блот-ячейка Bio-Rad. Полоски инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре в блокирующем буфере (TBS, содержащем 5% (вес/объем) обезжиренного молока), а затем инкубировали в течение ночи при 4°C при постоянном перемешивании в разведении сыворотки 1:40 и разведении синовиальной жидкости. жидкость в блокирующем буфере.После 3 промывок TBS, содержащим 0,05% (об./об.) Tween 20, полоски инкубировали в течение 1 часа с соответствующими антииммуноглобулиновыми реагентами, конъюгированными с пероксидазой хрена, и визуализировали комплексы антиген-антитело с использованием системы обнаружения ECL, как рекомендовано производителем (Applygen Technologies Inc., Пекин, Китай). Данные записывали с помощью Bio-Rad GelDoc2000.

Оценка мениска

Общая оценка

Суставы были рассечены, бедренная кость отделена от большеберцовой кости, а мениск оставлен прикрепленным к плато большеберцовой кости. Были сделаны фотографии (Nikon 4600, Nikon Photo Products Inc, Токио, Япония) плато большеберцовой кости и обнаженных мыщелков бедра. Мениски были грубо оценены по интеграции, положению имплантата, положению рога, форме, разрывам, поверхности, размеру, ткани и реакции синовиальной оболочки 25 . Каждый параметр оценивался от 1 до 3 в зависимости от положения имплантатов.

Гистологическое исследование

Мениски были отделены от суставов и обработаны с помощью вышеупомянутой стандартной процедуры.Затем нарезали срезы толщиной пять микрометров, а затем окрашивали H&E, TB и Col II. Кроме того, срезы обрабатывали PR-окрашиванием для наблюдения за коллагеном типа I и III. Мениск разрезали, чтобы получить блоки, демонстрирующие их клиновидный профиль, которые были разделены на наружную, промежуточную и внутреннюю области регенерированного мениска на гистологических срезах (рис. 10А). Срезы оценивали в соответствии с системой оценки гистологии мениска 16 . Количество интегрированных клеток и метахромазию ТБ в каждой зоне полуколичественно оценивали отдельно.Число клеток: 0-нет врастания клеток, 1-очень малое количество клеток врастает, 2-умеренное количество клеток врастает, 3-большое количество клеток врастает, 4-нормальное количество клеток растет. Туберкулезная метахромазия: 0-нет, 1-легкая, 2-явная. Все разделы были оценены 3 опытными исследователями, и в качестве окончательных результатов был получен средний балл.

Рисунок 10

Регионарное разделение тканей мениска и остеохондральных образцов. Мениск был разделен на наружную, промежуточную и внутреннюю области ( A ).Медиальные ФК были равномерно разделены на переднюю (ФК-А1/3), среднюю (ФК-М1/3) и заднюю (ФК-Р1/3) третьи области ( В ). Медиальный TP был разделен на области, несущие нагрузку (WB), и области, покрытые мениском (MC) ( C ).

Оценка ультраструктуры

Мениски группы Allo и группы Xeno и нормальная ткань кролика группы Sham обрабатывались с помощью той же процедуры СЭМ, как указано выше.

Оценка биомеханических свойств

Образцы для растяжения и сжатия были разрезаны на прямоугольные формы.Образцы для испытаний на растяжение имели размеры около 3 × 6 × 1 мм 3 , а образцы на сжатие имели размеры около 2 × 2 × 1 мм 3 . Биомеханические свойства образцов проверяли на испытательной машине (AG-IS, Shimadzu, Япония) с нагрузкой 50 Н 23 . Рабочая температура составляет около 23 °C, и образцы для испытаний поддерживали гидратированными с использованием 0,9% (масса/объем) раствора NaCl. Для испытания на растяжение ткань предварительно кондиционировали до максимального смещения 0,5 мм при скорости смещения 0.5 мм/мин за 8 циклов. Образец был испытан до полного разрушения со скоростью 0,5 мм/мин 26 . Для испытания на сжатие ткань нагружали со скоростью смещения 0,1 мм/мин с максимальной силой 10 Н в течение 8 циклов. Модуль упругости был проанализирован из линейной части кривой напряжения-деформации, и использовалась только дата 5 циклов после 3 циклов предварительной обработки 27 .

Оценка хондропротекции

Три исследователя, которые не были осведомлены об экспериментальных группах, независимо друг от друга оценили макроскопически хрящ бедренной и большеберцовой костей в соответствии с критериями классификации повреждений хряща ICRS 28 .Был проанализирован хрящ медиального мыщелка бедренной кости и плато большеберцовой кости, а медиальное плато большеберцовой кости было разделено на области WB и MC (рис. 10C). Каждый регион оценивался один раз одним исследователем. Затем для окончательной оценки брался средний балл исследователей.

Образцы костно-хрящевой ткани декальцинировали в 10% (вес/объем) ЭДТА (Titriplex III, Merck, Дармштадт, Германия) в течение 3 недель. Когда декальцинация была завершена, костно-хрящевые образцы были рассечены в коронарной плоскости в середине плато большеберцовой кости в аксиальной плоскости в середине медиального мыщелка бедренной кости (рис.10В,С). Гистологические срезы медиальной ФК были равномерно разделены на переднюю (ФК-А1/3), среднюю (ФК-М1/3) и заднюю (ФК-Р1/3) третьи области. Срезы медиальных плато большеберцовой кости были разделены на области WB и MC. Каждая область гистологических срезов оценивалась по шкале Манкина для дегенерации гиалинового хряща 29 . Все гистологические срезы были оценены тремя лечащими патологоанатомами, которые не знали о проведенных процедурах. Для окончательной оценки использовали средний балл обоих исследователей.

Статистический анализ

Непараметрический критерий использовался для данных асимметрии, неизвестных данных распределения или данных с неоднородностью дисперсии. Критерий суммы рангов Манна-Уитни использовали для сравнения макроскопических и гистологических показателей между различными группами и регионами. Для механической оценки использовали Т-тест. Все статистические анализы были выполнены с помощью программы SPSS 11.5. Статистическая значимость была установлена ​​на уровне P  < 0,05.

Синтетические искусственные стволовые клетки (SASC): изменение парадигмы клеточной терапии в регенеративной инженерии

Значение

различные клетки и обеспечивают более мощный регенеративный эффект для тканей-мишеней. После проверки системы SASC на модели остеоартрита мы продемонстрировали, что факторы, объединенные специально для хондрогенеза, обладают мощным противовоспалительным и хондропротекторным действием. В этой статье также демонстрируется способность SASC in vivo ослаблять истощение протеогликанов во внеклеточном матриксе хряща, а также улучшать биомеханические свойства полученного хряща. Мы сообщаем о первом из многих применений системы SASC, которая обеспечивает многообещающий шаг к клинической трансляции минимально иммуногенной стволовой клетки со многими коммерческими преимуществами по сравнению с ее биологическим аналогом.

Abstract

Стволовые клетки представляют большой интерес для регенерации тканей благодаря их способности модулировать локальное микроокружение путем секреции биоактивных факторов (собирательно, секретом). Однако доставка секретома через кондиционированные среды по-прежнему требует длительной изоляции и поддержания клеток, а также может содержать факторы, антагонистические направленной регенерации тканей. Поэтому мы разработали систему синтетических искусственных стволовых клеток (SASC), которая имитирует паракринный эффект секретома стволовых клеток и обеспечивает адаптируемость композиции для целенаправленной регенерации тканей.Мы сообщаем о первом из многих применений разработанной нами системы SASC для лечения остеоартрита (ОА). Выбрав факторы роста, важные для хондрогенеза, и инкапсулировав соответствующие рекомбинантные белки в поли(молочно-когликолевую кислоту) 85:15 (PLGA), мы изготовили систему SASC. Мы сравнили противовоспалительное и хондропротекторное действие SASC с действием стволовых клеток жировой ткани (ADSC) с использованием моделей остеоартрита, индуцированного интерлейкином 1B in vitro, и in vivo, индуцированного коллагеназой, на грызунах.Мы разработали SASC как инъекционную терапию с контролируемым высвобождением сформулированного секретома. In vitro SASC продемонстрировал значительный противовоспалительный и хондропротекторный эффект, о чем свидетельствует активация SOX9 и снижение генов оксида азота, ADAMTS5 и PRG4 по сравнению с ADSC. In vivo лечение SASC и ADSC значительно ослабляло дегенерацию хряща и улучшало биомеханические свойства суставного хряща по сравнению с контролем ОА. Эта система SASC демонстрирует возможность разработки полностью синтетического, адаптируемого секретома стволовых клеток, что усиливает возможность разработки новой терапевтической стратегии, обеспечивающей лучший контроль над целевыми приложениями тканевой инженерии.

Наука о стволовых клетках стала важным компонентом регенеративной инженерии и может революционизировать результаты лечения после достижения клинического применения (1). Регенеративная инженерия использует трансдисциплинарный подход и определяется конвергенцией передовых материаловедения, наук о стволовых клетках, физики, биологии развития и клинического применения к регенеративным сложным тканям и органам (2, 3). Мезенхимальные стволовые клетки, которые представляют собой мультипотентный тип клеток, обладают способностью к самообновлению и дифференцировке в различные клоны, такие как адипоциты, кости, хрящи, мышцы, кожа и сухожилия, и использовались в доклинических исследованиях для регенерации этих соответствующих и других клеток. соединительные ткани (4, 5).В дополнение к своей способности к дифференцировке стволовые клетки также обладают способностью секретировать биоактивные факторы во время дифференцировки, что будет способствовать дальнейшему восстановлению и регенерации (6, 7). важна как стратегия использования регенеративного потенциала тканей организма (8).

Терапия стволовыми клетками направлена ​​на доставку клеток для облегчения восстановления и регенерации тканей за счет сочетания противовоспалительных, иммуномодулирующих свойств и мультипотентной дифференцировочной способности.Однако для того, чтобы их можно было использовать в клинических условиях, они должны быть выделены из тканей человека и требуют постоянного роста и пассирования в культуральных средах in vitro. Кроме того, исследования показали, что клетки подвержены риску самопроизвольного изменения поведения и свойств во время культивирования (9). Загрязнение также представляет собой риск из-за неправильной техники или нестерильных условий. Другие ограничения и проблемы, которые следует учитывать при разработке терапии стволовыми клетками, включают иммунную совместимость и реакции отторжения, образование злокачественных опухолей из-за неконтролируемой пролиферации и передачу инфекционных процессов (10, 11).

Следуя этим опасениям и сообщениям о незначительных уровнях приживления стволовых клеток в пораженной ткани (12), более поздние исследования подчеркивают тот факт, что набор паракринных факторов, секретируемых стволовыми клетками (известный как секретом), является основным фактором терапевтические эффекты. Недавно были рассмотрены бесклеточные альтернативы, которые аналогичным образом используют паракринные факторы (13⇓⇓–16). Секретом был предложен в качестве бесклеточной альтернативы клеточной терапии для преодоления ограничений и рисков, связанных с терапией стволовыми клетками.Секретом определяется как набор биологических факторов и молекул, которые секретируются во внеклеточный матрикс (ВКМ) и играют важную роль в широком спектре биологических процессов, включая гомеостаз, иммуномодуляцию, воспаление, ангиогенез и организацию ВКМ (17). . Функции секретома можно разделить на четыре основные функции: ангиогенез, антиапоптоз, антифиброз и противовоспалительное действие (17). Различные секретируемые белки составляют клеточный секретом и могут включать факторы роста, ангиогенные факторы, цитокины, хемокины и внеклеточные везикулы для транспорта липидов и белков.Состав секретома очень динамичен и основан на типе клеток и микроокружении, в котором он будет использоваться, что обеспечивает большую гибкость дизайна и универсальность для использования в широком спектре тканей (17, 18). Было показано, что паракринный эффект секретома очень эффективен при регенерации различных тканей (12) с рядом логистических преимуществ для использования в клинических условиях, таких как более длительный срок хранения, доступность и масштабируемость (19, 20).

Несмотря на то, что секретом обладает многими преимуществами по сравнению с клеточной терапией, он разделяет многие схожие проблемы трансляции, включая трудоемкое обслуживание клеток для получения кондиционированных сред и композиционную чувствительность к клеточному микроокружению. Стволовые клетки секретируют смесь биологических факторов контролируемым, последовательным и комбинаторным образом, проявляя паракринный эффект, который, как недавно было показано, является ключевым фактором регенеративного процесса. На сегодняшний день не проводилось исследований, в которых пытались бы имитировать паракринные функции стволовых клеток. Хотя лечение одним фактором роста может быть неэффективным для полной регенерации, необходима контролируемая доставка смеси факторов, чтобы действительно имитировать клеточные паракринные функции.Поэтому мы разработали синтетические искусственные стволовые клетки (SASC). Благодаря дополнительной возможности адаптировать рецептуру для тканей-мишеней, SASC может использоваться в различных системах, оказывая мощное иммуномодулирующее и регенеративное действие.

В настоящем исследовании мы стремились разработать первую систему SASC для замедления прогрессирования остеоартрита (ОА) путем адаптации факторов, содержащихся в секретоме стромальных стволовых клеток, которые обладают специфическим анаболическим, хондропротекторным и/или противовоспалительным действием в суставе (21). ⇓–23).Катагири и соавт. (23) обнаружили, что инсулиноподобный фактор роста (IGF) и трансформирующий фактор роста (TGF)-β1 являются важными хондрогенными факторами в кондиционированных средах стволовых клеток костного мозга. Другие также сообщили о важности фактора роста фибробластов (FGF)-18 в хондрогенезе (в частности, передачи сигналов через анаболический рецептор FGFR3) (24⇓–26) и гормона роста человека (HGH) (фактор пролиферации, который также сигнализирует для IGF1) ( 27, 28). В качестве экспериментальной композиции SASC IGF1, TGF-β1, FGF-18 и HGH объединяли в концентрациях, аналогичных кондиционированным средам, и доставляли с использованием матрицы из поли(молочной-когликолевой кислоты) (PLGA) 85:15.Противовоспалительное и хондропротекторное действие SASC оценивали по сравнению с текущим стандартом лечения стволовыми клетками жировой ткани (ADSC) (5) как в моделях ОА in vitro, так и in vivo (рис. 1). Кроме того, биомеханические результаты лечения SASC также оценивались in vivo.

Рис. 1.

Графическое обобщение моделей совместного культивирования in vitro ( A ) и индуцированных коллагеназой грызунов in vivo ( B ). Фигурка сделана в биорендере.

Результаты

Изготовление и характеристика системы SASC.

Факторы роста, FGF-18, IGF1, HGH и TGF-β1 загружали по отдельности в матрицу PLGA (10 нг фактора роста/мг PLGA) с использованием модифицированного метода двойной эмульсии (29, 30). Сканирующую электронную микроскопию (СЭМ) использовали для визуализации микросфер размером от 10 до 20 мкм, собранных путем просеивания; 1000-кратное увеличение использовалось, чтобы увидеть форму и размер, а 10000-кратное увеличение использовалось, чтобы увидеть гладкость поверхности каждой партии микросфер (рис. 2). Микросферы всех партий, независимо от загруженного фактора роста, сохраняли гладкую поверхность и одинаковое распределение по размерам, в то время как усадка и морщинистость поверхности, наблюдаемые на изображениях с большим увеличением, были артефактом электронного луча. Эффективность загрузки IGF1 составила 88,95 ± 9,66% (табл. 1). Высвобождение наблюдали разделённым на три фазы: начальный взрыв с 30% загруженным на поверхность белком, высвобождаемым в течение 1 дня, фаза, контролируемая диффузией, в течение следующих 10 дней, и, наконец, контролируемое равновесием высвобождение до тех пор, пока к 28-му дню не высвобождается 90% белка. Рис. 3 A ). Было обнаружено, что эффективность загрузки HGH и TGF-β1 низкая из-за большого размера, поэтому в качестве белка-носителя использовали бычий сывороточный альбумин (BSA) для повышения соответствующей эффективности загрузки.HGH с 1% BSA достиг 69,42 ± 12,48% загрузки (таблица 1). Пятьдесят процентов загруженного гормона роста высвобождалось в течение первого дня и стабилизировалось на этом уровне в течение оставшейся части 28-дневного периода высвобождения (рис. 3 B ). TGF-β1 был загружен с эффективностью 40,68 ± 4,04% при использовании 3% BSA (таблица 1). Высвобождение этой большой гидрофобной молекулы показало минимальный взрыв и гораздо более медленный линейный профиль высвобождения, при котором около 50% высвобождалось в течение 28 дней (рис. 3 C ).

Рис. 2. СЭМ-изображения

микросфер PLGA с PBS ( A ), микросфер с FGF-18 ( B ), микросфер с IGF1 ( C ), микросфер с TGF-β1 ( D ) и микросферы, содержащие HGH ( E ).Изображения большего размера были получены с увеличением в 1000 раз (масштабная линейка, 10 мкм), а изображения меньшего размера в правом нижнем углу каждой панели были сняты с увеличением в 10000 раз (масштабная линейка, 1 мкм).

Таблица 1.

Эффективность загрузки микросферами IGF1, HGH и TGF-β1 ( n = 4) -β1 ( C ) микросферы PLGA 85:15. n = 4 партии, измеренные в трех экземплярах.

Изучение противовоспалительного и хондропротекторного действия SASC.

Мы использовали систему совместного культивирования в качестве непрямой модели ОА in vitro (рис. 1 A ). Мы использовали здоровые хондроциты и хондроциты, обработанные провоспалительным цитокином интерлейкином (IL)-1β (выдающимся воспалительным маркером, продуцируемым на ранних стадиях ОА), в качестве соответствующих ложных и отрицательных контролей лечения. Остальные клетки были разделены на три группы: воспаленные хондроциты, обработанные ADSC, воспаленные хондроциты, обработанные бланком (частицы, нагруженные фосфатно-солевым буфером [PBS]), и воспаленные хондроциты, обработанные SASC.Приблизительная доза каждого фактора роста в группе SASC составляла 920 пг HGH и FGF-18, 1186 пг IGF1 и 550 пг TGF-β1.

Анализ оксида азота для оценки противовоспалительных свойств SASC.

Оксид азота (NO) экспрессируется при воспалительном процессе хондроцитов. Система совместного культивирования хондроцитов и ADSC in vitro использовалась для исследования продукции NO. В хондроцитах при обработке ИЛ-1β наблюдалось значительное увеличение продукции NO, что свидетельствует о воспалении хондроцитов.Добавление ADSC и пустой группы не снижало продукцию NO воспаленными хондроцитами. Однако добавление SASC показало значительно более низкую продукцию NO, что указывает на противовоспалительное свойство SASC (фиг. 4 A ).

Рис. 4.

SASC оказывает противовоспалительное и хондропротекторное действие, сходное с ADSC. SASC снижал NO с помощью анализа с реагентом Грисса ( A ), увеличивал ранний хондрогенный маркер SOX9 ( B ) и снижал экспрессию катаболического гена ADSMTS5 ( C ).SASC также снижал аутокринный воспалительный ответ PRG4 ( D ). ADSC были способны ослаблять воспалительную реакцию ADAMTS5, но не оказывали никакого влияния на SOX9, PRG4 или NO в 3-дневном окне лечения. * Р < 0,05; ** Р < 0,01; *** Р < 0,001; **** Р < 0,0001. Полная статистическая сводка представлена ​​в приложении SI , таблицы S1–S4.

Анализ экспрессии генов для оценки противовоспалительного и хондропротекторного действия.

Для исследования ингибирования катаболических ответов IL-1β с помощью SASC была проведена количественная ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) для определения экспрессии гена раннего хондрогенного фактора транскрипции SOX9, фермента, разрушающего матрикс, дезинтегрина и металлопротеиназы с мотивы тромбоспондина 5 (ADAMTS5), а также противовоспалительный фактор протеогликан 4 (PRG4), также известный как лубрицин. В группе, получавшей IL-1β, наблюдалась значительная активация ADAMTS5 (рис. 4, C ), тогда как для SOX9 наблюдалась значительная негативная регуляция (рис.4 B ) и PRG4 (рис. 4 D ) по сравнению со здоровыми хондроцитами. Было обнаружено, что ADSC только ослабляют повышенный уровень матричной РНК (мРНК) ADAMTS5 в течение 3-дневного периода лечения. SASC продемонстрировал значительную повышающую регуляцию SOX9 и ослабление повышенного уровня NO, PRG4 и мРНК ADAMTS5 (рис. 4 B D ), что указывает на значительный противовоспалительный и хондропротекторный эффект SASC и универсальность лечения SASC по сравнению к ADSC.

Оценка способности SASC к регенерации хряща in vivo.

Потенциал SASC в отношении ослабления вызванной ферментами дегенерации суставного хряща оценивали с использованием модели грызунов in vivo (31) (рис. 1 B ) с контралатеральным коленом, взятым в качестве здорового контроля. После индукции ОА мы разделили животных на четыре лечебные группы ( n = 11): контрольная группа ОА, получавшая физиологический раствор, крысы, которым вводили 1 миллион ADSC, суспендированных в физиологическом растворе, крысы, которым вводили 1 миллион пустых частиц в физиологическом растворе, и крысы, которым вводили 1 миллион частиц SASC, взвешенных в физиологическом растворе. Приблизительная доза каждого фактора роста в этой группе составляла 9,256 нг HGH и FGF-18, 11,86 нг IGF1 и 5,424 нг TGF-β1.

Отек суставов.

Прогрессирование воспаления, о чем свидетельствует крупный отек (рис. 5), было замедлено после первой обработки ADSC и SASC. После первой лечебной инъекции опухание суставов в контрольной группе ОА значительно прогрессировало на 28-й день, за 1 неделю до второй инъекции. В то время как инъекция чистых микросфер действительно оказывала какое-либо влияние на отек, отек суставов, которым вводили ADSC и SASC, был значительно ниже, чем в группе ОА.Интересно, что через 1 неделю после второй лечебной инъекции (42-й день) степень отека увеличилась во всех группах (рис. 5). В то время как группа, получавшая инъекцию SASC, по-прежнему имела меньший отек по сравнению с группами, получавшими OA и пустой группой, наблюдалось постоянное прогрессирование отека между второй лечебной инъекцией и концом исследования. Через две недели после второй инъекции опухоль как в группе ADSC, так и в группе с ОА была одинаковой; однако в течение последних 2 недель исследования отек в группе ADSC значительно снизился до уровня, аналогичного группе SASC.

Рис. 5.

Прогрессирование воспаления ипсилатерального сустава в течение 9-недельного периода лечения. Звездочка указывает начальную точку, когда ADSC и SASC демонстрируют меньшее набухание по сравнению с контрольными группами и группами OA.

Изучение влияния окрашивания сафранином О на ослабление ОА.

Фронтальные срезы, взятые из середины интактного сустава, окрашивали сафранином О для оценки площади дегенерированного хрящевого матрикса, вызванного фенотипом ОА (рис. 6). У контрольных животных с ОА наблюдалась потеря окрашивания протеогликана (рис.6 B ), а также поражения и эрозии на суставных поверхностях (33,75 ± 7,81% от общей площади дегенерации). Группы инъекций SASC- (рис. 6 E ) и ADSC- (рис. 6 C ) (10,03 ± 7,05% и 10,62 ± 7,33% соответственно) были сопоставимы со здоровым суставом (рис. 6 A ). (7,53 ± 2,84%), демонстрируя сильное окрашивание сафранином O, которое указывало на то, что лечение SASC и ADSC может значительно предотвратить потерю содержания протеогликанов в ECM хряща (рис. 6 F ).Кроме того, лечение пустой группы (рис. 6 D ) (30,61 ± 15,45%) не оказало никакого влияния на восстановление матрикса, демонстрируя более выраженные поражения и участки эрозии без признаков сохранения хрящевого матрикса. Это подтвердило, что консервирующий эффект SASC обусловлен контролируемым высвобождением синтетического секретома.

Рис. 6.

Фронтальные срезы здорового контроля ( A ), контроля OA ( B ), группы ADSC ( C ), пустой группы ( D ) и группы SASC ( E ) .Количественная оценка дегенеративных областей показывает, что SASC и ADSC ослабляют прогрессирование дегенеративного ОА ( F ). Стрелки указывают на области значительного истончения/дегенерации хряща. * Р < 0,05; ** Р < 0,01. n = 5. Полная статистическая сводка представлена ​​в Приложение SI , таблица S5.

Оценка биомеханических результатов методом наноиндентирования.

Были идентифицированы тепловые карты средней жесткости на каждой поверхности (рис. 7 и 8) и статистические различия жесткости поверхности между группами (рис.7 G и 8 G ). Хрящ ОА имел значительно более низкий модуль (голень: 0,96 ± 0,53 МПа; бедро: 1,70 ± 0,74 МПа) по сравнению с контралатеральным суставом (голень: 1,79 ± 0,61 МПа, бедро: 3,61 ± 1,56 МПа), взятым в качестве здорового контроля (рис. 7 A и B и 8 A и B ). Лечение с помощью ADSC (голень: 1,36 ± 0,66 МПа; бедро: 3,00 ± 1,88 МПа) и SASC (рис. 7 C и E и 8 C и E ) (голень: 1.41 ± 0,79 МПа; бедренная кость: 2,35 ± 1,37 МПа) привело к увеличению модуля, что свидетельствует о восстановлении жесткости хряща, хотя это восстановление не было похоже на контрольную группу здоровых людей, получавших любое лечение. Наконец, пустая группа (рис. 7 D и 8 D ) (большеберцовая кость: 1,05 ± 0,61 МПа; бедро: 1,68 ± 0,62 МПа) не оказала существенного влияния на модуль Юнга на любой поверхности.

Рис. 7.

Тепловая карта поверхности, изображающая модуль Юнга большеберцовой кости (мегапаскали) здоровых ( A ), OA ( B ), ADSC- ( C ), пустой- ( D ) и SASC- ( E ) лечение суставов (шкала F ) и сравнение модуля Юнга большеберцовой кости между группами ( G ).** Р < 0,01; *** Р < 0,0001. Полная статистическая сводка представлена ​​в приложении SI , таблица S6.

Рис. 8.

Тепловая карта поверхности, изображающая модуль Юнга бедренной кости (мегапаскали) здоровых ( A ), ОА ( B ), ADSC- ( C ), пустых ( D ) и SASC- ( E ) обработанные суставы (шкала в F ) и сравнение модуля Юнга бедренной кости между группами ( G ). * Р < 0,05; *** Р < 0.0001. Полная статистическая сводка представлена ​​в Приложение SI , таблица S7.

Обсуждение

Стволовые клетки нашли широкое применение в регенеративной инженерии благодаря их мультипотентной способности, а также способности продуцировать паракринные факторы, воздействующие на локальную микросреду. Однако чувствительность к изменениям в локальном микроокружении может привести к спонтанным изменениям клеточной функции и состава секретируемых факторов, что приводит к проблемам транслятивности.В этом исследовании мы разработали полностью синтетическую, адаптированную альтернативу стволовым клеткам, загрузив определенные факторы, обнаруженные в секретоме стволовых клеток, в матрицу PLGA. В качестве пилотной системы мы разработали и оценили систему SASC для ослабления ОА. Здесь для разработки системы SASC были выбраны IGF1, TGF-β1, HGH и FGF-18.

Сообщалось, что IGF1 оказывает анаболическое и противовоспалительное действие на хрящи и хондроциты и стимулирует синтез протеогликанов и коллагена, а также снижает скорость деградации матрикса (32, 33).TGF-β1 выполняет множество функций в развитии и поддержании целостности суставного хряща. Было показано, что он также стимулирует синтез внеклеточного матрикса за счет дифференцировки хондроцитов и ингибирования гипертрофии, а также снижает катаболизм матрикса за счет ослабления активности различных матриксных металлопротеаз (ММП), которые могут приводить к воспалению (34). В одном исследовании последовательное высвобождение низких доз TGF-β1 также оказывало аддитивное действие с IGF1 в стимулировании регенерации хряща в аналогичных каркасах на основе PLGA (35).Гормон роста координирует различные анаболические и катаболические реакции через пути JAK-STAT, ERK, P13K-Akt, а передача сигналов используется в качестве пролиферативного фактора, стимулирующего пролиферацию нативных стволовых клеток, а также передачу сигналов IGF1, обеспечивающих непрямой анаболический эффект (27, 28). ). Было показано, что FGF-18 путем селективного связывания с FGFR3 стимулирует внеклеточный матрикс в поврежденных хондроцитах и ​​увеличивает пролиферацию нативных хондроцитов и хондрогенез (24⇓–26).

Все эти факторы роста были загружены с использованием стандартизированного метода двойной эмульсии (W/O/W) с аналогичным выходом микросфер при среднем размере мезенхимальной стволовой клетки (от 10 до 20 мкм) (36) (рис.2) (около 70%). Наличие стандартизированного метода изготовления, при котором урожайность не зависит от загружаемого фактора, оказывается очень выгодным с точки зрения универсальности SASC, в котором разные факторы роста могут использоваться для разных применений. Мы успешно использовали один стандартизированный процесс для загрузки различных факторов при сохранении размера микросфер, что сводит к минимуму оптимизацию, необходимую для загрузки отдельных факторов роста в микросферы.

Мы обнаружили, что IGF1 (около 7 кДа) обладает высокой эффективностью загрузки в эти микросферы без необходимости в белке-носителе, а также почти полностью высвобождается из микросфер в течение 28 дней.Более крупные молекулы HGH и TGF-β1, имеющие около 20 и 40 кДа соответственно, требовали использования белка-носителя (BSA) для загрузки в микросферы, и хотя 60% каждого фактора высвобождалось из микросфер PLGA, профиль TGF-β1 был гораздо более линейным по сравнению со всплеском и последующим плато высвобождения гормона роста, что указывает на то, что больший размер и немного более гидрофобная природа TGF-β1 могли играть роль в препятствовании диффузии из микросферы. Хотя все эти факторы имели разную эффективность нагрузки, изображения СЭМ (рис.2) подтвердили, что физические характеристики микросфер не были затронуты, и, следовательно, эффективность нагрузки может быть функцией биофизических свойств загружаемого фактора. Поскольку FGF-18 (около 20 кДа) имеет такой же размер, как HGH, мы предположили, что он будет иметь аналогичные нагрузочные свойства, и использовали такое же количество белка-носителя.

В этом исследовании мы использовали ОА в качестве модели-мишени и разработали систему SASC, состоящую из факторов роста, которые способны стимулировать синтез внеклеточного матрикса, а также уменьшать воспаление, чтобы нарушить цикл воспаление/дегенерация.В остеоартритном суставе гомеостаз смещен в сторону катаболических процессов, при этом присутствие макрофагов M1 в синовиальной оболочке стимулируется провоспалительными цитокинами, такими как IL-1β и фактор некроза опухоли альфа (37, 38). Эта стимуляция поддерживает воспаление синовиальной оболочки за счет синтеза медиаторов воспаления, таких как ферменты, разрушающие матрикс, такие как ADAMTS5 и различные MMP. Затем эти ферменты диффундируют через синовиальную жидкость в хрящ и запускают порочный круг воспаления и дегенерации, характеризующийся гипертрофией и гипоцеллюлярностью хондроцитов (38, 39).

Исследование in vitro показало, что SASC способен ингибировать катаболические процессы в результате воспаления в хондроцитах. В нашем исследовании in vitro мы индуцировали воспаление в хондроцитах крыс с помощью IL-1β, которое очень похоже на воспалительный процесс хряща при ОА (40). Паракринные эффекты ADSC и SASC сравнивали в трансвеллальной системе совместного культивирования (рис. 1 A ). NO является воспалительным продуктом, образующимся посредством индуцируемого пути NOS (iNOS), который ингибирует синтез коллагена и протеогликанов и повышает активность протеолитических ферментов.Продукция NO в группе IL-1β увеличивалась при 20 нг/мл IL-1β. Обработка частицами SASC в течение 3 дней значительно снижала продукцию NO (рис. 4, ), что потенциально может быть связано с подавлением пути iNOS с высвобождением TGF-β1 (41). Обычно пораженные артритом хондроциты менее чувствительны к IGF1 из-за присутствия iNOS (42). Мы полагаем, что в нашей системе TGF-β1 снижал экспрессию iNOS, что дополнительно усиливало реакцию хондроцитов на анаболический IGF1, что приводило к подавлению нижестоящих воспалительных путей. Это привело к более сильному противовоспалительному эффекту SASC по сравнению с паракринными факторами, продуцируемыми ADSC, которые также могут включать широкий спектр факторов, индуцирующих iNOS (таких как фактор роста эндотелия сосудов).

В результате индукции воспаления IL-1β экспрессия основного хондрогенного фактора транскрипции SOX9 подавлялась, а агреканаза ADAMTS5 повышалась. SOX9 сигнализирует о раннем хондрогенезе, что приводит к продукции протеогликанов ECM, таких как коллаген II и аггрекан.Понижающая регуляция SOX9 с помощью IL-1β указывает на потерю ранних хондроцитов и указывает на то, что может возникнуть гипоцеллюлярность. Мощная повышающая регуляция SASC SOX9 (рис. 4 B ) может быть связана с наличием высокого уровня IGF1 и FGF-18, факторов, важных для пролиферации хондроцитов и продукции ECM (24⇓–26, 33, 42). Лубрицин или PRG4 служит как граничной смазкой, так и хондропротекторным средством (43). Предыдущие сообщения показали снижение концентрации лубрицина при ОА, вызванном пересечением передней крестообразной связки, у грызунов и людей, а также у людей с поздней стадией хронического ОА. Напротив, есть исследования, проведенные на овцах, собаках и лошадях, в которых наблюдалось увеличение PRG4 на моделях ОА, подчеркивая сложную и чувствительную аутокринную роль, которую PRG4 играет в модулировании прогрессирования ОА (43⇓⇓⇓⇓–48). Наблюдалось увеличение PRG4 при воспалении, вызванном IL-1β, что может указывать на регуляцию воспаления с отрицательной обратной связью. Интересно, что в дополнение к аналогичному противовоспалительному эффекту по сравнению с ADSC [снижение воспалительных эффектов ADAMTS5 (49, 50)], SASC был способен обращать эффекты воспаления на NO, SOX9 и PRG4 (рис.4 A D ). Таким образом, показано, что SASC способствует более сильному хондропротекторному эффекту в результате целевого состава факторов роста, используемых в этой композиции.

Модель остеоартрита, индуцированного коллагеназой, использовали для оценки хондропротекторного потенциала SASC in vivo. Эта модель была создана для изучения механизмов патогенеза ОА (31). Коллагеназа переваривает коллаген непосредственно из внеклеточного матрикса хряща, что приводит к сходным остеоартритным изменениям, таким как боль, изменения в синовиальной оболочке, ремоделирование субхондральной кости и дегенерация суставного хряща.

Доза каждого фактора роста в SASC была определена в соответствии с предыдущими исследованиями. Катагири и соавт. обнаружили, что состав среды, кондиционированной стволовыми клетками костного мозга, содержал 1368 ± 465 пг/мл IGF1 и 339,8 ± 14,4 пг/мл TGF-β1 (21⇓–23). Другие группы использовали более высокие дозы IGF1 при лечении ОА в диапазоне от 5 до 100 нг на моделях кроликов и до 100 мкг еженедельных инъекций на моделях крыс (51⇓–53). Аналоги гормона роста использовались для успешного лечения дефектов хряща в дозах от 25 до 250 мкг (54, 55) и FGF-18 в дозах 0.От 1 до 5 мкг (26, 56) на моделях кроликов.

Мы решили использовать более низкие дозы HGH и FGF-18 (9,256 нг каждого), чтобы скорректировать разницу в среднем размере между моделями кроликов, на которые ссылаются, и моделями крыс, используемыми в этом исследовании. Мы использовали дозы IGF1 и TGF-β1 (11,86 нг и 5,424 нг соответственно), аналогичные тем, которые были рассчитаны на основе кондиционированных кондиционированных сред, определенных Katagiri et al (22, 23). Мы также добавили пустые микросферы в эту композицию, чтобы смоделировать возможность добавления или удаления факторов, которые могут быть необходимы для лучшего подбора терапевтических результатов для различных тканей.В этом случае мы определили, что равные массовые доли сфер, загруженных фактором роста (20% по массе для каждой), можно комбинировать для доставки рассчитанных доз in vivo.

Предыдущие исследования продемонстрировали преимущества и положительные результаты сочетания одного или двух факторов (35, 57) в хондрогенезе, хотя до настоящего времени не проводилось исследований по разработке имитации паракринного эффекта стволовых клеток. Кроме того, за счет использования различных схем высвобождения факторов и эффективности загрузки SASC могут быть составлены с использованием различных весовых соотношений и адаптированы, чтобы стать уникальной синтетической клеточной терапией для других дегенеративных заболеваний или регенеративных применений.

Припухлость суставов — один из наиболее ярких симптомов ОА. Обычно это указывает на синовит, так как в синовиальной оболочке сустава может накапливаться ряд медиаторов воспаления, которые могут способствовать боли и дальнейшей дегенерации хряща при ОА (58).

Хотя воспалительная реакция на пустые частицы была сходной с группой ОА, как видно на рис. 5 и 6, мы полагаем, что этот ответ опосредуется коллагеназой, а не матриксом PLGA. Клиническое использование PLGA в качестве биосовместимого носителя для длительного высвобождения терапевтических средств было тщательно изучено в предыдущих исследованиях.Zhang и Huang наблюдали, как инъекция микросфер PLGA вызывала умеренную воспалительную реакцию через 1 день после инъекции, которая исчезала через 1 неделю (59). Другие клинические испытания также показали, что микросферы PLGA не оказывают вредного воздействия на хрящ или какие-либо аспекты структуры сустава в течение 24 недель (60). Поэтому мы не ожидаем, что пустые микросферы PLGA вызовут какую-либо дополнительную воспалительную реакцию. Кроме того, исследования показали, что воспалительная реакция зависит от размера микро/наночастиц, демонстрируя, что более мелкие молекулы (диаметром <5 мкм) интенсивно фагоцитируются макрофагами в эпителиальной синовиальной выстилке, что вызывает более сильную воспалительную реакцию в синовиальной ткани. (61⇓–63).Поскольку наши микросферы находились в диапазоне от 10 до 20 мкм (аналогично размеру мезенхимальных стволовых клеток), мы не ожидаем воспаления, опосредованного фагоцитозом.

На 28-й день после первой инъекции ADSC и SASC приводили к значительному снижению по сравнению с ОА и пустым контролем. Более выраженный отек наблюдался через 2 недели после второй обработки (на 49-й день) в обеих группах лечения. Хотя отек в группе ADSC уменьшился через 49 дней, отек в группе SASC продолжал постепенно увеличиваться (рис.5). Это различие между ADSC и SASC не было значительным, и оба они оставались значительно ниже по сравнению с группой ОА к 63 дню. Этот ответ в группе SASC может быть связан с повышенной активностью макрофагов в ответ на увеличение полимерной нагрузки в суставе, но могут ли эти макрофаги являются провоспалительными макрофагами M1 или противовоспалительными макрофагами M2 (41), еще предстоит определить. Однако уменьшение дегенерации хряща (рис. 6 F ) можно объяснить сдвигом в сторону более высокой активности М2 в опухших суставах.

Также было показано, что SASC ослабляет дегенеративный ОА в той же степени, что и ADSC in vivo. Окрашивание сафранином O, используемое для визуализации дегенерированного матрикса суставного хряща, показало, что дегенерация практически отсутствует в собранных образцах SASC и ADSC, как и в контралатеральных суставах в качестве здорового контроля. Наноиндентирование на поверхности хряща было выполнено, чтобы выяснить, превосходит ли полученный хрящ биомеханически хрящ ОА и подобен ли он здоровому суставному хрящу. В результате дегенерации солидной сети хряща при ОА жесткость хряща (измеренная по модулю Юнга) снижается (64, 65).В то время как микросферы PLGA с PBS не восстанавливали модуль Юнга, ADSC и SASC значительно увеличивали модуль большеберцовой и бедренной костей по сравнению с ОА (рис. 7 и 8). Однако ни один из модулей не был похож на модуль здоровой контралатеральной большеберцовой или бедренной кости, что указывает на возможную фибрилляцию хряща, которая может быть устранена в будущих композициях SASC.

В заключение, наша система SASC открывает возможности для адаптации паракринных реакций различных клеток, а также для обеспечения более мощного регенеративного эффекта на ткани-мишени.Важно отметить, что из-за своего небольшого размера SASC представляет собой минимально инвазивную инъекционную терапию, которую можно вводить в виде высоких концентраций частиц, а также возможность комбинировать несколько микросфер, нагруженных фактором роста, в различных весовых соотношениях, чтобы адаптировать композицию к меньшим объемам инъекции. Кроме того, синтетическая природа SASC снижает риск, связанный с иммуногенностью, а также с вариабельностью паракринной реакции стволовых клеток из-за донорских свойств. SASC представляет собой синтетическую систему, в которой используется специально подобранная смесь биологических факторов, предназначенная для имитации паракринного эффекта стволовой клетки.Эти исследования также предполагают, что SASC может быть клинически применимым заменителем стволовых клеток. In vitro SASC проявляет противовоспалительное и хондропротекторное действие, аналогичное ADSC, на воспаленные IL-1β хондроциты. In vivo две обработки SASC успешно ослабили дегенерацию хряща в результате вызванного ферментами ОА, и этот хрящ механически превосходит хрящ ОА, хотя все еще менее жесткий, чем здоровый хрящ. Это говорит о том, что SASC может обеспечить сопоставимый эффект с ADSC.Чтобы лучше понять, как SASC влияет на локальную среду сустава, необходимо провести механистическое исследование наряду с выявлением любых потенциальных системных противовоспалительных реакций и отслеживанием поведения SASC после инъекции.

Будущие направления.

Внедрение SASC сдвигает парадигму терапии стволовыми клетками в синтетическую область. Загрузка рекомбинантного секретома в синтетическую матрицу обеспечивает индивидуальную технологию для многих различных областей регенеративной инженерии.Хотя исследование в этой статье сосредоточено на применении SASC для замедления прогрессирования ОА, могут быть оценены и другие системные дегенеративные заболевания. Кроме того, для регенерации различных тканей требуются различные типы каркасов, многие из которых засевают стволовыми клетками, чтобы обеспечить биологический сигнал для инициации регенерации. Объединение SASC в такие каркасы могло бы усилить удержание в локальной среде и предоставить эти необходимые сигналы точно так же, как засеянные клетки.

Материалы и методы

Изготовление SASC.

Различные партии микросфер для каждого фактора роста были приготовлены с использованием модифицированного метода выпаривания растворителя из двойной (мас./м./м.) эмульсии (29, 30). Вкратце, 250 мг PLGA растворяли в 4 мл дихлорметана (ДХМ). Готовили объемный водный раствор 1% (масса/объем) поливинилового спирта (ПВС) + 1% (объем/объем) изопропилового спирта (ИПС) + 10% (масса/объем) NaCl. В химическом стакане на 250 мл к 100 мл 2% (масс./об.) раствора ПВС добавляли 100 мл 2% (об./об.) ИПС. Добавляли NaCl для получения 10% масс./об. раствора.Затем факторы роста разбавляли PBS + 4% BSA до достижения конечной концентрации 1% BSA для HGH и FGF-18 и 3% для TGF-β1 и конечного объема 100 мкл. Теоретическая нагрузка каждого фактора роста составляла 10 нг фактора роста/мг PLGA. Пустые микросферы готовили с использованием 100 мкл PBS.

После растворения PLGA фактор роста или контрольные растворы эмульгировали встряхиванием на максимальной скорости в течение 30 с. Сразу же добавляли 4 мл 5% ПВС для получения вторичной эмульсии и встряхивали еще 30 с на максимальной скорости.Двойную эмульсию вводили в основной раствор через иглу 18-го калибра. Раствор перемешивали при 600 об/мин в течение 3 ч для экстракции и испарения ДХМ. После выпаривания микросферы центрифугировали при 2000 rcf в течение 3 мин, затем трижды промывали 250 мл воды путем фильтрации и лиофилизировали в течение ночи. Микросферы размером от 10 до 20 мкм отделяли просеиванием и хранили при температуре -20°C с осушителем до объединения с образованием конечной композиции SASC. Композиция SASC, используемая для следующих исследований, включала 20% по весу микросфер FGF-18, 20% по весу микросфер TGF-β1, 20% по весу микросфер IGF1 и 20% по весу микросфер HGH и остальные чистые микросферы. В эту композицию добавляли пустые микросферы, чтобы сделать возможным увеличение массы композиции, чтобы при необходимости можно было добавить дополнительный фактор. SASC и чистые микросферы стерилизовали в течение 20 мин.

Гранулометрический состав.

Распределение размеров микросфер определяли просеиванием. Массовые доли определяли путем деления массы микросфер в ведре соответствующего размера на общую массу микросфер, определяемую суммой во всех ситах. Микросферы размером от 10 до 20 мкм отделяли и стерилизовали в течение 20 мин.Стерилизованные микросферы использовали для дальнейшего тестирования in vitro и in vivo.

СЕМ.

Для каждой партии микросфер, загруженных фактором роста, просеянные микросферы закрепляли на углеродной ленте и покрывали напылением (Denton Vacuum Desk V) при 20 мА в течение 60 с. Изображения SEM (JEOL JSM-5900LV) были получены с использованием напряжения 10 кВ и размера пятна 23; 1000-кратное увеличение использовалось, чтобы увидеть общую форму и распределение по размерам, и 10000-кратное увеличение, чтобы увидеть гладкость поверхности и любую пористость. Поскольку электронный луч с 10 000-кратным увеличением повредил структуру микросферы, яркость и контрастность были отрегулированы на одной сфере, а изображения были получены с использованием соседней сферы.

Эффективность загрузки.

Для каждого фактора роста микросферы массой 10 мг растворяли в 2 мл ДХМ при 37 °C в течение 1 ч ( n = 4). Добавляли 2 мл PBS и раствор перемешивали на вортексе в течение 30 с для экстракции фактора роста с последующим центрифугированием при 2000 об/мин в течение 3 мин для разделения фаз. Верхний слой отсасывали и заменяли свежим PBS, чтобы повторить процесс два раза до конечного объема экстракта 6 мл. Иммуноферментный анализ (ИФА) проводили в трех экземплярах для расчета эффективности загрузки с использованием 100 нг в качестве теоретической массы фактора роста, загруженного в 10-мг микросферы.

Исследование контрольного выпуска.

Профили высвобождения каждого фактора роста были получены для 10-мг микросфер в 2 мл PBS ( n = 4). В заранее определенные моменты времени образцы центрифугировали в течение 1 мин при 2000 rcf, 1 мл среды собирали для ELISA и заменяли 1 мл свежего PBS. Образец кратковременно встряхивали для ресуспендирования микросфер и снова помещали в водяную баню. ELISA выполняли в трех повторностях для расчета массы высвобожденного вещества, а процентное высвобождение рассчитывали с использованием эффективности загрузки.

Изоляция и культура ADSC.

ADSC были выделены из крыс Sprague-Dawley в возрасте от 6 до 8 недель в соответствии с экспериментальными рекомендациями и правилами, одобренными Комитетом по уходу и использованию животных Центра здоровья Университета Коннектикута, одобренным протоколом. ADSC выделяли и очищали, как описано Bhattacharjee et al. (49). Крыс умерщвляли путем удушения CO 2 с последующим смещением шейных позвонков. Убитых крыс взвешивали, брили и очищали 70%-ным этанолом.Паховые жировые отложения выделяли и взвешивали. Жировые тела собирали, промывали в стерильном сбалансированном солевом растворе Хенкса (HBSS) с 1% пенициллином/стрептомицином (пен/стрептомицин) и измельчали ​​на мелкие кусочки. Кусочки добавляли к 25 мл коллагеназы типа I (300 ЕД/мл) (Invitrogen) в HBSS и перемешивали при 37 °C в течение 90 минут (49). Полученную клеточную суспензию фильтровали через 70-мкм фильтр (BD Bioscience) для удаления твердых агрегатов. Для нейтрализации коллагеназы добавляли равный объем DMEM-F12 с 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS) и 1% пенициллина/стрептококка.Смесь центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин, супернатант удаляли, осадок ресуспендировали в 2 мл буфера для лизиса эритроцитов и инкубировали 2 мин при 37 °С. Смесь снова центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин. Супернатант удаляли, клетки подсчитывали и помещали в колбу Т150, содержащую DMEM-F12 с 10% FBS и 1% пенициллина/стрептококка (49). Среду меняли через 24–48 ч для удаления клеточного дебриса и неприлипших клеток. Пассаж 0 (P0) ADSC культивировали в колбах T150 в течение 2 недель в среде DMEM-F12 с добавлением 1% пенициллина/стрептококка.ADSC, достигшие 80–90% слияния, отделяли 0,25% трипсином (Thermo Scientific) при 37 °C, центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин и повторно высевали. ADSC характеризовали проточной цитометрией с использованием маркеров клеточной поверхности (Becton-Dickinson LSR II; BD Biosciences) на пассаже 3 (P3). Клетки промывали с использованием стерильного PBS, центрифугировали и ресуспендировали в стерильном буфере для сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS) (PBS, 1% FBS), содержащем 10 мкл FITC-конъюгированного антитела CD29, флуоресцеинизотиоцианатного (FITC)-конъюгированного антитела CD90, CD34, конъюгированный с FITC, CD45, конъюгированный с FITC, и CD11b, конъюгированный с PE, в течение 30 мин.В качестве контроля использовали немеченые клетки (49). Затем клетки сканировали с помощью FACS, собирали и гейтировали с использованием параметров прямого рассеяния (FSC) и бокового рассеяния (SSC) для исключения клеточного дебриса и агрегатов (см. Приложение SI , рис. S1).

Кокультура.

Вся инкубация и культивирование проводились при 37°C, 5% CO 2 и относительной влажности 85%. Первичные хондроциты пассировали через P4, а затем 100000 клеток высевали в 24-луночный планшет для NO и ПЦР-анализа. Среду, содержащую DMEM-F12, 10% FBS и 1% пенициллин/стрептококк, использовали для пассирования и первоначального посева клеток. После прикрепления клеток среду заменяли на DMEM-F12, 5% FBS и 1% пенициллин/стрептококк для отрицательного контроля и DMEM-F12, 5% FBS, 1% пенициллин/стрептококк и 20 нг/мл IL-1β. для всех остальных групп. Клетки инкубировали в течение 24 ч для индукции воспаления. После индукции 100 000 ADSC, пустых микросфер или SASC добавляли в соответствующие вставки Transwell для совместного культивирования с воспаленными хондроцитами.Среду также обновляли свежей средой (DMEM-F12 + 5% FBS + 1% пенициллин/стрептококк ± 20 нг/мл IL-1β).

Обработка продолжалась 72 ч, после чего среды собирали для анализа на NO и замораживали при -80 °C до проведения анализа.

Анализ реактива Грисса.

Концентрация NO измерялась с использованием реактива Грисса. Стандарты готовили путем серийного разведения исходного материала в 5% DMEM-F12 + 5% FBS + 1% пенициллин/стрептококк. Затем стандарты и образцы помещали на планшеты в соответствии с процедурами производителя.Планшет инкубировали в течение 30 мин и измеряли оптическую плотность при 550 нм. Стандартную кривую строили из пустых вычтенных стандартов, а затем рассчитывали содержание NO из показаний пустых вычтенных образцов с использованием наиболее подходящей линейной линии тренда.

qRT-PCR.

qRT-PCR проводили с использованием процедуры, используемой в нашей группе (49). Вкратце, общую РНК выделяли из клеток, объединенных в четыре лунки, с использованием мини-набора RNeasy (74104; Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя. Для синтеза комплементарной ДНК (кДНК) от 2 до 4 мкг общей РНК использовали в качестве матрицы для синтеза кДНК с использованием премикса EcoDry (639549; Takara) в общем объеме 20 мкл (49).Для qRT-PCR использовали iCycler Thermal Cycler Base (Bio-Rad) и iQ Supermix (Bio-Rad), зонды генов SOX-9, ADAMTS5, PRG4 и GAPDH Taqman. Значения порогового цикла генов-мишеней стандартизировали по экспрессии GAPDH и нормализовали по экспрессии в необработанной контрольной культуре. Кратность изменения экспрессии образцов в трех экземплярах рассчитывали с использованием метода сравнительного порогового цикла ΔΔCt (49).

Индукция и лечение ОА.

Этот экспериментальный протокол был одобрен Институциональным комитетом по уходу за животными, Uconn Health.Крыс Sprague-Dawley акклиматизировали не менее чем за 24 часа до процедуры после покупки у поставщика. На 0-й и 3-й день животным вводили 500 ЕД коллагеназы II типа для индуцирования фенотипа ОА. Затем животных разделили на четыре лечебные группы ( n = 11), которым вводили инъекции на 7-й день: контроль ОА, получавший физиологический раствор, крысам, которым вводили 1 миллион ADSC, суспендированных в физиологическом растворе, крысам, которым вводили 1 миллион частиц SASC, суспендированных в физиологическом растворе, и крысам, которым вводили с 1 миллионом чистых микросфер в физиологическом растворе.Вторую лечебную дозу вводили всем животным через 5 недель после первой обработки. Используя гемацитометр, мы определили, что имеется 150 000 сфер/мг, и использовали это для определения соответствующей массы, необходимой для 1 миллиона микросфер (6,67 мг). Для группы SASC доза каждого фактора роста была затем определена как 9,256 нг HGH и FGF-18, 11,86 нг IGF1 и 5,424 нг TGF-β1.

В каждый день инъекции крыс анестезировали 2–4% изофлураном. Правое колено было выбрито, и штангенциркулем был измерен диаметр обоих коленей.Правое колено обрабатывали бетадином и 70% этанолом, и под рентгеноскопическим контролем внутрисуставно вводили соответствующий раствор. Степень отека колена контролировали еженедельно, пока крыс не умерщвляли на 9 неделе.

Гистология.

После умерщвления коленные суставы собирали и отделяли для гистологической и биомеханической оценки. Контралатеральные суставы принимали за здоровый контроль. Те суставы, которые были взяты для биомеханики, были завернуты в марлю, смоченную PBS, вакуумированы и затем хранились при температуре -20 °C до анализа.Суставы, использованные для гистологии, завязывали в полностью расправленном положении на ватной палочке-аппликаторе, затем фиксировали в 10% формалине на 5–7 дней при 4 °C, а затем трижды промывали PBS с интервалом хранения 1 час при 4 °C. Декальцинацию проводили в Cal-EX в течение 3 дней при 4 °C, ежедневно меняя раствор с последующей промывкой в ​​течение ночи постоянно проточной дистиллированной водой. Затем швы разрезали пополам вдоль фронтальной плоскости и отправляли на центральную установку для обработки и заливки парафином. Срезы толщиной около 350 мкм брали в блок и окрашивали гематоксилином/эозином с последующей 15-минутной инкубацией в сафранине О перед обезвоживанием.Были идентифицированы площади суставных поверхностей мыщелков бедренной кости и плато большеберцовой кости (области, окрашенные в красный цвет сафранином О), измеренные между местом прикрепления связки и латеральным или медиальным концом кости, и площадь была определена количественно с использованием программного обеспечения для анализа изображений ImageJ. Области дегенерации, где не было красного окрашивания сафранином O, измеряли с помощью imageJ, а процент дегенерации в суставе измеряли по следующей формуле: % дегенерация =∑дегенеративные области∑теоретическая здоровая суставная поверхность площадь*100.

Биомеханика.

Суставы размораживали в PBS при слабом перемешивании в течение не менее 30 мин. Затем сустав рассекают, обнажая бедренный и большеберцовый суставные хрящи. Для автоматического вдавливания суставного хряща использовался многоосевой тензодатчик 70 Н с модулем усиления, который калибровался перед каждым использованием. Бедра и голени в PBS подвергались автоматическому вдавливанию в 12 и 22 заданных положениях, соответственно, с использованием индентора со сферическим наконечником 0,3 мм на каждой поверхности.Позиции были равномерно нанесены на карту на латеральной и медиальной сторонах каждой кости. Автоматическое вдавливание выполнялось на глубину 0,05 мм со скоростью 0,05 мм/с с релаксацией 10 с в качестве начального сканирования и для обеспечения получения достаточного сигнала (нагрузки) при частоте сбора данных 100 Гц. Кривые релаксации напряжения наблюдали при вдавливании суставного хряща. Затем была рассчитана структурная жесткость при соответствующей глубине отпечатка и нанесена на карту в местах отступа.

Статистика.

Minitab 19 использовался для выполнения ANOVA с двусторонним 95% доверительным интервалом для каждого сравнения in vitro и сравнения дегенерированных областей. Чтобы проанализировать биомеханические различия между образцами, в Minitab 19 была создана линейная модель смешанных эффектов с двусторонним доверительным интервалом 95% для учета нескольких позиций измерения, объединенных для определения жесткости всей поверхности хряща. Для оценки межгрупповых различий было проведено сравнение средних по Тьюки. GraphPad Prism 6 использовался для построения графика всех данных фигуры.

Доступность данных

Все данные исследования включены в статью и/или Приложение SI .

История изменений

21 января 2022 г.: Имя автора обновлено.

Благодарности

Мы благодарим Центр сравнительной медицины и центральное отделение электронной микроскопии Медицинского центра Университета Коннектикута. Мы также благодарим лабораторию доктора Таннина Шмидта в Медицинском центре Университета Коннектикута за кредитование и обучение использованию их Biomomentum Mach 1 и Dr. Чиа-Линг Куо из Конвергентного института перевода в регенеративной инженерии Коннектикута за помощь в статистическом анализе. Это исследование было поддержано грантами NIH DP1AR068147 и NIH T32 AR079114.

Сноски

    • Принято 22 ноября 2021 г.
  • Вклад авторов: С.С. и К.Т.Л. проектное исследование; С.С., C.J.E., М.Б. и Х.-М.К. проведенное исследование; С.С. предоставил новые реагенты/аналитические инструменты; С.С. и C.J.E. проанализированные данные; и С.С., C.J.E., M.B., H.-M.K. и C.T.L. написал бумагу.

  • Рецензенты: Г.А., Северо-Западный университет; и JE, Университет Джона Хопкинса.

  • Заявление о конкурентных интересах: Университет Коннектикута подал заявку на патент от имени изобретателей (S.S., H.-M.K. и C.T.L.) под названием «Синтетическая искусственная стволовая клетка». К.Т.Л. имеет следующие конкурирующие финансовые интересы: Mimedx и Biobind Soft Tissue Regeneration/Biorez.

  • Эта статья содержит вспомогательную информацию в Интернете по адресу https://www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.2116865118/-/DCSupplemental.

  • Copyright © 2022 Автор(ы). Опубликовано ПНАС.

Потребление пива и вина и риск остеоартрита коленного или тазобедренного сустава: исследование случай-контроль | Arthritis Research & Therapy

Исследуемая популяция

Исследование GOAL представляло собой исследование типа «случай-контроль» с участием 3171 участника (1042 больных ОА коленного сустава, 1006 больных ОА тазобедренного сустава и 1123 контрольных пациентов без ОА). Исследование было одобрено Ноттингемским комитетом по этике исследований, и от каждого участника было получено полное информированное согласие.

Набор больных и контролей проводился в период с 2002 по 2006 год, и подробности исследования опубликованы в других источниках [13,14]. Короче говоря, участниками были мужчины и женщины европеоидной расы в возрасте от 45 до 86 лет, проживающие в Ноттингемшире. Случаи были отобраны, если у них был клинически значимый симптоматический ОА тазобедренного или коленного сустава, достаточный для направления в больницу. Они были набраны, если им была проведена замена сустава, они находились в листе ожидания ортопедического лечения или были направлены с симптомами ОА коленного сустава в клинику ОА коленного сустава Ноттингема.Контрольная группа была набрана из списков ожидания больничной внутривенной урографии (ВВУ), и частота соответствовала случаям по возрасту (± 2 года) и полу. Для участия в исследовании были приглашены контроли без симптомов ОА и без признаков ОА тазобедренного сустава при скрининге рентгенограмм внутривенного ультразвукового исследования и без признаков ОА коленного сустава на свежих рентгенограммах коленного сустава.

Определение случая

Новые рентгенограммы колена, кисти и таза были сделаны при исходной оценке, если только участник не прошел рентгенографию в течение двух лет до включения в исследование или не подвергся тотальной замене сустава (TJR). Рентгенологическая оценка и классификация признаков ОА подробно описаны в других работах [13,14]. В это исследование мы включили случаи симптоматического ОА со степенями Келлгрена и Лоуренса (KL) ≥3 в колене и ≥2 в тазобедренном суставе, а также бессимптомную контрольную группу без рентгенологических признаков ОА тазобедренного или коленного сустава (определяется как KL ≤2 в колене и тазобедренном суставе). KL ≤1 на бедре).

Оценка воздействия

Для сбора данных использовались опросник и клиническое обследование. Мы оценивали еженедельное потребление алкоголя с помощью отдельной анкеты с вопросами о пиве, вине и крепких спиртных напитках.Этот вопросник задавали во время интервью. Участников, сообщивших о регулярном употреблении пива, вина и/или крепких спиртных напитков (то есть не менее одного алкогольного напитка в неделю), попросили указать количество лет и среднее количество алкогольных напитков, которые они потребляли каждую неделю, начиная с возраста от 10 до 15 лет. Мы измерили единицы алкоголя на полпинты для пива/лагера/сидра; бокал для белого/красного вина или хереса/мартини; и тосты для крепких напитков, например, джина, коньяка, виски, водки (сумма крепких напитков, выпитых дома, засчитывалась как двойная).Затем мы использовали информацию о продолжительности употребления алкоголя и типе алкогольного напитка (т. е. пиво, вино и/или спиртные напитки), потребляемого каждым человеком в течение трех десятилетий: в возрасте от 21 до 30 лет, от 31 до 40 лет и от 41 до 50 лет. определить потребление алкоголя во взрослой жизни. Для каждого вида напитка оценивалось взвешенное количество напитков, потребляемых в неделю, с весами, равными количеству лет потребления в каждом возрастном периоде. Например, если участник сообщил, что выпивает в среднем десять полпинты пива в неделю в течение десяти лет в возрасте от 21 до 30 лет и шесть полпинты пива в неделю в течение восьми лет в возрасте от 31 до 40 лет, их взвешенное количество пива потребление в неделю в этом возрасте составляло 10 и 4 года. 8 соответственно. Затем мы суммировали взвешенное количество каждого типа напитков, потребляемых в разном возрасте, чтобы рассчитать среднее общее потребление алкоголя в течение взрослой жизни. Если человек не употреблял хотя бы один алкогольный напиток в неделю в течение определенного возрастного периода или у него отсутствовали данные о потреблении алкоголя, количество выпитого алкоголя за имеющиеся возрастные периоды усреднялось. Оценки для пива, вина и крепких спиртных напитков также были рассчитаны с использованием тех же процедур.

Мы запросили информацию о безалкогольных напитках (чай, кофе и фруктовый сок) с помощью полуколичественного опросника частоты приема пищи (FFQ) из 126 пищевых продуктов.Этот FFQ был модифицирован на основе FFQ Европейского проспективного исследования рака и питания (EPIC) [15] и использовался для оценки привычного рациона питания в течение четвертого десятилетия, то есть в возрасте от 30 до 40 лет. Чтобы получить информацию о каждом продукте питания, участников попросили указать их среднюю частоту потребления в течение 30 лет с точки зрения средней порции, обычной бытовой единицы (например, чайная ложка, миска, чашка, стакан) или размера порции каждого продукта. или напиток (например, ломтик хлеба, одно яйцо), проверив одну из девяти категорий частоты, которая варьировалась от «никогда или реже одного раза в месяц» до «более шести раз в день».

С участниками повторно связались в январе 2008 г. и попросили заполнить почтовую анкету для оценки надежности и достоверности ранее полученных данных. Из 3022 участников исследования GOAL, о которых было известно, что они все еще живы и живут в Великобритании, 2172 человека ответили на второй вопросник. В рамках расширенного второго вопросника участники также случайным образом получали одну из семи групп пищевых продуктов (т. потребление пищи) от базового уровня FFQ.Таблица напитков была немного изменена, чтобы включить четыре алкогольных напитка (пиво, вино, херес/мартини и спиртные напитки), поскольку они не входили в полуколичественный FFQ из 126 продуктов питания. Порции на единицы алкогольных напитков были следующими: полпинты для пива/лагера/сидра; бокал для белого/красного вина; стакан хереса/вермута/ликеров; и тосты для спиртных напитков, например, джин, коньяк, виски, водка. В общей сложности 2117 из 3022 участников заполнили таблицы частоты приема пищи, и данные были использованы для оценки согласованности потребления алкоголя и безалкогольных напитков в течение четвертого десятилетия жизни.

Смешивающие факторы

Анкета собирала информацию о социально-демографических факторах, истории занятости, профессиональной деятельности, истории физической активности, тяжелых травмах, состояниях здоровья, а также содержала подробные вопросы о других факторах риска ОА. Вес (кг) и рост (см) измерялись обученной медсестрой-исследователем во время клинического осмотра.

Для этого анализа мы учитывали возраст (годы), пол (мужской по сравнению с женским), ИМТ (кг/м 2 ), социальный класс, курение (никогда, в прошлом, в настоящее время курит), травму суставов в анамнезе (да или нет), самооценка подагры (да или нет) и заболевания почек (да или нет) и энергичной физической активности в свободное время (да или нет).Социальный класс был классифицирован как I/II, III, IV и V/VI с использованием Стандартной классификации занятий на основе самой продолжительной работы [16,17]. Профессиональное воздействие оценивалось от 0 до 5, по 1 баллу за каждое: стояние на коленях, приседание, выполнение тяжелой работы стоя в течение одного часа или более в неделю, подъем 25 кг десять или более раз в неделю и подъем не менее 50–100 кг. Один раз в неделю. Участники были разделены на тех, у кого не было никаких рисков, и тех, кто набрал один или более баллов. Физическая активность, связанная с энергией в свободное время, определялась как постоянное участие в мероприятиях, которые увеличивали частоту сердечных сокращений и вызывали потоотделение, таких как плавание, бег трусцой, бег и т. д., в течение 20 минут или более не менее трех раз в неделю.

Статистический анализ

Сначала мы оценили согласие в отношении потребления алкоголя и безалкогольных напитков в течение четвертого десятилетия жизни на основе опросника, исходного FFQ и воспроизведенных таблиц FFQ. Взвешенная каппа (квадратичная) статистика между оригинальными и отозванными таблицами FFQ для алкогольных напитков колебалась от 0,31 до 0,80 (спиртные напитки =   0,31, вино   =   0,47, пиво   =   0,80), а для безалкогольных напитков варьировалось от 0,37 до 0,56 (чистый фруктовый сок   =   0,37). , кофе = 0.55, чай = 0,56).

Мы использовали модели безусловной логистической регрессии для оценки отношения шансов (ОШ) и 95% доверительных интервалов (ДИ). Они были исследованы отдельно для ОА коленного и тазобедренного суставов. Во-первых, мы оценили среднее количество единиц алкоголя, потребляемых в неделю, а затем разделили недельные единицы алкоголя на пять групп: непьющие, ≤2 порций в неделю, от >3 до 6 в неделю, >7-14 доз в неделю и ≥15 напитков в неделю. Во-вторых, мы разделили каждый потребляемый напиток на пять частотных групп на основе распределения среди контрольной группы и использовали самую низкую категорию в качестве референтной категории в анализе.Мы использовали две многомерные модели, чтобы скорректировать потенциальные помехи. Первая модель скорректирована с учетом следующих факторов, выбранных априори : возраст (лет), пол (мужчины по сравнению с женщинами), ИМТ (<25 кг/м 2 , от 25 до 30 кг/м 2 , >30 кг /m 2 ) и курение (никогда, в прошлом или в настоящее время курильщик). Вторая модель с поправкой на дополнительные переменные, включая профессиональные факторы риска (отсутствие факторов риска, 1, 2 и 3 или более факторов профессионального риска коленного сустава), активную физическую активность в свободное время в возрасте 20, 30 или 40 лет (да или нет), историю серьезных суставных заболеваний. травма (да или нет), болезнь почек (да или нет), подагра (да или нет) и другие напитки, в зависимости от ситуации.Мы также оценили тенденции риска ОА для данного напитка, установив его как категориальную переменную.

Мы также изучили изменение потенциального эффекта в зависимости от пола (мужчины по сравнению с женщинами) и статуса курения сигарет (когда-либо куривший да по сравнению с нет) путем сравнения статистики логарифмического правдоподобия для моделей, которые использовали термин взаимодействия между произведениями в моделях логистической регрессии, с теми, которые без, а затем оценивали статистическую значимость взаимодействия с помощью теста отношения правдоподобия [18].

Кроме того, мы повторили анализ, чтобы изучить среднее потребление алкоголя в разные возрастные периоды: от 21 до 30 лет, от 31 до 40 лет и от 41 до 50 лет и связь с ОА.Для этого анализа каждый период был изучен отдельно, чтобы оценить, связано ли время воздействия алкоголя с риском ОА.

Все анализы проводились с использованием программного обеспечения STATA версии 13. P — сообщаются значения (двусторонние).

фирменные вывески на заказ. Индивидуальные вывески для вашего бизнеса, сделанные в США и доставленные быстро. Местная компания по производству вывесок, предоставляющая коммерческие и деловые вывески, в том числе вывески для магазинов зданий, вывески для столбов, вывески для памятников, вывески для вестибюлей, настенные росписи и многое другое! Компания Eastlake Sign Company с полным спектром услуг.Деловые вывески продвигают ваш бизнес и помогают ему расширяться! Деловые вывески работают почти так же усердно, как и вы. Мы можем обрабатывать грузовые автомобили вашей компании, фургоны и прицепы. Неоновые вывески на заказ, светодиодные вывески для домашнего декора, нестандартная световая вывеска, день рождения, свадьба, деловая неоновая вывеска для приема, персонализированная вывеска, вертикальная / горизонтальная. Индивидуальный знак будет заметно отображать ваш бизнес и информировать в тот момент, когда люди смотрят. Независимо от размера вашего проекта, возможность быть вам полезным — это большая честь.Позвоните в Excel Signs & Design по телефону (314) 701-7211, чтобы получить бесплатную консультацию со специалистом по пользовательским знакам!. Произведите отличное первое впечатление, создав уникальный дизайн визитной карточки в Canva. Дайте знать о своем присутствии с помощью манящих нестандартных бизнес-вывесок на Alibaba. Цинциннати производитель компании бизнес знаки футболки футболки на заказ футболки на заказ знак толстовки фото рубашки школьный дух наклейки на бампер магниты баннеры Cincinnati Custom Signs Наклейка и печать на футболках в Цинциннати, штат Огайо, расположенная в Рединге. Вывески и баннеры в Аделаиде, Южная Австралия. Каждый бизнес имеет свои уникальные требования, когда речь идет о внутренней и наружной вывеске. Вот почему то, как вы рекламируете свой бизнес, является одним из ваших самых важных вложений. В Toledo Sign мы знаем, как использовать эти драгоценные секунды для создания привлекательных вывесок и графики, которые работают в ваших интересах. Местная компания по производству вывесок, предоставляющая коммерческие и деловые вывески, в том числе вывески для магазинов зданий, вывески для столбов, вывески для памятников, вывески для вестибюлей, настенные росписи и многое другое! Компания Tacoma Sign с полным спектром услуг.Мы можем помочь вам создать лучшую вывеску, чтобы выделить ваш бизнес. Вы можете загрузить свой собственный дизайн или выбрать один из сотен доступных шаблонов, включая знаки, которые помогут вашим сотрудникам и клиентам быть в курсе важных аспектов безопасности. com вы можете легко настроить свой знак в соответствии с вашими потребностями. Изготовленные на заказ металлические деловые знаки. Недорогие дворовые знаки — чтобы создать нестандартный металлический знак недвижимости, вы следуете тому же процессу, что и при создании пластикового знака, вы просто выбираете алюминий в качестве материала в редакторе знаков.Сборник по. Создавайте свои собственные визитные карточки Без дизайнерских навыков ⏩ VISTACREATE Business CardСоздайте свою собственную визитную карточку Бесплатно. Вывеска – важная составляющая любого успешного бизнеса. Получите наружные вывески и флаги для вашего бизнеса в Zazzle. Omaha Custom Signs — это компания по производству вывесок с полным спектром услуг, которая предлагает дизайн вывесок, изготовление вывесок на заказ, установку вывесок на бизнес-вывесках, оклейку транспортных средств, виниловую графику и многое другое! Позвони сейчас!. Знаки недвижимости; COVID-19. Если вам нужно разместить свой знак безопасности на открытом воздухе, посмотрите.StickerYou — лучшая платформа для создания нестандартных продуктов, которые заставят вас прилипнуть! Заказывайте виниловые наклейки, этикетки, наклейки, татуировки, магниты и многое другое в любом размере, форме и количестве. Выбирайте из целого ряда мест расположения знаков, форматов и отделки. Magnify Signs — это компания по производству вывесок в Денвере с более чем 30-летним опытом работы в области профессиональных пользовательских бизнес-вывесок. 00 БЕСПЛАТНАЯ доставка. Индивидуальный знак даст вам полную свободу в создании точного знака для вашего бизнеса. Индивидуальный бизнес-знак, HDU толщиной 2 дюйма, 48 дюймов x 36 дюймов.com имеет более чем 25-летний опыт создания нестандартных бизнес-знаков для компаний. Создавайте уникальные деловые вывески на все случаи жизни. Эти нестандартные деловые вывески сделают ваш бизнес или учреждение отличным от остальных. См. Custom Neon® Business Signs IRL: стилизация неоновых вывесок. Индивидуальные дисплеи и вывески, разработанные и произведенные на месте, идеально подходят, когда вам нужен специальный корпус для вестибюля вашего здания, a. С TheSignChef. Наша уникальная бизнес-модель сочетает в себе высококачественный дизайн со знанием материалов и производством. canvas_ext_sign_1080x1080a. Индивидуальные наружные деловые вывески. Давайте поможем создать визуальный интерес. Все нестандартные металлические вывески ShieldCo изготавливаются по индивидуальному заказу, вырезаются лазером из стали или алюминия и покрываются порошковой краской в ​​промышленных масштабах. При разработке нестандартных вывесок для вашего бизнеса, университета или медицинского кампуса Как нестандартная вывеска может работать на ваш бизнес. Мы понимаем, что у каждого бизнеса и каждой отрасли разные потребности, поэтому, как производитель вывесок, мы стремимся предлагать индивидуальные вывески для розничной торговли, здравоохранения, гостиничного бизнеса, правительства и обрабатывающей промышленности.Доступные знаки с подсветкой. Мы покрываем ваши потребности в социальном дистанцировании. SIGNS TODAY предлагает различные знаки социального дистанцирования стандартного размера для вашего бизнеса. Деловые вывески делают для вас гораздо больше, чем просто продвижение бренда. Мы предлагаем широкий спектр решений для вывесок для различных потребностей бизнеса, включая плакаты и печатные издания; вывески и баннеры; выставочные материалы; оконная, настенная и напольная графика; и графика автомобиля. Воспользуйтесь нашим бесплатным конструктором визитных карточек, чтобы легко создавать свои собственные визитные карточки.Пользовательские бизнес-знаки можно использовать по-разному. Дизайн и консалтинг Мы помогаем компаниям разрабатывать и продвигать свой бренд с помощью вывесок для витрин, логотипов в вестибюлях, графики для автопарка и многого другого. Вы ищете высококачественные услуги печати бизнес-знаков на заказ? Не забудьте проверить скидки на печать нестандартных бизнес-знаков, используя таблицу оптовых скидок. Пользовательские знаки и баннеры в Бирмингеме, Ал. Являетесь ли вы бизнесом, разработчиком, больницей или университетом, a. Найти производителей пользовательских бизнес-знаков из Китая.Замена бизнес-вывески для галантерейного магазина на Восточном побережье отличалась хорошо спроектированными и выполненными внешними деловыми вывесками, которые «показали свое лучшее лицо», подчеркивая вашу индивидуальность. Для деловых вывесок вам нужен тот, который четко представляет ваш бренд и показывает, что вы профессиональная и заслуживающая доверия компания. Индивидуальные бизнес-знаки. Позвоните нам по телефону (888)-744-6770 для получения дополнительной информации!. Мы предлагаем бесплатные расценки и быстрое выполнение работ, чтобы помочь уложиться в ваш бюджет и сроки. Цифровой дисплей. Мы работали с розничными магазинами, подрядчиками, офисными зданиями, ресторанами, производителями, школами, некоммерческими и даже государственными учреждениями.Изготовленные на заказ вывески в Эдмонтоне помогут вам выделиться среди остальных на многолюдном рынке. Изготовление вывесок на заказ выделит ваш бизнес среди соседей и конкурентов, а также поможет укрепить ваш бренд. Лолас Дизайн Лофт. Признаки успешного бизнеса. (813) 523-3128 — Компания Tampa Sign, предлагающая индивидуальные бизнес-знаки, включая внутренние знаки, наружные знаки, оклейку транспортных средств и многое другое. Бесплатная консультация по бизнес-знаку. Мы разработаем захватывающий и доступный индивидуальный знак для вашего бизнеса, который ускорит рост ваших доходов на долгие годы. Демонстрация нескольких потрясающих светодиодных неоновых вывесок, которые мы сделали для наших бизнес-клиентов, а также того, как они были установлены и оформлены в помещениях. Вы нормально получите. Индивидуальные варианты печати визитных карточек Сделайте визитные карточки скрепками онлайн или в ближайшем магазине. Electremedia предлагает индивидуальные бизнес-вывески, светодиодные вывески, настенные вывески, баннеры и графику для ресторанов, розничных магазинов, многоквартирных домов и всех видов коммерческого бизнеса. Рассматриваете индивидуальный бизнес-знак для вашей компании? Мы объясняем детали коммерческих вывесок Поскольку мы занимаемся изготовлением нестандартных вывесок в Нью-Джерси более 24 лет, вы можете подумать, что это мы.Сообщите информацию о своем бизнесе с помощью дешевых знаков подрядчика Настройте знаки подрядчика или дворовые знаки от нас, чтобы их видели и слышали повсюду. Идеи бизнес-знаков своими руками. com имеет более чем 25-летний опыт создания нестандартных бизнес-знаков для таких компаний, как ваша. Привлеките внимание с помощью специальных бизнес-знаков. Национальные аэрокосмические решения. Крупномасштабные металлические вывески для компаний, поставляющих лучшие продукты и. Поговорите с человеком. Импортируйте качественные пользовательские бизнес-знаки, поставляемые опытными производителями из Global Sources.Front Signs предоставляет индивидуальные решения и услуги полного цикла для проектов бизнес-вывесок в Лос-Анджелесе и по всей территории США. Изготавливаем на заказ вывески и баннеры с виниловыми наклейками, виниловыми буквами и логотипами. Каждый знак изготовлен вручную и имеет ощущение подлинности … Идеально подходит для подарков и украшения. Освещенная офисная вывеска iNovex. Знак любого типа. Настройте бизнес-знак. Устанавливаемый на столбе Индивидуальный знак с позолоченными наконечниками 72 «x 36». Все запросы получают ответ в течение одного рабочего дня. Наша команда состоит из экспертов, которые понимают особые требования для различных отраслей, необходимые технические и юридические аспекты, а также ограничения бюджета. Пользовательские бизнес-знаки Signclass. Весь процесс проектирования и создания обычно занимает всего несколько дней. Высококачественные наружные вывески повышают ценность вашего бизнеса, привлекая больше положительного внимания, укрепляя доверие клиентов и продвигая ваш бренд, демонстрируя ваш логотип, шрифты и цвета. Когда мы проектируем, изготавливаем и здесь, в Axe Signs & Wayfinding, мы специализируемся на создании нестандартных бизнес-знаков, которые не только помогают. Металлический бизнес-знак Stratxit. Независимо от того, являетесь ли вы малым бизнесом, стремящимся привлечь новых клиентов, домашним ремесленником, создающим свой бренд, или просто ищете уникальный способ отпраздновать особое событие, мы являемся компанией, специализирующейся на этикетках для вас.Деловая вывеска на заказ двухсторонняя 60 x 36 дюймов с резным HDU и надписью сусальным золотом. Сделайте свой бренд сияющим с помощью объемных светодиодных букв, знаков-монументов, знаков-пилонов, указателей направления, нестандартных знаков и многого другого. На протяжении многих лет Masstar овладевал способностью создавать уникальные изделия. Продвигайте свой бизнес с помощью персонализированных вывесок, точно соответствующих вашим требованиям. Деловые вывески и вывески в Чикаго. Разместите знаки, которые помогут с безопасностью, навигацией, брендингом и санитарией. Мы также изготавливаем на заказ дворовые знаки и знаки недвижимости для коммерческих и жилых компаний.Просмотрите CustomMade, чтобы найти идеальный индивидуальный знак, изготовленный вручную опытными мастерами и сделанный на века. Смотрите больше идей о пользовательских. Доступна помощь в графическом дизайне. Получение нестандартных бизнес-знаков имеет решающее значение для брендинга вашей компании или индивидуального бизнеса. Информационные и указатели направления из акрила, металла и пластмассы под гравировку. Ничто не поможет вашему бизнесу больше, чем индивидуальная деловая вывеска. Чтобы узнать о качественных нестандартных знаках, безопасной установке и долговечных знаках, посетите сайт Jacksonville Signs and Graphics. Изготовленные на заказ деловые знаки USA 12-Point Signworks LLC Signarama Deerfield Beach Пользовательские знаки Каскадные знаки и неоновые каскадные знаки и рекламные знаки Neon Ace. Какой бы тип вывески или этикетки вы ни искали, иногда невозможно правильно передать ваше сообщение с помощью готового дизайна. Красивая акриловая деловая вывеска, изготовленная на заказ в определенном размере и цвете, идеально подходит для индивидуального названия компании или вывески с логотипом компании, предназначенной для стен приемной, офисных стен, входа в офис. Cynosure Custom Signs, Inc.Пользовательские деловые вывески, вывески для квартир и вывески для памятников для Техаса. Когда вы доверяете Seton во всех своих предупреждающих знаках, ваш бизнес будет полностью соответствовать требованиям и с меньшей вероятностью столкнется с нарушениями безопасности. Указанное вами значение недействительно. Sign King предлагает услуги печати на заказ, включая визитные карточки, брошюры, канцелярские товары на заказ, маркетинговые материалы, печать баннеров, вывески всех видов, плакаты, выставочные стенды и материалы для выставок. Изготовитель наружных бизнес-знаков на заказ — вам нужно убедиться, что у вас есть надлежащие вывески для вашего Мы специализируемся на нестандартных знаках, знаках безопасности (знаки ADA), указателях Египта, знаках событий и.Добавить в избранное. Согласно исследованиям, 8 из 10. Все наши вывески изготавливаются по индивидуальному заказу, чтобы соответствовать вашим потребностям, местоположению, индивидуальности бренда и бизнесу. Луис, штат Миссури, подписывает специалистов компании Excel Signs & Design. Создание индивидуальной вывески проще, чем вы думаете! Когда вы работаете с St. Независимо от того, ищете ли вы нестандартные деловые знаки, дворовые знаки или что-то особенное для вашего малого бизнеса, у нас есть множество идей для знаков, которые вам подойдут. Красивые нестандартные офисные вывески Изготовленная на заказ панель из полированного алюминия, вырезанные в обратном порядке буквы, полупрозрачная оранжевая подложка, освещенная светодиодной подсветкой.У вас никогда не будет второго шанса произвести первое впечатление! Убедитесь, что ваш бизнес выделяется с помощью специально разработанной вывески, которая привлекает новых клиентов и клиентов. Индивидуальные бизнес-вывески от Behrends Group. IS LED SIGN Поставщик производит индивидуальные бизнес-знаки, нестандартные вывески для внутреннего и наружного использования. Пользовательские бизнес-знаки. Магазины, поликлиники, магазины, поля для гольфа, гостиницы, офисы и многое другое. Наши дизайнеры создадут индивидуальную вывеску для вашего дома, офиса или бизнеса. Добро пожаловать в нашу историю Custom Business Signs.Создавайте индивидуальные вывески для внутреннего и наружного использования для вашего бизнеса или мероприятия! Мы предлагаем широкий выбор персонализированных вариантов вывесок, размеров, форм и материалов. Компания Toronto Custom Signs разрабатывает, производит и устанавливает высококачественные фирменные вывески Toronto для внутреннего и наружного использования. Мы проектируем и изготавливаем красивые, привлекающие внимание бизнес-знаки. (171) Продавец звезд. начало. Удовлетворение гарантируется. С нами можно быстро и легко создавать этикетки и бирки с индивидуальной печатью, карточки для заметок, подставки и многое другое. Наличие отличного, индивидуального и уникального делового знака может вывести вашу компанию на новый уровень. Индивидуальные вывески Акриловые вывески Вывески в вестибюле Вывески в офисах Дисплеи для торговых точек Настенные дисплеи Графика автопарка Отзывы клиентов через Google Мой бизнес-листинг Доминик помог мне с несколькими проектами для торговой выставки и предложил несколько отличных и свежих идей, которые помогут мне выделить мой стенд. Индивидуальные знаки безопасности и этикетки — лучший вариант в таких случаях. Правильный знак для вашего бизнеса в Талсе. О стикере. Вы много работали, чтобы построить свою компанию.ПУНКТ №: IS-0365. Персонализированные пользовательские бизнес-вывески и плакаты. Совершайте покупки в нашем большом каталоге продуктов и создавайте индивидуальные товары для следующего маркетингового розыгрыша или мероприятия для клиентов. Ваш бизнес — это ваши средства к существованию и отличное первое впечатление. Custom Business Signs. Независимо от формы, размера или применения, AlphaGraphics специализируется на изготовлении нестандартных вывесок, которые помогут вам привлечь внимание и привлечь клиентов. Убедитесь, что все знают ваше имя, воспользовавшись нашей фирменной печатью вывесок и баннеров. с днем ​​​​рождения баннер печать на виниловых баннерах на заказ, безусловно, подписывает виниловые баннеры на заказ баннеры на заказ бизнес-знаки.Получите индивидуальный дизайн по доступным ценам с доставкой к вашему порогу. Изготовленный на заказ знак настенного крепления. Индивидуальные бизнес-вывески для малых предприятий и крупных корпораций (PepsiCo, SBA). Вот идеи для бизнес-знаков своими руками, которые помогут вам начать. Знак деревянного поддона. Индивидуальные коммерческие вывески от Sign Craft означают, что вы каждый раз получаете идеальные вывески для своего бизнеса и целей. Профессионально выглядящие вывески для коммерческих офисных помещений Доступные нестандартные бизнес-вывески недалеко от Чикаго. Вывеска из стеклянной панели с рельефными золотыми металлическими буквами и слоганом, выгравированным на поверхности стекла 21243916592_a39b0c1ecb_b.Внутренние внешние знаки GA. Пользовательские бизнес-знаки. Как бизнес, который напрямую работает с конечными покупателями, такими как магазины и рестораны, вы должны уделять внимание привлечению потенциальных клиентов в свой магазин. Материал: Отделка-нержавеющая сталь. Если вам нужны специальные знаки для вашего бизнеса, выберите Знак Artcraft. Используйте нашу страницу дизайна, чтобы создать свою собственную бизнес-вывеску с текстом и логотипом. Высококачественные вывески. Низкие цены. Лучший сервис. Рекламируйте свой бизнес с помощью наших специальных вывесок и дисплеев. Информирование покупателей о специализированных услугах. Выберите материал для своих деловых баннеров и вывесок, который будет противостоять стихии природы.Позвоните нам сегодня по телефону 303-777-7771, чтобы поговорить с экспертом о вашем индивидуальном проекте вывески. Наши нормативные знаки информируют людей о химических опасностях, опасности оборудования, угрозах для здоровья, предупреждениях о дорожном движении и обо всем, что между ними. Есть тысячи готовых шаблонов на выбор, от современных до классических и. Хотите персонализировать/спроектировать свой собственный знак?. Посмотрите нашу витрину изготовленных на заказ вывесок для технологической отрасли. Рекламируйте свой бизнес с помощью одного из наших замечательных шаблонов дизайна и выделитесь из толпы уже сегодня!Они очень прочны для наружного показа, поскольку они. OnSight разрабатывает и печатает нестандартные вывески, деловые вывески, вывески для помещений и наружные вывески. И ваши внутренние и наружные знаки являются знаками. Начните повышать узнаваемость своего бренда уже сегодня с помощью наших индивидуальных решений!. Изготовленные на заказ деловые вывески — это ответы на многие ваши рекламные проблемы. Мы предлагаем специализированные услуги для местных клиентов, которые поддерживаются общенациональной сетью независимых компаний по производству вывесок. Ваша нестандартная деловая вывеска должна (как минимум) включать название вашей компании, логотип вашего бренда и / или цветовую схему, а также, возможно, год основания или короткий слоган. Ознакомьтесь с нашим выбором пользовательских бизнес-знаков, чтобы найти самые лучшие уникальные или изготовленные на заказ изделия ручной работы из наших магазинов вывесок. Купите вывески, которые помогут предотвратить распространение коронавируса в вашем офисе! Cynosure Custom Signs, Inc. Мы производим знаки высочайшего качества для вашего бизнеса. Мы можем создать любую вывеску, любого размера, и обычно у нас есть варианты практически с любым бюджетом. Индивидуальные деревянные знаки (и таблички для домашних животных) станут ОТЛИЧНЫМИ ПОДАРКАМИ!! Пожалуйста, заказывайте заранее, так как День отца и Рождество — самое загруженное время года.Нестандартная вывеска всегда выглядит очень оригинально и помогает привлечь к себе внимание. Создайте свой собственный бизнес-вывески сегодня! Позвоните нам прямо сейчас по телефону 416-903-9444. Холст — Знак дела интерьера офиса. Мы гордимся сотрудничеством с владельцами бизнеса и менеджерами по всему городу. Загрузите свой дизайн в онлайн-конструктор Signazon и создавайте бизнес-знаки с быстрой доставкой!. Инвестируйте в индивидуальные бизнес-вывески, чтобы создать впечатление о бренде, которое привлечет больше клиентов. 5 из 5 звезд. Получите лучшее предложение для Custom Business Signs из самого большого онлайн-выбора на eBay.Мы можем удовлетворить любые потребности, от установленного корпоративного стандарта, нового логотипа компании, вывесок для малого бизнеса до индивидуальных потребностей для специальных мероприятий. Таблички 4 x 8 футов Таблички 4 x 4 фута Таблички 32 x 48 дюймов Таблички 2 фута x 4 фута Таблички 2 фута x 2 фута Таблички 18 x 24 дюйма Таблички A-Frame Таблички Tall Boy Таблички 12 x 43 дюйма Всадники 6 «x 24» Наездники нестандартного размера Знаки Баннеры Наклейки Почтовые наборы. холст_деталь_1080x1080b. Ваш источник нестандартных бизнес-вывесок в Грузии. Индивидуальные вывески ADA для вашего бизнеса — доставка в любую точку США. Убедитесь, что ваш бизнес выделяется с помощью специально разработанной вывески, которая привлекает новых клиентов и демонстрирует, в чем именно состоит ваш бизнес. Лучшая в отрасли гарантия распространяется на все знаки Stewart. Как наружные, так и внутренние вывески можно использовать для школы, офиса, церкви. Ваша фирменная вывеска — это первое, что увидят потенциальные клиенты. Хотите произвести впечатление на своих клиентов, привлекая их с помощью своих внутренних бизнес-вывесок? Что ж, Marvel Custom Signs специализируется на предоставлении лучших нестандартных внутренних вывесок. Знаковая компания Signs Manufacturingô с тех пор производит качественные знаки на заказ или знаки по индивидуальному заказу, транспортные знаки, устанавливает знаки и обслуживает знаки.Instant Imprints предлагает футболки на заказ, фирменную одежду, вывески и баннеры, рекламную продукцию, вышивку, полиграфические услуги и многое другое. Каждый раз, когда они видят ваши знаки, они должны чувствовать, что ваш бизнес говорит с ними. Знаки дизайна недвижимости, политические знаки, газон / спортивные знаки и многое другое!. Мы работаем с компаниями со всей страны и гарантируем удовлетворение нашей работой. У нас есть готовые к покупке знаки и наклейки, или вы можете разработать свой собственный дизайн. Светодиодные и электрические вывески для бизнеса.Наш индивидуальный процесс подписи. Идеально подходит для привлечения клиентов в ваш бизнес. Холст — Офисный интерьер Деловой знак — Деталь. 1 сентября 2016 г. — Вывески, которые мы создали для представления бизнеса. Мы также являемся вашим лучшим поставщиком недорогих продуктов для вывесок и можем помочь вам с пакетами вывесок, которые действительно сделают ваш бизнес блестящим. Установлены с матовыми алюминиевыми стойками. Благодаря бесплатным профессиональным дизайнерским услугам, производственному циклу за один день, современному онлайн-инструменту для проектирования и лучшему в своем классе обслуживанию клиентов наша команда обладает уникальной квалификацией, чтобы помочь вам создать вывески, которые помогут достичь ваших бизнес-целей.#lolasdesignloft #businesssigns #a-framesign #sidewalksign #branding. Независимо от того, являетесь ли вы бизнесом, школой, некоммерческой организацией или спортивной командой, необходимость сделать себя более заметной имеет решающее значение для вашего успеха. Alpharetta Sign Company — это местная компания по производству знаков, которая предлагает высококачественные, изготовленные на заказ деловые знаки, баннеры и оклейку транспортных средств для клиентов в городе Альфаретта, штат Джорджия, и его окрестностях. Мы производим широкий спектр нестандартных вывесок для множества применений и имеем собственный отдел графического искусства.Позвоните в Apex Signs & Graphics сегодня по телефону (847) 380-1944, чтобы получить бесплатную консультацию по индивидуальному знаку. С 1982 года Massstar Signs предоставляет нашим клиентам комплексные дизайнерские решения. Доступен широкий ассортимент таможенных знаков, включая дворовые знаки, флаги, напольные наклейки, магнитные автомобильные знаки и многое другое. Наша опытная команда по брендингу будет сопровождать вас от начала проекта до установки. ваш заказ в течение 7-10 дней с момента получения вами утверждения дизайна «пруф». Наклейки с логотипом компании любого размера для использования для идентификации компании в комментариях, пародии, сатире, заявлениях о свободе слова, рекламных и рекламных целях. Это первое впечатление о вашем бизнесе, и исследования показали, что всего один знак может увеличить бизнес на 30%. Мы являемся дизайнерской и производственной компанией с полным спектром услуг, специализирующейся на вывесках и объемном брендинге. Наша цель в National Pen Company, от сумок и бутылок с водой до бизнес-ручек и наборов ручек, состоит в том, чтобы облегчить вам покупку рекламных ручек и рекламной продукции. БЕСПЛАТНАЯ НАСТРОЙКА на пользовательских бизнес-знаках! Получите деловые вывески и плакаты в Zazzle. Когда вы создаете пользовательские бизнес-знаки, ваши клиенты могут ассоциировать вас с этими знаками.Stewart предлагает вывески для магазинов малого бизнеса по всей стране и по всему миру! Почти 50 000 довольных клиентов с момента их запуска в 1968 году доказали, что эти деловые вывески не только оправдывают, но и превосходят высокие ожидания клиентов. изготовленные на заказ деловые вывески на заказ, специализирующиеся на крупноформатных металлических акриловых и деревянных вывесках для коммерческих зданий, сочетающих ваш логотип. Нужны нестандартные деловые вывески? Мы являемся профессиональным производителем светодиодных вывесок, трехмерных металлических вывесок, акриловых вывесок. Это просто: загрузите свой логотип или выберите дизайн из нашей галереи шаблонов и начните рекламировать свой бизнес или мероприятие!Индивидуальные бизнес-вывески состоят из множества различных элементов и компонентов, предназначенных для повышения качества обслуживания клиентов и продвижения ваших продуктов и услуг. SIGN Mobile Dial 866. Текущие бестселлеры. Индивидуальные вывески вашей компании многое говорят о вашем бизнесе. От светодиодных и электронных вывесок до сменных букв и переносных мигающих стрелок — у нас есть все для чего. С нашим 36-летним опытом работы в сфере производства вывесок вы не найдете никого, кто был бы так увлечен вашим проектом, как мы. Изготовленный на заказ акриловый знак с логотипом для бизнеса Персонализированный знак имени с логотипом для офисного магазина.ТуДеТасарим. Вы присоединитесь к сотням других ведущих компаний, которые выбрали нас в качестве своей компании для коммерческих бизнес-знаков. ПОЧЕМУ ЗНАК ТОЛЕДО? У вас есть всего несколько драгоценных секунд, чтобы запечатлеть и оставить след в сознании потенциального покупателя. Мы являемся производителем вывесок, специализирующимся на футболках, баннерах и деловых вывесках. Вывески для бизнеса и организаций от Outdoor Signs America! Независимо от того, представляете ли вы бизнес, церковь, школу или военную организацию, у нас есть широкий выбор вывесок, а также возможность создать идеальную вывеску для любых нужд.Signazon предлагает индивидуальные бизнес-вывески для внутреннего и наружного использования. Если в вашем бизнесе царит деревенская атмосфера или вам просто нужны классические вывески вокруг вашего бизнеса, вы можете сколотить несколько деревянных поддонов, а затем нарисовать свое сообщение спереди. Индивидуальная печать вывесок для вашего бизнеса. Пользовательские знаки и этикетки. Если вы ищете вывеску впечатляющих размеров, вы нашли лучшее, что может предложить индустрия вывесок. Заполните нашу форму, чтобы получить бесплатную цитату!. Каждое деловое учреждение должно обеспечить безопасный и удобный опыт для клиентов и клиентов.Семейный бизнес, которым владеет и управляет местный житель Колорадо. Наклейки на бампер. Наклейки на бампер — это дешевый и творческий способ позволить вашим клиентам помочь вам рассказать о своем бизнесе. Металлические бизнес-вывески на заказ Крупногабаритные металлические вывески для компаний, предлагающих лучшие продукты и услуги. Вы по-прежнему можете использовать стандартные заголовки знаков и меток, такие как предупреждения и уведомления, используя при этом свой собственный текст и символы. Пользовательские виниловые графические наклейки и буквы, которые легко наносятся на прицепы, грузовики, лодки, автомобили и окна.Как проще всего привлечь потенциальных клиентов в свой бизнес? Привлекательный деловой знак, конечно. Создайте профессиональную открытку для печати, не нанимая графического дизайнера. Индивидуальные фирменные знаки и графика — это инновационный метод демонстрации ваших уникальных продуктов, услуг и индивидуальности бренда, а также для привлечения новых потенциальных покупателей в ваш бизнес. Украсьте свое пространство индивидуальными вывесками! Это отличный способ получить преимущества пользовательских бизнес-знаков для внутреннего и наружного использования.Мы обеспечим вас всем: от проектирования до установки. Долговечные и доступные знаки Грузия. Индивидуальные бизнес-знаки. Для создания и укрепления вашего бренда, создания увлекательного и профессионального рабочего места, а также для увеличения трафика и повышения узнаваемости вашего бизнеса, решения Excel Signs & Design — это специальные знаки. Мы специализируемся на объемных знаках для предприятий, 3D-логотипах для интерьера или экстерьера, надписях на автомобилях и грузовиках, оклейке транспортных средств и баннерах. Заказать сейчас!. Вывеска с логотипом на заказ, вывеска с лазерной резкой, вывеска из дерева на заказ, логотип CarpenterFarmhouse 5 из 5 звезд (9 348).Хорошая вывеска может сделать все. Пользовательские знаки и графика для предприятий Buffalo. Пескоструйные вывески из уретана высокой плотности (HDU) Вывеска из пеноматериала и дерева, вывески с V-образной канавкой на станке с ЧПУ, фирменные логотипы и дисплеи в стиле вестибюля, вывески, награды и таблички, а также нестандартные вывески для архитектурных памятников.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.